医学微生物学结核白喉杆菌

概述

为细长的杆菌，繁殖时有分枝生长的趋势。常规染色困难，但一经着色则有抗酸性。该菌生长慢，营养要求高，不产毒素，其致病性与菌体成分有关，所致疾病多为慢性且伴有肉芽肿。该属菌种类多，常分为三组：结核分枝杆菌（人、牛型），非结核分枝杆菌(包括4组，鸟-胞内)，麻风分枝杆菌。当前第1页\共有38页\编于星期三\21点结核分枝杆菌生长慢,人型、牛型非结核分枝杆菌I组生长慢,堪萨斯非结核分枝杆菌II组生长慢，癗疠非结核分枝杆菌III组生长慢,鸟胞内分枝杆菌非结核分枝杆菌IV组生长快速，龟分枝麻风分枝杆菌不生长当前第2页\共有38页\编于星期三\21点第一节结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis）当前第3页\共有38页\编于星期三\21点结核杆菌和结核病病发展史上的几个里程碑

1882年，德国Koch发现结核杆菌

1890年，德国Koch发现结核菌素

1921年，法国Calmettle和Guerin制成BCG1940年，进入结核病化疗时代当前第4页\共有38页\编于星期三\21点20世纪80年代以来结核病发病率呈明显上升趋势结核杆菌耐药菌株的出现

AIDS的流行对结核病防治的松懈，人口流动1993年4月23日WHO宣布“全球结核病紧急状态”1995年宣布每年3月24日为“世界防治结核病日”当前第5页\共有38页\编于星期三\21点流行病学简况:

世界：

1/3人口感染，70%在亚洲结核病人2000万，每年新增结核病患者900万，每年死于结核病的达300万。

中国：有5.5亿人感染，结核病人约600万，每年死于结核病的为25万。

居法定报告传染病首位!当前第6页\共有38页\编于星期三\21点CutaneoustuberculosisBonetuberculosisLymphnodetuberculosisRenaltuberculosisPulmonarytuberculosis当前第7页\共有38页\编于星期三\21点

一、生物学性状

1、形态染色：细长微弯的杆菌，经抗酸染色，菌体呈红色，其它呈蓝色。血培养中可形成荚膜。临床标本中常有L型变异出现(Much、莫赫颗粒)。2、培养特性：专性需氧，营养要求高，最适pH值低，生长缓慢，2-4w见菌落。

*罗氏(Lowenstein)培养基：菌落呈乳白或米黄颗粒状，干燥不透明，久则融合呈菜花状。*液体培养基：易形成有皱褶的菌膜（1-2w）。当前第8页\共有38页\编于星期三\21点结核分枝杆菌M.tuberculosis当前第9页\共有38页\编于星期三\21点

Resultofacid-faststaining:redbacilliinbluebackground当前第10页\共有38页\编于星期三\21点结核杆菌菜花状菌落当前第11页\共有38页\编于星期三\21点分子生物学：1998年，英、法、美、丹麦联合破译其群基因序列，4411kb，约4000个基因3、生化反应：热触酶试验有助于区别结核(-)和非结核分支杆菌(+)。4、抵抗力：含大量脂质，抵抗力强，抗干燥，耐酸碱;

但对湿热、乙醇及紫外线敏感。

5、变异性：结核杆菌易发生菌落、形态（L型）、毒力（BCG）、免疫原性和耐药性变异。当前第12页\共有38页\编于星期三\21点

二、致病性（一）致病物质：结核杆菌的致病性与细菌大量繁殖引起的炎症、菌体成分及代谢产物的毒性和机体对细菌的免疫损伤有关。

1、脂质（lipid）：脂肪酸或索状因子(cordfactor)

：

能破坏线粒体膜，影响细胞呼吸，抑制白细胞游走，引起慢性肉芽肿；

当前第13页\共有38页\编于星期三\21点

Cordformationinliquidmedia(cordfactor)当前第14页\共有38页\编于星期三\21点

磷脂(phosphatide)：能促使单核细胞增生，引起结核结节和干酪样坏死；蜡质D(wax-D)：能激发机体的IV型超敏反应；硫酸脑苷脂(sulfatide)：能抑制吞噬体与溶酶体的结合;

分枝菌酸(mycolicacid)：与菌体的抗酸性有关。

2、蛋白质：其主要成分结核菌素本身无毒，但与蜡质D结合注入机体能诱发超敏反应，结核结节形成和抗体。3、多糖(polysaccharide)：中性粒细胞浸润当前第15页\共有38页\编于星期三\21点结核结节(tubercle)当前第16页\共有38页\编于星期三\21点4、核酸：

rRNA激活特异性细胞免疫5、荚膜：保护菌体（有助于侵入巨噬细胞、抵抗有害物质等）当前第17页\共有38页\编于星期三\21点（二）所致疾病：主要介绍肺部感染

1、原发感染（primaryinfection）：首次感染结核杆菌，多见于儿童。常有肺门淋巴结大、干酪样坏死和结核结节的形成，也可经血到达多个脏器引起相应结核病，90%的原发感染可纤维化或钙化，但病灶中潜伏的菌可成为日后的感染源。

