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目录第一章总论 11.1项目概况 11.2编制依据 21.3项目承办单位简介 3第二章项目建设的背景及必要性 42.1项目背景 42.2项目建设的必要性 5第三章市场分析 73.1小麦市场分析 73.2蔬菜市场分析 11第四章建设条件和场址选择 144.1项目区概况 144.2自然生态 144.3交通概况 154.5场址选择 16第五章技术方案 175.1研发中心建设指导思想 175.2研发中心建设方案 185.3公用工程 215.4基本仪器设备与用品 235.5组培技术方案 235.5.1培养条件 235.5.2培养基的成分 275.5.3培养基的种类 315.5.4培养基的选择 325.5.5培养基的配制 355.5.6激素母液的配制 375.5.7有机营养成分 385.5.8无机营养成分 395.5.9碳水化合物 425.5.10植物生长调节剂 445.5.11琼脂或其他支持物 475.5.12其他添加剂 495.5.13培养基的配制 535.5.14激素母液的配制 555.5.15灭菌 565.5.16灭菌原理 655.5.17接种 67第六章节能措施 766.1原则与要求 766.2节能措施 77第七章节水措施 797.1原则与要求 797.2节水措施 80第八章环境影响评价 -81-8.1场址环境条件 -81-8.2环境影响分析 -81-8.3环境保护措施方案 -81-第九章劳动安全卫生 -83-9.1设计依据 -83-9.2安全措施方案 -83-9.3消防设施 -84-第十章项目组织机构与人力资源配置 -86-10.1组织机构 -86-10.2人力资源配置 -87-第十一章项目管理及实施进度 -88-11.1项目管理 -88100-11.2项目建设工期实施进度安排 -88-第十二章投资估算与融资方案 -90-12.1建设投资估算 -90-12.2流动资金估算 -91-12.3总投资估算 -91-第十三章工程招标方案 -92-13.1总则 -92-13.2招标内容 -93-第十四章财务评价 -94-14.1成本分析 -94-14.2销售收入 -94-14.3税金 -94-14.4项目财务评价 -95-14.5盈亏平衡分析 -96-14.6财务评价结论 -96-第十五章结论与建议 -97-15.1结论 -97-15.2建议 -97-第一章总论1.1项目概况1、项目名称:东方现代农业有限公司良种研发中心建设项目2、项目性质:新建3、项目承办单位:安徽省太和县东方现代农业有限公司4、项目负责人:5、建设地点:太和县双浮镇高寨村6、建设规模和建设内容为改善太和县及邻近区域的自产小麦、玉米、小西红柿、长箭辣椒、丝瓜、苦瓜等粮食与蔬菜良种严重不足的现状,促进农民增收,扩大公司规模,提高产品竞争力,振兴和繁荣太和县经济。东方现代农业有限公司计划在太和县双浮镇高寨村建设安徽省太和县东方现代农业有限公司良种研发中心。项目建设研发大楼2320平方米,其中化学药品室220平方米、配赔养基室244平方米、灭菌室209平方米、接种室95平方米、无菌培养室160平方米、专家办公室464平方米、专家住宿区928平方米;引进超净工作台、高压灭菌锅、小推车、精密电子天平、电子天平、酸度计等种子组培设备及其他配套设施;并配套供电7、项目投资及资金筹措项目总投资1000万元,其中建设投资849.91万元,流动资金150.09万元。项目所需资金计划申请财政资金600万元,项目单位自筹400万元。8、效益分析项目建成后,年完成2-5种农作物良种的研发工作,预计年研发收入和中试生产的销售收入可达1000万元,投资利润率34.59%,内部收益率27.73%,税后净现值1162.12万元,盈亏平衡点16.97%,投资回收期5.29年(含建设期)。本项目的实施可全面推动太和县乃至全省农业种植产业的发展,有利于太和县农业结构优化升级与农村经济的进一步繁荣。可带动城乡相关行业发展,增加社会就业机会。增加项目区农民的经济收入。1.2编制依据1、有关资料(1)安徽省太和县东方现代农业有限公司提供的可行性研究基础资料;(2)安徽省太和县东方现代农业有限公司关于编制良种研发中心建设项目可行性研究报告的委托合同书。2、主要政策法律及规范标准(1)中共中央2010年1号文件,以及国家促进农业和农村经济结构调整,推进农业产业化进程,提高农业综合生产能力的有关政策。