体检培训血红蛋白

一、项目简介（一）血红蛋白评价贫血的标准（二）血红蛋白的检测原理当前第1页\共有67页\编于星期四\15点年龄（岁）血红蛋白单位：（g/L）6～59月龄<1105～11岁<11512～14岁<12015岁以上女生<12015岁以上男生<130（一）血红蛋白评价贫血的标准表1WHO2001年诊断贫血的血红蛋白水平当前第2页\共有67页\编于星期四\15点（二）血红蛋白的检测原理

方法：氰化高铁血红蛋白法

原理：

血红蛋白铁氰化钾高铁血红蛋白

氰化钾

氰化高铁血红蛋白氰化高铁血红蛋白：显红色，极为稳定。当前第3页\共有67页\编于星期四\15点二、检测流程（一）试剂（二）采血（三）检测当前第4页\共有67页\编于星期四\15点（一）试剂

采用文齐氏液。

文齐氏液(Hb试剂)为浓缩50倍的贮备液，用时加蒸馏水稀释50倍。如：配制1000ml工作液时，取文齐氏浓缩液20ml。当前第5页\共有67页\编于星期四\15点文齐氏液当前第6页\共有67页\编于星期四\15点（1）配制方法：

取棕色容量瓶，先加蒸馏水800ml，后用吸量管吸取文齐氏液20ml，最后加蒸馏水直至1000ml刻度线，混匀即可。配置好的文齐氏液,应为清晰透明的淡黄色溶液。当前第7页\共有67页\编于星期四\15点棕色容量瓶（1000ml）当前第8页\共有67页\编于星期四\15点（2）注意事项：为保证配制试剂浓度准确，必须采用标准量器操作。取文齐氏液应用吸量管（5ml或10ml）；加蒸馏水稀释应用容量瓶（1000ml棕色）。

容量瓶、吸量管须每3年计量一次；有计量所出具的计量报告。当前第9页\共有67页\编于星期四\15点配液量器当前第10页\共有67页\编于星期四\15点当前第11页\共有67页\编于星期四\15点（3）试剂保存文齐氏浓缩液应储存于4℃冰箱，有效期2年。稀释后的试剂应储存于棕色玻璃瓶中，一般室温可存放一个月。若暴露于光线，则试剂不稳定；受冰冻可破坏分解。如试剂出现浑浊则不能用。当前第12页\共有67页\编于星期四\15点棕色磨口瓶(2000ml)当前第13页\共有67页\编于星期四\15点（二）采血1.加样：用瓶式分液器加样，每批加样前，使用5ml容量瓶校正。当前第14页\共有67页\编于星期四\15点瓶式分液器的校正方法：（1）分液器刻度调整到2.5ml；连续按动分液器以排出管路中的空气。（2）按动分液器二次（即为5ml），将液体加入5ml容量瓶中，观察凹液面与容量瓶刻度是否水平。（3）呈水平则分液器准确可用；反之须调整分液器，再次校正，直至凹液面与刻度线呈水平。当前第15页\共有67页\编于星期四\15点2.器具：（1）消毒棉签；（2）75％酒精；（3）一次性采血针；（4）微量血红蛋白吸管（10μl或20μl）；（5）一次性塑料试管（5ml）；（6）试管塞；（7）利器盒当前第16页\共有67页\编于星期四\15点17当前第17页\共有67页\编于星期四\15点18当前第18页\共有67页\编于星期四\15点当前第19页\共有67页\编于星期四\15点当前第20页\共有67页\编于星期四\15点3.

步骤（1）用瓶式分液器将2.5ml文齐氏液加入试管内；（2）用酒精棉签消毒左手无名指；（3）待酒精挥发后，用采血针向左手无名指指尖迅速垂直刺入，深约2～3mm，让血液自然流出；（4）去掉第一滴血；（5）用血红蛋白吸管吸血至10μl刻度，擦净管壁外余血；（6）置于盛有2.5ml文齐氏液的试管中，冲洗干净并混匀。（7）用无菌棉签按压止血。（8）血样避免太阳光直射，放置至少15分钟后比色。当前第21页\共有67页\编于星期四\15点22当前第22页\共有67页\编于星期四\15点23当前第23页\共有67页\编于星期四\15点24当前第24页\共有67页\编于星期四\15点当前第25页\共有67页\编于星期四\15点26当前第26页\共有67页\编于星期四\15点当前第27页\共有67页\编于星期四\15点当前第28页\共有67页\编于星期四\15点当前第29页\共有67页\编于星期四\15点×当前第30页\共有67页\编于星期四\15点√当前第31页\共有67页\编于星期四\15点√×当前第32页\共有67页\编于星期四\15点补充混匀照片当前第33页\共有67页\编于星期四\15点当前第34页\共有67页\编于星期四\15点4.质量控制要点：（1）体检前：

