蚕豆微核实验

方便面调料对蚕豆根尖细胞的遗传毒性研究姓名：周敏同组者：白霞、闫媛媛、郭凯红、胡雅琦、孔丽娜（生物系 生物科学102班学号2010131234 指导老师:郝雪峰）摘要运用蚕豆根尖细胞微核技术，以微核千分率和污染指数作为指标，研究豫竹方便面调料的水溶液对蚕豆根尖细胞的遗传毒性效应。豫竹方便面调料水溶液对蚕豆根尖进行污染处理后，通过观察微核的形态，记录微核的数目，测定蚕豆根尖细胞的微核率，并且在实验中以未经污染处理的蚕豆根尖作为对照，来比较测定该方便面调料的毒性.该方便面调料的水溶液具有轻度伤害，利用蚕豆根尖微核技术对其污染效应进行监测和评价既简便又比较可靠。GenotoxiceffectsofaqueoussolutionofViciafabaroottipcellsusingViciafabaroottipcellswithmicronucleus,themicronucleusrateandthepollutionindexasanindicatorofHenanbambooinstantnoodles.OnViciafaba,pollutiontreatment,Henanbambooinstantnoodlessolutiontoobservetheformofmicronuclei,thenumberofrecordedmicronucleimeasuredmicronucleusrateofViciafabaroottipcellsofViciafabaroottipandintheexperimentwithoutpollutiontreatmentasacontrol,tocomparethedeterminationofthetoxicityoftheinstantnoodles.aqueoussolutionoftheinstantnoodleswithamildinjury,theuseofmicronucleustheirpollutioneffectsmonitoringandevaluationofbothsimpleandrelativelyreliable.关键词蚕豆微核实验豫竹方便面调料 核变异引言微核（Nicronucleus，MCN）是真核生物细胞中的一种异常结构，它是由于细胞受到损伤后，由细胞分裂过程中丧失着丝粒的染色体断片或落后染色体产生的。这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。蚕豆根尖细胞微核技术已发展的相当成熟，具有较高的灵敏性和可能性，作为检测化学品遗传毒性的方法，得到了广泛应用［1-2］。而且在测定监测淡水污染物和检测化学诱变剂的研究已列入国家生物监测技术规范（水环境部分），并推广应用于大气、废水、土壤等的致突变活性检[3]。但目前关于检测食物的诱变活性报道较少。方便面作为一种速食小吃早已被人们接受，但其调料中的一些成分会在食用过程中渗透到血液中，导致人体细胞的染色体畸变。此外，含调料的废水排出后，会造成水环境方面的污染。因此，本文以蚕豆根尖作为实验材料，来探讨调料的遗传毒性，旨在为其存在的隐患提供一个参考依据。1、材料与用品1.1实验材料：蚕豆1.2实验器材和试剂显微镜、试管、蚕豆培养盆、纱布、毛巾、三角瓶、载玻片、盖玻片、溶有豫竹方便面调料的水、卡诺氏固定液（用乙醇和冰醋酸以3:1（v/v）混合配制）、盐酸（1mol/L）;Giemsa染液2、实验方法2.1浸种按实验需要选取大小均匀、饱满的蚕豆种子30粒，直接放入盛水的塑料盆中，在常温下浸泡1天，期间要注意换水。2.2催芽待种子吸胀后，用潮湿的纱布松散包裹置于盆中，纱布上载盖一层湿水的毛巾，催芽约1—2天。2.3处理根尖选取初生根生长良好的种子，放入盛有被测液的纱布中，进行根尖处理。另一些继续清水培养（作为对照组）。2.4根尖细胞恢复培养处理后的种子用自来水浸洗，洗净后再置入潮湿纱布中，再恢复培养一天左右。2.5取材、制片2.5.1固定

将恢复后的种子，从根尖顶端切下1cm长的幼根，用甲醇：冰醋酸（3：1）液固定24小时。2.5.2解离用蒸馏水浸洗固定好的幼根，吸净蒸馏水，加入6mol/L盐酸将幼根浸没，室温下酸解10分钟，幼根软化即可。2.5.3染色吸去盐酸，用蒸馏水浸洗幼根三次，每次1〜2分钟。滴加染液，染色20〜30分钟，截下1〜2mm左右长的根尖，加盖玻片，压片观察。3、结果记录及处理首先在显微镜低倍镜下找到分散均匀的分生区组织细胞，分裂相较多的部位，再转至高倍镜下进行观察。微核识别的标准：①微核大小在主核1/3以下，并与主核分离；②小核的着色与主核一致或稍浅；③小核形态呈圆形、椭圆形或不规则型。每一处理观察3个根尖，每个根尖数1000个细胞，统计其中含微核的细胞数，然后平均，即为该处理的MCN%，即微核千分率，以其作为指标按下述公式测出水样的污染指数，计算各测试样品（包括对照组）微核千分率（MCN%。），采用“污染指数”判别计算各测试样品微核千分率，可避免因实验条件等因素带来的MCN%。本底的波动。对于蚕豆微核实验中的有关计算可采用以下公式:微核千分率（MCN%o）二某测试样点（或对照组某测试样点（或对照组）观察到的MCN数微核千分率（MCN%o）二某测试样点（或对照组某测试样点（或对照组）观察到的MCN数）观察到的细胞数X1000%。污染指数（PI）=样品实测微核千分率平 均值标准水（对照组）微核千分率平均值根据《全国生物技术监测规范一蚕豆根尖微核技术》规定的污染指数划分标准，采用污染指数（PI）值来划分受污染程度。此方法可避免因实验条件等因素带来的MCN%本底的波动，标准见表1[5]。凡数值在上、下限时定为上一级污染。表1 污染指数PI值评价水质标准表TablelPollutionIndexforevaluationofwaterqualitystandardsvalueofPItable污染指数PI值 水质污染等级

0〜1.5基本无污染1.5〜2.0轻污染2.0〜3.5中污染3.5以上重污染表2 诱变剂诱发蚕豆根尖细胞产生微核统计表根尖实验组对照组123123微核数（个/1000）644233MCN%4.6672.667污染指数（PI）1.749显微镜下观察的微核实物图Observedunderthemicroscopeofmicro-verificationplans4、分析与小结由图可知：微核是丧失着丝粒的染色体片断，着色与主核一致，呈圆形或杏仁状的结构，有的近似椭圆形，微核游离于主核之外，大小在主核的1/3以下。由表可知：被污染的根尖MCN%为4.667,未处理的根尖MCN%为2.667。则污染指数（PI）为1749，属于轻度污染。由实验可知，方便面调料对人体细胞遗传物质损伤有潜在危险，其水样排入水体也对水环境有潜在的隐患，应引起人们的高度重视，在食用方便面时，尽量不放调料包，将其存在的毒性作用降到最低，达到安全、保护健康的作用。【参考文献】［1］ 钟晓芝，钱晓薇.明矶对蚕豆根尖和大蒜毒性效应的细胞遗传学比较研究】J］.江西科学，2003,21：101---105［2］ 张江丽，陈海峰，菅立峰，等硫酸镁对蚕豆根尖细胞遗传毒性的研究［J］，环境与健康杂志，2008,25(5)：420---422［3］ 王蕊芳，金志玉，孔祥生，吴玉平，李玉兰，罗明.抚仙湖无机污染物化学背景值及动物体内致突变性评定［J］动物学研究1999［4］ KongZM