(2)国家发展改革委、建设部(发改投资[2006]1325号文)发布的《建设项目经济评价方法与参数》(第三版);1.3项目承办单位简介安徽省太和县东方现代农业有限公司位于双浮镇双兴村,105国道东侧,原蔡路以北,现有职工118名,高级农艺师5名,是一家集规模种植、温室工程、蔬菜加工、无公害菜果配送、新品种研发、良种繁育于一体的省级农业产业化龙头企业。公司始建于2006年,注册资本600万元。在省、市、县各级政府和职能部门的关心和大力支持下,2008年公司被评为“安徽省农业产业化龙头企业”、“安徽省最具投资价值成长型企业”、“安徽省蔬菜10强”,并顺利通过ISO9001:2000国际质量管理体系认证。蔬菜基地是安徽省农委认定的无公害农产品生产基地、安徽农业大学认定的“教学试验基地”,被中国企业诚信调查委员会和中国企业产品质量品牌管理中心确认为“重质量、守诚信优秀示范单位”。第二章项目建设的背景及必要性2.1项目背景太和县位于安徽省西北部,地处黄淮平原腹地,位于阜阳、亳州两市之间,面积1822平方公里,人口162.7万。京九铁路、漯阜铁路穿境而过,境内建有7个车站;105国道、308省道和南洛高速公路在县内纵横交织,颍河黄金水道流经太和40多公里,县城距阜阳4C级机场和京九铁路阜阳编组站仅37公里,形成了水陆空立体交通网络。城市建设日新月异,城市功能不断完善,"六纵六横"的道路框架使城区面积扩展到12平方公里,常住人口增加到15万。改革开放以来,太和县步入持续快速发展阶段,各项事业取得了历史性的成就。“十五”期间,太和县的主要经济指标年均增速达10%以上。太和县是农业大县,也是粮食生产先进县,特别是小麦生产面积大、产量高,常年播种9.3万hm2,单产已突破6375kg/hm2。但目前太和县小麦种子市场仍存在很多问题:太和县小麦生产品种多、乱、杂,用种基本全靠外调,这不仅加大了成本,增加了农民负担,而且调进的种子质量大多存在着这样那样的问题。县内及周边地区善无良种研发中心,无法自行培育小麦良种,目前太和县内农业生产大多从河南引进小麦种子,导致每年约有1800万元的资金外流。作为诞生于太和,成长于太和,腾飞于太和的本项目的发展商太和县东方现代农业有限公司敏锐地捕捉到了这一巨大商机。为适应市场的需要,经过调研,决定在太和县双浮镇高寨村建设良种研发中心建设项目。该项目从一开始酝酿就得到了各方面的大力支持,太和县县委、县政府的相关领导对项目的进展情况十分关心,要求精心准备尽快实施。经过整改仍达不到认证标准的,有关部门将取消企业的生产经营资质。2.2项目建设的必要性1、项目建设是带动太和县小麦及蔬菜良种种植,增加农民收入的需要。由于县内及周边地区善无小麦及蔬菜等农作物良种研发中心,无法自行培育小麦良种,目前太和县内农业生产大多从河南引进小麦种子,导致每年约有1800万元的资金外流。本项目的建设,为太和县及周边地区提供小麦良种,可将小麦良种繁育基地提高到70万亩,优化了产业结构,极大的促进了产业发展,同时为太和县节约了约1800万元的小麦种子外流资金。由于价格较河南种子偏低,而且良种质量高,为农民省钱的同时,带动太和县农业增产,提高农民收入,户均增收200元。2、是以新产品开发带动企业经济效益腾飞的需要根据市场发展的要求,企业要腾飞,要在市场竞争中立于不败之地,必须要有超越精神,必须在产品的开发中生产一代,储备一代,开发一代。现有品种的市场销售价格因为竞争的激烈而一直低价操作,只有新产品,才能带动价格的正常运作,才能为企业创造出应有的经济效益,增强企业的发展后劲。3、为我国现代农业发展做出贡献现代农业实质上是以现代科学技术及其应用水平、现代工业技术及其装备水平、现代管理技术及其管理水平为基础的农业。研发中心项目建设就是在着重发展现代农业的这几项基础性工作上,不断强化和提高,为我国现代农业发展提供实践经验做出应有贡献。4、为当地人民就业提供机会项目的建设,不仅需要专业技术人员、管理人员,而且也需要普通职工、杂工等。当工作繁忙之时可以从当地就地用人,利用廉价劳动力,降低成本,同时为当地人民就业提供机会。本项目直接就业人数100人,可间接带动数千人就业。5、是带动相关产业发展、地方经济增长、加快实现富民强县战略的需要太和县是农业大县,如果没有农民的富裕,就没有全县人民的富裕;没有农村经济的持续增长,就难以实现富民强市的战略目标。带动农民致富是事关农村改革发展稳定、牵动全县经济增长的系统工程。增加农民收入,不但有利于加速农村工业化、城镇化发展,实现全社会资源合理配置及城乡经济结构优化提升,而且在思想观念、生活方式、文化素质等方面发生了积极的变化,实现开拓农村市场、扩大内需,不仅为全县经济发展提供了更广阔的市场空间和更大的经济拉动力,有利于可持续发展,而且有效地促进了国民经济良性循环和社会协调发展。