使用定值溶血液（盲样），对采血人员进行岗前培训与技术考核。

此考核亦为中心实验室对各点实验室检测能力的技术考核。当前第35页\共有67页\编于星期四\15点当前第36页\共有67页\编于星期四\15点表2血红蛋白检测质控考核记录表编号Hb值（g/L）12345678910平均值区县：___________

单位：____________

检测日期：______________

质控品编号：___________________

质控品真值：___________________

采血者：________

检测仪器：________________

检测者：___________

是否经过计量部门检定：（是否）

检测仪器最近检定日期：________

当前第37页\共有67页\编于星期四\15点

表3

采血人员考核记录表定值血Hb值

100

采血人赵敏敏考核人孙颖编号Hb值（X）11032103310441045108610171048104911210108当前第38页\共有67页\编于星期四\15点对考核结果是否合格的判定（1）X的均数

X＝103+103+104+104+108+101+104+104+112+10810

＝105.1（2）

DI＝1.02

（3）判断标准：

DI≤0.5优秀0.5<DI≤1.0良好

1.0<DI≤2.0及格2.0<DI≤3.0不及格，应注意判断：采血人员赵敏敏及格当前第39页\共有67页\编于星期四\15点4.质量控制要点：（2）体检过程中：

①采血员操作步骤质控：a.左手无名指

b.酒精完全挥发

c.擦去第一滴血

d.局部勿用力挤压

e.采血准确到刻度

f.采血管内无气泡

g.擦净管壁外余血

h.管内血液无残留

i.试管编号与被采血者编号统一j.分液器用5ml容量瓶校准

k.样品避光保存当前第40页\共有67页\编于星期四\15点

表4

质量控制人员应对采血员的现场采血过程进行监督日期

2005.3.22

学校大兴榆垡中学质控员符筠

项目采血人崔丹赵敏敏邢慧琴左手无名指√√√酒精完全挥发√╳√擦去第一滴血√√√局部勿用力挤压√√√采血准确到刻度√√╳采血管内无气泡√√√擦净管壁外余血√√√管内血液无残留√√√试管编号与被采血者编号统一√√╳加样器用5ml容量瓶校准√√√样品避光保存√√√当前第41页\共有67页\编于星期四\15点②平行样质控法：

平行样数占总样本数的5％。

具体方法：同一采血员对同一对象采2个血样，由实验室检测后，如两个血红蛋白值在T±0.05T范围内，则采血员合格；反之，则为不合格。若不合格，要求质量控制人员对采血员的采血过程进行检查，找出发生错误的原因并立即纠正。当前第42页\共有67页\编于星期四\15点表5血红蛋白平行样测定质量控制表日期

2005.3.22

学校大兴榆垡中学采血人崔丹

编号血红蛋白值复测值范围是否合格20149145141.6<149<156.5合格40140146133<140<147合格60143132135.9<143<150.2不合格80130117123.5<130<136.5不合格100123120116.9<123<129.2合格当前第43页\共有67页\编于星期四\15点5.注意事项（1）环境：选用明亮、通风的室内场地，面积适宜，保证学生进出安全；最好有上下水，方便工作人员随时清洗双手；桌上铺治疗巾或医用中单，防止交叉感染。（2）保护学生：最好配置椅子，学生采血后稍作休息，防止晕针；请校医提前提醒学生洗手，更有效的保证酒精消毒的效果；嘱咐学生针刺2小时内，保持手指清洁，不接触水。提前为学生预备好糖水，以备学生突发晕针。当前第44页\共有67页\编于星期四\15点5.注意事项（3）采血过程：若血液不易流出，可由掌端向指端轻轻按摩，切勿局部用力挤压。核对好姓名、编号等信息。如有不愿采血的学生，不要过分勉强。（4）血样储存：氰化高铁血红蛋白虽性质稳定，但为避免水分蒸发，最好在当天完成检测。如不能当天检测，应使用试管塞塞紧，置暗处可存储12小时。如超过12小时，应放在4℃冰箱中，检测前须平衡至室温并摇匀。