2、原发后感染（secondaryinfection）：

多见于成人或较大的儿童。主要有慢性肉芽肿，结核结节、纤维化、干酪样坏死当前第18页\共有38页\编于星期三\21点原发综合征原发病灶淋巴管炎淋巴结肿大肺门淋巴结结核当前第19页\共有38页\编于星期三\21点原发综合征当前第20页\共有38页\编于星期三\21点

三、免疫性1、免疫机制：传染性免疫，以细胞免疫为主。2、免疫与超敏反应：机体对结核杆菌产生免疫保护时也产生了超敏反应，二者均为T细胞介导。试验依据：结核菌素蛋白与蜡质D同时注入机体，可活化T细胞引起超敏反应；结核杆菌核蛋白体RNA注入机体，则获得免疫力。当前第21页\共有38页\编于星期三\21点*结核菌素试验（OT）：（1）机制：

IV型超敏反应（2）方法：是用OT(oldtuerculin)或PPD(purifiedProteinderivative)所做的皮内试验，48-72小时后观察。（3）结果：阳性红肿硬结直径>5mm

强阳性红肿硬结直径>15mm

阴性红肿硬结直径<5mm当前第22页\共有38页\编于星期三\21点结核菌素试验

PPD皮下注射当前第23页\共有38页\编于星期三\21点

(4)意义：

阳性表示已感染过结核杆菌，但不一定有结核病；

强阳性表示可能有活动性结核病；

阴性表示未感染过结核杆菌，但应排除感染初期或免疫力低下。当前第24页\共有38页\编于星期三\21点四、微生物学检查

1、标本：痰液、尿液、粪便、脑脊液等

2、直接涂片镜检：10万个每毫升痰液

3、浓缩集菌：3%HCl、4%NaOH

4、分离培养：分枝杆菌L型

5、动物试验：豚鼠腹股沟试验阳性

6、快速诊断：包括核酸和抗体当前第25页\共有38页\编于星期三\21点五、防治原则接种BCG：新生儿----7y----12y治疗：联合用药，分一线和二线药物当前第26页\共有38页\编于星期三\21点当前第27页\共有38页\编于星期三\21点棒状杆菌属

Corynebactreiump.173

该属菌多为条件致病菌，引起人类疾病的主要是白喉棒状杆菌，可引起白喉。当前第28页\共有38页\编于星期三\21点

白喉棒状杆菌属（C.diphtheriae）一、生物学性状

1、形态染色：菌体细长微弯，一端或两端膨大呈棒状；排列不规则，多呈X型、Y型或栅栏状；

G+，但染色不均匀，用Albert法染色后，有异染颗粒出现，具有鉴别意义；无荚膜和鞭毛，也不产生芽胞。当前第29页\共有38页\编于星期三\21点ModelfigureofAlbertstaining当前第30页\共有38页\编于星期三\21点ResultofAlbertstaining:bodyinblue

metachromaticgranules

inblack当前第31页\共有38页\编于星期三\21点2、培养特性：需氧或兼性厌氧，

（1）吕氏血清培养基（Loffler）:

形态典型，异染颗粒明显，菌落细小、湿润、呈灰白色、圆形突起；（2）亚碲酸钾(potassiumtellurite)培养基：

重型大灰色能分解淀粉不溶血

中间型中心黑边缘灰不分解淀粉不溶血

轻型小黑色不分解淀粉能溶血我国以轻型多见当前第32页\共有38页\编于星期三\21点3、抵抗力：较弱，对湿热敏感，对干燥、寒冷、日光的抵抗力较强。

当前第33页\共有38页\编于星期三\21点二、致病性（一）致病物质：

1、白喉毒素(diphtherotoxin,DT)：只有携带β-棒状杆菌噬菌体的菌株才能产生。

毒素的性质与作用机理：完整的毒素分子是酶原，须经胰酶分解为A、B

两个片段后才发挥毒性作用。

A链：193aa，具酶活性，稳定；

B链：342aa，不稳定。含穿膜区（173aa）和受体结合区（149aa）。当前第34页\共有38页\编于星期三\21点StructureofDiphtheriatoxin

FragmentB:37kD,binding

FragmentA:21kD,toxicity当前第35页\共有38页\编于星期三\21点作用机制：白喉毒素经受损的粘膜细胞入血或淋巴循环，吸附于多个脏器的组织细胞表面后裂解，B片段与细胞膜表面的受体结合，A片段进入细胞内，使细胞内延伸因子2（elongationfactor2,EF-2）灭活，影响蛋白质的合成。白喉毒素有剧毒，但人和鼠的正常细胞对该毒素有一定的耐受性，而肿瘤细胞则高度敏感，据此有人提出生物导弹法治疗肿瘤。当前第36页\共有38页\编于星期三\21点2.索状因子(cordfactor)和K