第三章市场分析3.1小麦市场分析1、国内夏粮连续第六年增产,供给充足,市场受政策调控以稳为主(1)2009年我国夏粮实现连续6年丰收,面积、产量双增,单产持平。尽管2008年冬以来我国先后遭遇了冬麦区特大旱灾、小麦条锈病严重发生等情况。但由于后期国家政策及各项技术管理措施及时到位,而且3月后出现有效降水,2009年我国夏粮再获丰收,且面积和产量双增,单产持平,优质率提高。据农业部农情调度显示,预计夏粮总产超过1225亿kg,实现新中国成立以来首次连续6年增产:夏粮面积比上年增加48.67万hm2,实现连续5年恢复性增加;单产与历史最高的2008年基本持平;夏收小麦优质率(指优质小麦品种推广面积)达67.9%,提高4.7个百分点:主产区贡献突出,全国增产量的3/4来自11个夏粮主产省。小麦植面积最大的3个省河南、山东和河北种植面积分别为526.13万hm2、354.47万hm2和242万hm2,预计产量分别为305亿kg、202.5亿kg和124亿kg,预计产量分别占全国总产量的24.9%、16.5%和10.1%,3省合计占51.5%。(2)国内供求平衡有余,政策调控下市场将保持整体平稳综合各方面信息,全年小麦产量继续增加,库存进一步增加,存在一定的供给过剩压力。展望近期国内小麦市场。由于面粉的季节性消费淡季还会持续一段时间,国家继续公开竞价销售以前年度的最低收购价小麦,加工企业已不担心原料采购问题,会将资金、库容用于新麦收购,预计后期陈麦市场稳中趋弱的局面短期内难以改变。从新麦市场看,近期由于北方高质量小麦陆续上市,以及加工企业新麦配用比例增加,采购量加大,新麦价格看涨。但随着新麦上市供应量增加。加上收储的陈小麦还有2000万吨左右没有售出,新麦价格将会受到供应和库存充足的双重压力,但在国家托市政策的支撑下,后期新麦市场价格将在高位小幅波动。整体看,2009年国家提高最低收购价水平,农民对价格较认可,售粮积极性较高。江苏省粮食局分析认为农民售粮积极性前所未有,收获后马上卖粮的农户达70%-80%,而2008年约一半农户到春节前后才卖。2008年江苏省托市收购420万吨,2009年有望超过500万吨。9月后,消费逐步转人旺季,小麦需求增加。国家也会根据市场供需状况合理调控最低收购价小麦的投放量。稳定市场。(3)小麦出口有望增加我国夏粮生产实现连续6年丰收,为缓解国内粮食供给压力,促进稳定外需,调整出口结构,保证农民收入持续增长,政府及时采取措施促进粮食出口贸易。财政部6月22日公布,从7月1日开始取消小麦、大米、大豆等产品的出口关税。涉及小麦的具体是取消硬粒小麦、种用小麦、其他小麦及混合麦3%的暂定出口关税率,小麦或混合麦的细粉、小麦粗粒及粗粉小麦团、小麦淀粉8%的暂定出口关税率。此次关税调整是2009年以来3次上调出口退税率之后首次调整出口关税,距离上次调整(2008年12月1日)已有半年时间。在此政策影响下,预计下半年国内小麦出口有望进一步增加,但由于2009年全球小麦产量创下历史次高水平,供应较为充足,国际小麦价格大幅下跌,我国小麦价格竞争优势不再,小麦出口增长空间较为有限。2、全球小麦小幅减产,供给能够满足需求,价格受多因素影响而波动由于2008/09年度世界小麦产量达到创纪录的6.85亿t(联合国粮农组织2009年6月),全球小麦供求关系明显改善,导致国际小麦价格自2008年下半年持续回落,9月开始低于上年同期。受预期小麦价格下降以及生产投入增加等因素影响,2009/10年度,一些主产国如美国和欧盟小麦播种面积减少,产量下降。粮农组织预计,2009年全球小麦产量将达到6.56亿吨,比上年下降4%,但仍高于过去5年的平均水平,为历史次高产量。从几个小麦主产国看,美国由于恶劣天气影响,北部地区春小麦播种延迟,预计春小麦与冬小麦播种面积共下降7%,2009年小麦总产将下降19%,至5500万吨;加拿大虽然播种面积仍维持2008年水平,但由于小麦播种以及初期生长时主产区天气恶劣,可能会对单产造成一定影响,2009年总产将下降10%,至2600万吨:在欧洲,由于东部地区主产国小麦播种面积下降,预计欧盟2009年小麦产量为13900万吨,比上年下降8%;俄罗斯尽管冬小麦播种面积有所增加,但春小麦播种面积下降会使小麦整体播种面积减少,2009年小麦产量预计会比上年下降14%,至5500万t;乌克兰恶劣的春季气候大大降低了作物生长预期,总产可能会比上年大幅度下降:而其他一些国家,如伊朗、阿根廷和巴基斯坦,小麦产量将有所增加,但并不足以弥补全球小麦产量的减少。