当前第45页\共有67页\编于星期四\15点5.注意事项（5）医疗用品：棉签、一次性采血针、微量血红蛋白吸管要保证在消毒保质期内，不可随便打开或长久暴露。配制好的试剂避光保存。（6）医疗垃圾处理：按照卫生部颁布的《医疗卫生机构医疗废物管理办法》进行处理。利器盒盛装不得超过容量的3/4，密封后与其他医疗垃圾一并委托专业机构集中处理。当前第46页\共有67页\编于星期四\15点（二）检测1.仪器可见光分光光度计光径1cm比色杯

当前第47页\共有67页\编于星期四\15点48当前第48页\共有67页\编于星期四\15点分光光度计每年计量检定一次，有计量报告书。当前第49页\共有67页\编于星期四\15点

比色杯检测：

在可见光分光光度计750nm处比色（蒸馏水作空白管），吸光度小于0.003时可以使用。当前第50页\共有67页\编于星期四\15点（二）检测2.仪器使用注意事项：（1）放置仪器应远离电磁干扰；避免阳光直射。（2）开机前先确认仪器样品室内没有物品遮挡光路。（3）备有稳压器以保证电压的稳定。（4）开机预热至少20分钟。（5）自检过程中不可开盖，直到屏幕显示“100.0”和“546”。（6）所用比色杯应检查其均一性，去除不符合要求的比色杯。（7）比色杯透光部分不能有指印、溶液痕迹，被测溶液中不能有气泡、悬浮物。（8）仪器开机后使用血红蛋白标准液检测，久放或搬动后须四个浓度标准液校正。当前第51页\共有67页\编于星期四\15点3.仪器的质控（1）分光光度计的校正

氰化高铁血红蛋白标准液：

含50、100、150、200g/L四种浓度，每支标准约10ml。

当前第52页\共有67页\编于星期四\15点53当前第53页\共有67页\编于星期四\15点OD真相相应Hb真相误差允许范围ODHb0.136500.133~0.13949~510.2721000.267~0.27798~1020.4081500.400~0.416147~1530.5442000.533~0.554196~204

表6可见光分光光度计波长540nm，光径1.0cm标准液允许误差当前第54页\共有67页\编于星期四\15点（2）校正：血红蛋白含量与光密度符合下述公式：Hb(g/L)=OD×367.7若光密度值超出误差允许范围，则公式中的常数（367.7）需要校正。校正公式为：

常数k=（∑光密度真值/∑光密度度数）×367.7当前第55页\共有67页\编于星期四\15点表7举例：某台分光光度计OD真相Hb真相ODHb误差允许范围ODHb0.136500.13047.80.133~0.13949~510.2721000.25593.760.267~0.27798~1020.4081500.380139.730.400~0.416147~1530.5442000.515189.370.533~0.544196~204当前第56页\共有67页\编于星期四\15点

OD真相值和

0.136+0.272+0.408+0.544＝1.360此分光光度计OD值之和

0.130+0.255+0.380+0.515＝1.280常数＝（1.360/1.280）×367.7＝391.1则此台分光光度计测样品时，其光密度读数乘391.1为血红蛋白值。（2）校正：当前第57页\共有67页\编于星期四\15点表8

校正后结果ODHb真相校正前Hb（K值＝367.7）校正后Hb（k值＝391.1）误差允许范围ODHb0.1305047.850.840.133~0.13949~510.25510093.7699.730.267~0.27798~1020.380150139.73148.620.400~0.416147~1530.515200189.37201.420.533~0.544196~204当前第58页\共有67页\编于星期四\15点（2）氰化高铁血红蛋白标准液质控法：采用单一浓度血红蛋白标准液（中间值）；

仪器每测20个样品做一次质控；每次质控，连续测2次血红蛋白标准液；记录标准液测定值，画出曲线。当前第59页\共有67页\编于星期四\15点曲线的绘制：

以测定结果为纵坐标,测定次数为横坐标。确定靶值线；警告线；最大容许线。四个界限点的确定方法：

T±0.05T为上下警告界限，T±0.08T为最大界限。当前第60页\共有67页\编于星期四\15点124.2120.8115.0（T）109.2105.8当前第61页\共有67页\编于星期四\15点表9

定值溶血液质控法记录表时间

标准液浓度

100g/L操作者孙颖

编号第一次第二次ODHbODHb10.263990.2639920.263990.2639930.263990.2639940.263990.2639950.2