流式细胞术在肿瘤学中的应用

流式细胞术在肿瘤学中的应用第一页，共三十四页，编辑于2023年，星期日内容流式细胞仪概念、原理及应用流式细胞术优势流式细胞术在肿瘤学中的应用第二页，共三十四页，编辑于2023年，星期日

流式细胞术（FlowCytometry）是利用流式细胞仪检测细胞或其它颗粒性物质的物理、化学特性。同时利用荧光染料,激光技术,单抗技术以及计算机技术的发展,大大提高了检测速度与统计精确性,而且从同一个细胞中可以同时测得多种参数,为生物医学与临床检验学发展提供了一个全新的视角和强有力的手段。

流式细胞术第三页，共三十四页，编辑于2023年，星期日流式细胞仪检测流程第四页，共三十四页，编辑于2023年，星期日流式细胞术优势（分析型）高速测定细胞，大样本计数检测稀有细胞多参数分析第五页，共三十四页，编辑于2023年，星期日FC500流式细胞仪第六页，共三十四页，编辑于2023年，星期日流式细胞术的应用检测特性：大小、颗粒度、细胞受体/分子、核酸(DNA/RNA)、蛋白……第七页，共三十四页，编辑于2023年，星期日肿瘤学中的应用肿瘤免疫肿瘤细胞周期和凋亡肿瘤干细胞的研究血液中循环肿瘤细胞的研究第八页，共三十四页，编辑于2023年，星期日肿瘤免疫学

天然免疫中性粒细胞嗜酸性细胞嗜碱性细胞单核细胞/巨噬细胞树突细胞:mDC-pDCNK细胞NKT细胞T淋巴细胞CD5+B细胞获得性免疫B细胞辅助性T细胞 Th1 Th2细胞毒T细胞调节性T细胞第九页，共三十四页，编辑于2023年，星期日淋巴细胞免疫分型

T细胞：CD3+CD4+(Th，Treg)CD8+(Tc)B细胞：CD19+NK细胞：CD3-CD56+第十页，共三十四页，编辑于2023年，星期日肿瘤细胞免疫特点CD3CD4CD8CD4/CD8NKCIK正常正常正常正常正常正常正常正常正常正常正常第十一页，共三十四页，编辑于2023年，星期日Th1Th2细胞因子分泌细胞测定Th1细胞：介导细胞免疫、细胞毒性T细胞的生长和活化、巨噬细胞的活化、介导迟发型过敏反应。其功能亢进将导致炎症慢性迁延，器官特异性自身免疫病，急性排异反应和接触性皮炎等的发病和免疫病理损伤。Th2细胞：介导体液免疫，促进B细胞的生长、活化和分化，是IgG1和IgE类抗体的转换因子，其功能亢进将导致特异性过敏反应，参与高IgE综合症和嗜酸性粒细胞增多症。第十二页，共三十四页，编辑于2023年，星期日Th1/Th2漂移与肿瘤免疫肿瘤可使Th1/Th2平衡向Th2偏移,而Th1/Th2偏移又会促进肿瘤的发展,故探讨Th1/Th2功能状况以判断肿瘤患者的免疫状态可为肿瘤生物治疗提供有效的理论依据。第十三页，共三十四页，编辑于2023年，星期日CD4+CD25+调节性T细胞调节性T细胞具有免疫抑制功能，在多种免疫性疾病中起重要的调节作用，成为近年来免疫学领域研究的重要内容。第十四页，共三十四页，编辑于2023年，星期日

许多研究表明：在实体肿瘤和血液恶性肿瘤患者中Treg数目增多。在乳腺癌、卵巢癌、肺癌以及肝癌等多种实体肿瘤患者外周血和肿瘤局部微环境中,Treg比例增高,且数目与患者肿瘤进展程度和预后、生存率呈负相关。血液恶性肿瘤患者中Treg数目呈肿瘤发展阶段相关性增长。但是,Treg增高的机制尚不清楚。去除Treg或封闭其抑制功能，可以增强抗肿瘤免疫反应。第十五页，共三十四页，编辑于2023年，星期日化疗作为一种重要的治疗肿瘤的方法,对肿瘤患者外周血中的Treg数目可产生一定影响。化疗药物可能通过抑制肿瘤微环境中血管生成,促进Treg凋亡,从而起到有效控制肿瘤的作用。但也有报道证明肿瘤患者接受化疗后,外周血中Treg数目增多。第十六页，共三十四页，编辑于2023年，星期日化疗究竟对Treg会产生怎样的影响,目前尚无定论,有待于进一步研究。因此,Treg在肿瘤治疗方面的应用成为研究的热点。如何清除或逆转Treg的抑制作用是肿瘤免疫治疗的一个关键问题。第十七页，共三十四页，编辑于2023年，星期日树突状细胞(DC)

