动物生理学实验二鱼类采血技术与血细胞生理

血液组成当前第1页\共有22页\编于星期五\18点红细胞脆性与溶血：红细胞具有选择透过性，高渗失水，低渗吸水，低渗条件下或其他原因致使红细胞易破裂导致血红蛋白逸出称溶血。当前第2页\共有22页\编于星期五\18点【实验目的】1．学习鱼类采血的主要方法，掌握鱼类尾柄动脉采血技术；2．了解血液的组成，进一步深刻认识血浆与血清的主要区别。3．观察红细胞在不同浓度生理盐水中的细胞形态，进一步认识红细胞的渗透脆性。当前第3页\共有22页\编于星期五\18点【实验原理】当前第4页\共有22页\编于星期五\18点当前第5页\共有22页\编于星期五\18点当前第6页\共有22页\编于星期五\18点当前第7页\共有22页\编于星期五\18点当前第8页\共有22页\编于星期五\18点当前第9页\共有22页\编于星期五\18点当前第10页\共有22页\编于星期五\18点【实验对象】

鲫鱼【实验药品】

肝素钠溶液、MS-222溶液，生理盐水（1%，0.65%，0.3%）、蒸馏水。【仪器与器材】

解剖盘1个、毛巾1块，1mL注射器5个、烧杯（200mL）、1.5mL离心管（10个）、显微镜、载破片5片、滴管2支、拭镜纸。当前第11页\共有22页\编于星期五\18点【实验方法与步骡】1、血液采集

（1）实验鱼的麻醉

将鲫鱼先放入MS-222溶液的桶中，进行实验鱼的麻醉，当鲫鱼在麻醉剂溶液中缓慢运动或在桶中侧翻时，这时表明麻醉的程度比较适中。当前第12页\共有22页\编于星期五\18点鱼类麻醉前后对比示意图当前第13页\共有22页\编于星期五\18点

（2）取血的准备

将准备好的1mL注射器，一只不作任何处理，一只抽动活塞用肝素钠溶液将注射器内湿润，为血液的采集做好准备工作。当前第14页\共有22页\编于星期五\18点

（3）血液的采集

注射器的针头从臀鳍基部下针，将针头沿着垂直于尾柄的方向推进，使针头刚好尾部脊柱的下侧，此时保证针头的位置不随意挪动，右手大拇指和食指带动活塞向外运动，经大气压力将血液压入注射器中。当前第15页\共有22页\编于星期五\18点2、血清、血浆的制备①血清的制备

用未经肝素钠溶液处理的注射器所采集的血样，注入离心管后让其静止放置20分钟，待血液凝结后所析出的上清液即为血清。

当前第16页\共有22页\编于星期五\18点

②血浆的制备

经肝素钠溶液处理的注射器所采集的血样，注入离心管后放置1小时，或者3000转/分钟转速下离心5分钟，获得的上层淡黄色液体即为血浆。③比较血浆和血清两者存在的区别。当前第17页\共有22页\编于星期五\18点3、红细胞的渗透脆性①等渗观察

用滴管吸0.65%的生理盐水，吸1mL左右滴入1只新的离心管中，再将刚采取的新鲜血液（或去纤维蛋白血）用注射器轻轻推1-2滴到该生理盐水中，待轻轻颠倒混匀后，用吸管滴1滴到载玻片上，放于显微镜下观察细胞的形态。当前第18页\共有22页\编于星期五\18点

②渗透失水

用滴管吸1%的生理盐水，吸1mL左右滴入1只新的离心管中，再将刚采取的新鲜血液（或去纤维蛋白血）用注射器轻轻推1-2滴到该生理盐水中，待轻轻颠倒混匀后，用吸管滴1滴到载玻片上，放于显微镜下观察细胞的形态。当前第19页\共有22页\编于星期五\18点

③渗透吸水

用滴管吸0.3%的生理盐水，将1mL左右生理盐水滴入1只新的离心管中，再将刚采取的新鲜血液（或去纤维蛋白血）用注射器轻轻推1-2滴到该生理盐水中，待轻轻颠倒混匀后，用吸管滴1滴到载玻片上，放于显微镜下观察细胞的形态。

④脆性鉴定

再将新鲜血液滴入蒸馏水中，观察细胞的形态。当前第20页\共有22页\编于星期五\18点【注意事项】1．麻醉实验鱼时不要过度麻醉，会对血液的流动产生一定的影响，最终导致采血困难。同时，麻醉的时间也不能过短，否则影响采血操作。2．肝素钠溶液处理注射器时，一定要将注射器内部全部湿润，否则仍可能会产生凝血。当前第21页\共有22页\编于星期五\18点3．下针的位置有要准，一定要刺到脊柱腹侧，且针头不能轻易变动位