粮农组织预计2009/10年度全球小麦消费将为6.55亿t,比2008/09年度增加1.6%,并高于过去10年全球小麦消费量的长期趋势近2个百分点;其中饲料消费量将连续第二年增长,在2009/10年达1.27亿t,比2008/09年增长5%。比2007/08年增长24%。小麦饲料消费增加主要是由于欧盟小麦供应能力改善,受豆粉大量供应及价格高企的支撑,欧盟成员国小麦产量的40%可能用于饲料消费,2009/10年达6000万t。比2008/09年增加7%。粮农组织预计全球小麦库存在本年度末为1.92亿t,比期初库存略有提高,比30年来的最低点——2008年度1.52亿t的库存增加27%。全球小麦库存消费比预计将达到29.8%,略高于2008/09年度以及2002/03-2007/08年度5年的平均值。因全球小麦产量下降,特别是主要出口国产量下降,供应能力减弱,而主要进口国产量形势尚好,进口需求减少,全球小麦贸易量有所减少。粮农组织预计2009/10年度全球小麦贸易量1.14亿t,比2008/09年度下降8%。另据美国农业部6月份预计。2009/10年度全球小麦出口量为1.23亿t,比上年减少904万t,减幅为6.84%,主要出口国中欧盟和美国的小麦出口量下降幅度较大:美国由2008年的2749万t减少到2449万t,减幅10.91%:欧盟由2250万t减少到1800万t,减幅20%。而加拿大、澳大利亚和阿根廷的小麦出口量预计会增加。美国农业部预计2009/10年度全球小麦进口量为1.18亿t,比上年度减少1289万t。减幅9.85%。尽管预计2009/10年度全球小麦产量下降,但供给仍能满足需求,库存将进一步增加。在此格局下,小麦价格将继续受到压制,但全球经济形势的变化也是影响小麦市场的重要因素,国际原油价格和其他农产品价格及美元走势也会作用于小麦价格。国际小麦价格将在上述多因素影响下继续波动。3.2蔬菜市场分析3.2.12008年中国蔬菜出口形势分析据商务部最新资料显示,2008年1~9月,中国食用蔬菜类产品出口总额为315651.9万美元,相比去年同期增长了8.8%;蔬菜、水果、坚果等制品出口额43458.6万美元,相比2007年同期增长15.2%。以大蒜出口为例,根据商务部重点大宗出口产品的最新统计资料显示,2008年1—9月,大蒜出口总额为62148.9万美元,其中前三大出口市场是印尼、美国和巴西,出口量分别为322748.1、91355.3和83200.3t,出口额分别达到13046.8、7512.8和3665.2万美元,3个市场的出口量占到出口总量的37.4%。相比2007年同期,1~9月份大蒜的出口总量上涨了15.1%,但出口额却下降了24.4个百分点,说明价格在2008年度出现大幅下跌。根据商务部统计资料显示,中国出口大蒜平均单价为473.4美元/t,平均单价较之2007年下降35.1%。此外,其他蔬菜产品的价格在1~8月间的出口价格也出现不同的波动,如出口香菇的平均单价为6355.3美元/t,平均单价较之2007年上升25.0%;出口大葱平均单价为643.1美元/t,同比出口量减少26.6%,平均单价上升41.7%。3.2.2市场前景无公害蔬菜是种植在良好的农业生态环境下,不施或少施化学农药、化肥等化工产品,通过农艺措施、生物防治、物理防治等措施来防治病虫草害;通过施用有机肥、推广配方施肥和有机复混专用肥,实现养分平衡,从而生产出安全、清洁、卫生、品质优良的蔬菜产品。近年来,随着人们对环境及蔬菜产品安全意识的不断提高和膳食结构的不断改善,对无公害高档蔬菜的要求越来越高,已引起了国内外消费者的广泛关注。据美国农业部调查,1991~1996年,美国市场上有机农产品的销售额以年均25%的速度增长,大大高于传统工艺栽培的农产品。据国际权威部门预测,现在全球有机农产品销售量只占整个农产品销售量的1%,到2010年销售量将会占全球农产品销售量的5%以上。由此可见,无公害食品、绿色食品及有机食品已成为世界食品的宠儿,尽管其在国际市场上的价格比传统食品高出20%以亡,甚至3~5倍,但市场销售额仍在不断上升。无公害蔬菜不仅有着巨大的国际市场,而且有着很大的国内市场。我国无公害蔬菜产品的开发起步晚、档次低,一家一户菜农难以生产高质量的无公害蔬菜。大面积开发生产无公害蔬菜具有很强的产品竞争力,生产潜力极大。目前无公害食品、绿色食品及有机食品已被国内越来越多的消费者所青睐,国内市场无公害蔬菜产品的销量与日俱增。但目前我国无公害蔬菜的生产还远远不能满足国内外市场的需求。随着人们生活水平的提高,以及蔬菜出口量的增加,无公害蔬菜市场前景广阔。随着社会经济的快步发展,百姓对菜篮子产品的选择已从“量”向“质”发生转变。