DC控制体内免疫和耐受的平衡控制T,B细胞对可溶性抗原的反应影响产生免疫球蛋白的分类DC亚群分为MDC和PDCMDC诱导免疫应答PDC诱导免疫耐受第十八页，共三十四页，编辑于2023年，星期日树突状细胞流式分析阴性表达抗原设门Lin(CD3,14,19,20,56)/HLADR组合DC:Lin-/HLADR+DC亚群分析骨髓DC:CD11c+外周血DC:CD123+(IL3Ra)阳性表达抗原设门CD85k(ILT3)阳性设门仅在单核巨噬细胞及DC细胞表达比HLADR表达更具特异性

避免阴性设门DifferentiationofDCsubsets:外周血DC:CD123+(IL3Ra)骨髓DC:CD33+第十九页，共三十四页，编辑于2023年，星期日ILT3-PEILT3-PECD14+CD16-FITCCD33-PC5CD33-PC51234骨髓DC:CD14CD16/CD85K（ILT3）/CD33第二十页，共三十四页，编辑于2023年，星期日ILT3-PEILT3-PECD14+CD16-FITCCD123-PC5CD123-PC5外周血DC:CD14CD16/CD85K（ILT3）/CD123第二十一页，共三十四页，编辑于2023年，星期日生物免疫治疗

CIK细胞(cytokine-inducedkiller)是一群以CD3+T细胞为主的异质性细胞群体，包括CD3+CD56-、CD3-CD56+及CD3+CD56+三种亚群,主要效应细胞为CD3+CD56+细胞。

CIK细胞来源于外周血中的CD4-CD8+及CD4-CD8-T细胞。因其同时表达CD3和CD56两种膜蛋白分子，故兼有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞非MHC限制性杀瘤特点，是目前所知杀伤活性最强的一种免疫效应细胞。第二十二页，共三十四页，编辑于2023年，星期日CIK细胞治疗过程的评价治疗前病人免疫状况评价T亚群、NK、CIK、细胞因子是否适合做、能否能培养、值得做CIK采集MNCMNC数目、纯度、T亚群、NK、CIK数目及比例是否达到培养要求、调节细胞数MNC数目、T亚群、NK、CIK数目及比例、CD3、CD8活化状况培养培养是否达标、回输时机回输后T亚群、NK、CIK、细胞因子疗效评价、监测、下次治疗的时机CIK治疗程序FCM检测项目意义第二十三页，共三十四页，编辑于2023年，星期日CIK治疗前患者的免疫功能评价评价的项目免疫功能六项：CD3、CD4、CD8、CD4/CD8、NK、CIKTh1/Th2细胞因子

第二十四页，共三十四页，编辑于2023年，星期日FCM检测的方法

免疫功能六项试剂：CD45/CD4/CD8/CD3、CD3/CD56/CD45

标本类型：外周抗凝血评价的指标：CD3%、CD4%、CD8%、NK%、CIK%（也可以做绝对计数）第二十五页，共三十四页，编辑于2023年，星期日评价的意义1、CIK治疗的适应症：除外T细胞相关肿瘤、有可见包块2、是否适合做3、能否培养4、值不值得做第二十六页，共三十四页，编辑于2023年，星期日肿瘤细胞免疫特点CD3CD4CD8CD4/CD8NKCIK正常正常正常正常正常正常正常正常正常正常正常第二十七页，共三十四页，编辑于2023年，星期日采集物评价（培养体系）评价的项目

MNC数目、纯度、T亚群、NK、CIK数目及比例FCM方法评价评价的意义是否达到培养要求、调节细胞数第二十八页，共三十四页，编辑于2023年，星期日培养中的监测评价的项目1.MNC数目、T亚群、NK、CIK数目及比例、CD3、CD8活化状况2.培养体系中的细胞因子水平3.CIK细胞质量：坏死、凋亡状况评价方法：FCM评价的意义：培养是否达标、回输时机第二十九页，共三十四页，编辑于2023年，星期日确定回输时间及培养物是否达到要求:CIK细胞一般在7-9天要求:

CD3细胞大于90%

CD8细胞大于60%

CIK细胞0.5