当然这也是人们对自身健康的爱护和要求,近几年无公害蔬菜的出现使其倍受广大市民的青睐,因此发展无公害蔬菜种植已成全国和全区的必然之势。城市的蔬菜消费者大体可分为三类,一类是低收入群,主要以外来务工者、下岗职工和退休人员为主体,他们受经济条件的限制,对蔬菜的质量和品种要求不高,吃饱就可以,但对蔬菜的价格十分敏感,通常会在早、夜市购买价格低廉的蔬菜。第二类是大部分工薪阶层,他们十分注意蔬菜品种的多样化,对蔬菜的加工比较注意,但一些价格不是很高的无公害蔬菜,还是可以接受的。这类人群一般在超级市场和固定蔬菜销售点购买。第三类就是有较高以上的收入群体,他们对蔬菜的要求不仅需要吃的好一点,而且还要有丰富的营养,并且十分注意食品对保健的影响,但对其价格高低不太计较。目前后两类人群是规模化蔬菜基地产品和无公害蔬菜的主要消费者。随着经济的稳步发展,百姓收入逐步增加,生活水平也随之逐步提高,不远的将来会有更多的消费者选择吃安全、放心的无公害蔬菜。第四章建设条件和场址选择4.1项目区概况太和县位于安徽省西北部,地处黄淮平原腹地,位于阜阳、亳州两市之间,面积1822平方公里,人口162.7万。南接颍泉区,东靠利辛、涡阳县,西接临泉县,西北与河南省郸城县相连。地处东径115°25′~115°55′,北纬33°04′~33°35′之间。南北长约53公里,东西宽约60公里。县城位于县域的最南部颍河与漯阜铁路之间,南距阜阳市35公里,北距亳州市89公里,东距涡阳66公里,西距界首市27公里。4.2自然生态1、气候、气象太和县气候属暖温带半湿润季风气候。年均气温14.6℃,大于0℃的活动积温年均5363.9℃,大于10℃的活动各积温年均4801.1℃2、水文境内主要河流有颍河、谷河、黑茨河、界洪新河(人工河)、西肥河、均属淮河水系,其中茨河流域面积最大,占全县总面积的54%。水文地质:该地区为松散岩系孔隙水分布区,含水层颗粒较细,厚度较大,坡度平缓,水量丰富,水质优良,便于开发利用。水资源每年可利用量6.2亿立方米,其中浅层地下水可利用量3.6亿立方米,主要以大气降雨补充,地表水可利用量3.6亿立方米,主要有太和原墙闸调节库容,地下水水质较好,矿化较小,一般每升0.4-0.6克,盐度每升小于10毫克当量,碱度每升小于4毫克当量,适于农灌、饮用。地下水较丰富,水质良好。最高水位3.5米,最低水位5.5米,静止水位1.4米3、地质、地震地质构成为第四纪近代冲积岩层,土质以粉砂土为主,部分粘土,地基承载力为8-20吨/平方米,大部分地区为12-15吨/平方米。太和县位于太和——五河断裂、明龙大断裂、原墙断裂、亳州淮滨断裂、老人集断裂以及阜颍断裂的中间地带。国土资源部划定该地区属于地震烈度6度。4.3交通概况太和交通便利,四通八达。京九铁路、漯阜铁路从境内穿过,每万平方公里铁路里程拥有量是全国的8倍,境内设7个车站。105国道、商阜高速、308省道和南洛高速分别以南北、东西方向交叉贯穿全境。境内公路里程1168千米,其中等级公路1108千米。全县31个乡镇全部通油路,85%的行政村晴雨通车。颍河水道西连河南省,东通上海市,境内设码头38个,成为全省最大的山西、河南煤炭中转地。县城距阜阳4C级机场仅37公里,形成了水、陆、空立体交通网络。4.5场址选择1、选择原则(1)节约用地,少占耕地。建设用地因地制宜,优先考虑利用荒地和空地,尽可能不占或少占耕地,并力求节约用地。(2)减少拆迁移民。工程选址、选线应着眼于少拆迁,少移民,尽可能不靠近、不穿越人口密集的城镇或居民区。(3)有利于研发中心合理布置和安全运行。(4)有利于环境保护和生态,应有利于项目所在地的经济和社会发展。2、场址位置项目选址于太和县双浮镇高寨村,区内基础设施比较完善,实现“七通一平”,周边交通状况良好,区内无污染源,符合场址选择的要求。第五章技术方案5.1研发中心建设指导思想在项目规划实施过程中坚持纵向、争取与横向融通相结合,内联挂靠与引进外资相结合,集体注入与个人投资相结合,广泛吸纳社会资金,加快研发中心建设步伐,具体表现为:1、安徽省太和县东方现代农业有限公司良种研发中心的规划与建设要体现“一超三高”的基准。安徽省太和县东方现代农业有限公司良种研发中心规划建设中所遵守的“一超三高”基准,是“超前性,高起点,高质量,高水平运作”的简称。良种研发中心要根据发展的客观规律与发展前景,对进行超前规划,要站在同类研发中心的最前沿,真正按高科技研发中心的真正内涵来规划研发中心发展。2、安徽省太和县东方现代农业有限公司良种研发中心的建设要以优化环境为目标,调整区域布局,合理使用土地,大力绿化和整合各项资源,全面提升可发展空间。创造良好的投资环境是吸引外资的重要条件,良好的投资环境包括硬环境和软环境,硬环境是指地块区位条件、自然条件和基础设施,软环境是指政策、条例、税收、效率以及市区和起步区的依托和支持。3、安徽省太和县东方现代农业有限公司良种研发中心的建设要以科技为先导,优化产业结构、清洁生产推行环境无害化,在保护与治理环境的同时,推动循环经济的发展。4、安徽省太和县东方现代农业有限公司良种研发中心的建设要以研发中心为载体,以文化为内涵,推动特色研发中心建设,深化资源共享,开发完善研发中心内景点建设,建造可持续发展的支撑体系。5、研发中心建设坚持长期的持续发展与近期的滚动发展相结合建设安徽省太和县东方现代农业有限公司良种研发中心是一种“功在当代、利在千秋”的事业。在研发中心建设中首先必须从长计议,真正体现“一超三高”精神,努力营造一个能够实现研发中心长期持续发展的环境。5.2研发中心建设方案1、总体建设方案在满足各功能区建筑物各自功能的提前下,确保建、构筑物安全可靠,力求造型美观。同时,考虑未来功能的需要,使整个中心建筑,随着业务的扩大,仍不显得落后。并合理采用新型结构、新材料,并充分利用地方材料,以方便施工,加快工程进度,降低工程造价。依据工程地质勘察资料、按照现行国家设计规范、标准和规定进行设计。2、科研方向立足于太和,吸收众家之长,利用现代化的技术,加强新产品研制开。3、工程方案(1)建筑设计规定=1\*GB3①厂房平面和空间设计必须满足工艺生产要求,流程合理、方便操作、便于管理、利于设备安装维修。=2\*GB3②在满足生产要求的基础上,应符合防火、防爆、防震、防腐等安全要求。=3\*GB3③建筑形式的选择,应根据生产特点、建厂地区条件和其他各种因素综合考虑,并应力求外形简单、布置合理、充分利用空间、节约用地。=4\*GB3④认真贯彻适用、经济、在可能条件下注意美观的方针,在满足生产要求和方便使用前提下,努力降低建筑工程造价,并尽可能地满足建筑艺术和城市建设的要求。(2)主要建筑物设计方案=1\*GB3①设计依据及设计要求项目单位工艺设计提供的工艺图及设计要求;研发中心规划总图对单体的建筑设计要求。=2\*GB3②建筑设计原则拟建研发大楼的建筑设计为体现新时代的建筑特征,美化生产环境,满足生产管理规范的要求,在设计中以技术先进、适用安全、经济美观为原则,并按使用性质,生产类别充分考虑建筑对洁净、噪音控制,采光、通风、日照、消防、卫生及其它特殊的要求。在满足生产工艺同时严格执行国家现行的有关规范和标准,力求建成一个环境优美、又有时代特征的新颖的企业形象。=3\*GB3③造型特征研发中建筑立面设计结合使用功能处理好人流与物流的关系,用变换的窗形、细部处理、玻璃幕墙与大面积实墙面的虚实对比丰富立面造型,用绿色色带和大面积白色外墙面的色感差增强视觉效果.用大面积的白色墙面和绿色的对比衬托建筑立面的洁净与典雅。=4\*GB3④平面设计平面设计中,物流经物流入口处经过缓冲进入相关的生产区内,交通防火疏散方面设置内走道及封闭外廊,其安全疏散宽度和疏散出口均满足防火规范要求。=5\*GB3⑤结构设计a、设计依据本工程设计均按国家现行标准和规范及规程进行。b、基本数据基本风压:0.35KN/m2基本雪压:0.55KN/m2抗震设防烈度:6°建筑物生产(火灾危险性)类别属丙类建筑物耐火等级为一、二级屋面活荷载:0.7KN/m2c、结构选型本着满足工艺生产,安全、适用、经济合理、建筑选型符合现代建筑特点的要求,拟采用造型简洁,建筑内部分隔布置灵活,耐久性好的结构形式。实际设计中除要注意选择经济合理的结构形式以满足使用要求外,还必须全面考虑现场制造、运输,安装等条件.内部隔墙主要采用彩钢板分隅,墙体采用240粘土实心砖墙或200厚新型空心砖。质量检测中心(实验室)采用钢筋砼框架结构。=6\*GB3⑥主要结构材料选用砼强度等级现浇构件采用C30或C25。用钢为小角钢、圆钢、薄壁型钢或钢管。墙体为M5混合砂浆砌240砖或200厚空心砖砌块,砌块容重小于等于9KN/m3。5.3公用工程1、给排水工程(1)给水工程水质要求:生产、生活用水符合《生活饮用水卫生标准》GB5479—85卫生要求;循环补给水质应符合循环水水质标准;生产应用去离子水,选用国内较先进的反渗透加混合离子交换柱系统制备,配以过滤装置,即可满足生产的需要。(2)排水工程本项目排水主要来自于研发大楼实验室废水、生活废水,以及循环冷却水排水,道路绿化浇洒水等。其中生产生活废水进入研发中心污水管网,并送至本项目新建的废水处理站处理。而循环排水,道路绿化浇灌下水等,因无污染,故纳入研发中心雨水管网排出。整个工程排水实行清污分流。研发中心雨水排水组织:研发中心整平坡度一般应不小于5‰,困难地段不宜小于3‰;最大坡度也不宜超过6‰,以便研发中心的雨水能顺利的汇集到某一集水口或明沟,排至厂处。排放方式和管材:研发中心内的排水管网采用环状结构,经污水处理设施后排入污水管网。室内排水管采用UPVC排水管,承插胶粘接口;室外采用混凝土预应力管,水泥沙浆接口。2、供电工程本项目用电负荷等级为三级,供电电压10KVA,变电压为380/220伏。电源来自太和县供电网,10kV架空引至研发中心围墙边后改用电缆引至研发中心总变电所高压配电柜室,经隔离开关引入高压开关柜,再经变压器降压为220V/380V后,由低压开关柜分若干回路采用电缆直埋式引至各用电场所。增设2台容量为630KVA的变压器,变配电室以放射式向动力配电箱供电,动力配电箱以放射式和树干式相结合的方式向各用电器具供电。动力和照明分开。研发大楼内各区域照度不小于300lux。其余区域照度在200—2501ux之间。3、通讯设施研发中心内配置程控自动交换机,供全厂通信使用,行管办公部门配置电脑并接入电信宽带网,确保企业生产经营按照现代企业模式进行信息化标准化管理。4、绿化绿化是环境保护的重要措施,有调节空气、美化环境的作用。绿地率一般要求不小于20%,本项目为研发中心建设项目,对于洁净程度要求较高,故而绿地率应保证在30%以上。道路两侧广植树木、花草,使道路和场地不露裸土,尽量增大绿化面积,营造优美的工厂环境,以保持良好的生态环境和厂区卫生标准。5.4基本仪器设备与用品1、仪器设备超净工作台、高压灭菌锅(手提式、立式或卧式)、小推车、精密电子天平(千分之一)、电子天平或托盘天平、酸度计、普通冰箱、烘箱、解剖镜、光照培养箱(选购)、电炉、微量可调移液器及配套吸嘴、移液管架、磁力搅拌器(可选)、不锈钢托盘、灌装机(可选)、培养架、定时器(控制光照时间)、紫外线杀菌灯、照度计(可选)、温湿度计(可选)蒸馏水器、摇床(可选)、针头滤器及配套滤膜2、小型用品枪镊,弯剪、解剖刀、接种盘3、玻璃器皿组培瓶(玻璃或塑料)、烧杯、量筒、移液管、试剂瓶、移液管架、容量瓶、试管、酒精、玻璃棒、滴瓶4、组培药品(详细药品请见常用配方)5、其他吸耳球、刷子、记号笔、定时钟、手套、封口膜、卫生药棉、拖鞋、口罩、白大褂、滤纸、洗瓶5.5组培技术方案5.5.1培养条件在植物组织培养中温度、光照、湿度等各种环境条件,培养基组成、PH值、渗透压等各种化学环境条件都回影响组织培养育苗的生长和发育。一、温度(temperature)因为温度是植物组织培养中的重要因素,所以植物组织培养在最适宜的温度下生长分化才能表现良好,大多数植物组织培养都是在23~27℃之间进行,一般采用25±2℃。低于15℃时培养,植物组织会表现生长停止,高于35℃时对植物生长不利。但是,不同植物培养的适温不同。月季是25~27℃、番茄是28℃。温度不仅影响植物组织培养育苗的生长速度,也影响其分化增殖以及器官建成等发育进程。如烟草芽的形成以28不同培养目标采用的培养温度也不同,百合鳞片在30℃以下再生的小鳞茎的发叶速度和百分率比在25%以下的高。桃胚在2~5℃条件进行一定时间的低温处理,有利于提高胚培养成活率。用二、光照(light)组织培养中光照也是重要的条件之一,主要表现在光强、光质、以及光照时间方面:1、光照强度(lightintensity)光照强度对培养细胞的增殖和器官的分化有重要影响,从目前的研究情况看,光照强度对外植物体、细胞的最初分裂有明显的影响。一般来说,光照强度较强,幼苗生长的粗壮,而光照强度较弱幼苗容易徒长。2、光质(lightwave)光质对愈伤组织诱导,培养组织的增殖以及器官的分化都有明显的影响。如百合珠芽在红光下培养,8周后,分化出愈伤组织。但在蓝光下培养,几周后才出现愈伤组织,而唐菖蒲子球块接种15天后,在蓝光下培养首先出现芽,形成的幼苗生长旺盛,而白光下幼苗纤细。3、光周期(lightperiod)试管苗培养时要选用一定的光暗周期来进行组织培养,最常用的周期是16h的光照,8h的黑暗。研究表明,对短日照敏感的品种的器官组织,在短日照下易分化,而在长日照下产生愈伤组织,有时需要暗培养,尤其是一些植物的愈伤组织在暗培养下比在光下更好。如红花、乌饭树的愈伤组织。三、湿度(humidity)湿度的影响包括培养容器保持和环境的湿度条件,容器内主要受培养基水分含量和封口材料的影响。前者又受琼脂含量的影响。在冬季应当适当减少琼脂用量,否则,将使培养基干硬,以致不利于外植体接触或插进培养基,导致生长受阻。封口材料直接影响容器内湿度情况,但封闭性较高的封口材料易引起透气性受阻,也会导致植物生长发育受影响。环境的相对湿度可以影响培养基的水分蒸发,一般要求70%-80%的相对湿度,常用加湿器或经常洒水的方法来调节湿度。湿度过低会使培养基丧失大量水分,导致培养基各种成分浓度的改变和渗透压的升高,进而影响组织培养的正常进行。湿度过高时,易引起棉塞长霉,造成污染。四、渗透压(penetratingpressure)培养基中由于有添加的盐类、蔗糖等化合物,因此,而影响到渗透压的变化。通常1-2个大气压对植物生长有促进作用,2个大气压以上就对植物生长有阻碍作用,而5-6个大气压植物生长就会完全停止,6个大气压植物细胞就不能生存。五、PH值不同的植物对培养基最适PH值的要求也是不同的(见表),大多在5-6.5左右,一般培养基皆要求5.8,这基本能适应大多数植物培养的需要。不同植物的最适PH值种类最适PH值种类最适PH值杜鹃4.0月季5.8越橘4.5胡萝卜、石刁柏6.0蚕豆5.5桃7.0番茄、葡萄5.7PH值适度因材料而异,也因培养基的组成而不同。以硝态氮作氮源和以铵态氮作氮源就不一样,后者较高一些。一般来说PH值高于6.5时,培养基全变硬;低于5时,琼脂不能很好地凝固。因为高温灭菌会降低PH值(约0.2-0.3个PH值)因此在配制时常提高PH值0.2-0.3单位。PH值大小调节可用0.1M的NaOH和0.1M的HCl来调整。1ml的NaOH可使PH值升高0.2单位,1ml的HCl可使PH值降低0.2单位。调节时一定要充分搅拌均匀。六、气体(gas)氧气是组织培养中必需的因素,瓶盖封闭时要考虑通气问题,可用附有滤气膜的封口材料。通气最好的是棉塞封闭瓶口,但棉塞易使培养基干燥,夏季易引起污染。固体培养基可加进活性炭来增加通气度,以利于发根。培养室要经常换气,改善室内的通气状况。液体振荡培养时,要考虑振荡的次数、振幅等,同时要考虑容器的类型、培养基等。5.5.2培养基的成分培养基是植物组织培养中的“血液”,血液的成分及其供应状况直接关系到培养物的生长与分化,因此了解培养基的成分、特点及其配制至关重要。自然状态下生长的绿色植物由于自身能进行光合作用,并且能合成植物生长发育所需的几乎所有有机成分,加上土壤中含有较全面的无机和有机营养成分,所以只需在适当的时候施加少量的无机和有机肥(复合成分),植物就可良好的生长。但是,在进行植物组织培养时,只是切取植物体的一小部分,它们无法合成生长发育所需要的全部物质,加上人们对植物体的各种组织和器官所需营养成分了解甚少,因此对培养基的组成成分的探索走过了一条十分艰苦而漫长的道路,至今人们还不能完全达到自主的阶段。在所报道的培养基中,没有任何一种培养基能够适合所有类型的植物组织和器官,也没有实现对所有的植物都能通过组织培养使其再生的目的。由于植物的多样性和生长环境的复杂性与多变性,也不可能有一种万能的培养基。目前所使用的培养基有10余种之多,大部分都是在前人研究的基础上经过分析综合和改进而成的。例如,White培养基是Uspenski和Uspenskaia(1925)的藻类培养基演化的结果,被广泛用于根的培养;Cautheret培养基是建立在Knop营养液(1865)基础上的。以后的培养基大部分是在White和Cautheret培养基的基础上改进而成。就目前所使用的各种培养基而言,可将它们的成分划分为几大类,1、水水是植物原生质体的组成成分,也是一切代谢过程的介质和溶媒。它是生命活动过程中不可缺少的物质。配制培养基母液时要用蒸馏水,以保持母液及培养基成分的精确性,防止储藏过程发霉变质。大规模生产时可用自来水。但在少量研究上尽量用蒸馏水,以防成分的变化引起不良效果。2、无机营养成分(包括大量元素,微量元素和铁盐)3、有机营养成分(包括维生素,氨基酸及其微生物等)4、碳水化合物5、植物生长调节物质(常称为激素)6、琼脂或其他支持物7、其他添加剂(含天然提取物、抗生素等)·维生素B1(盐酸硫胺素)·维生素B2(核黄素)·维生素B6(吡多辛)·维生素C(抗坏血酸)·维生素E(生育酚)·维生素A(维生素甲、视黄醇)·维生素AD(鱼肝;由丸)·阿发骨化醇·芦丁(维生素P)芦丁(维生素P)维生素B6,盐酸吡哆醇用途:主要用于防治皮肤粗糙、粉刺、日光晒伤、止痒。也适用于防治脂溢性脱发、皮肤炎症、一般性痤疮,脂溢性湿疹和落屑性皮肤等化妆品制剂。可制成膏霜、乳液和醇溶液。一般与其他维生素配合使用。技术指标:中文名称:维生素B6,盐酸吡哆醇英文名称:VitaminB6,Pyridoxin化学名称:6—甲基—5—羟基—3,4—吡啶二甲醇盐酸盐质量指标:熔点:205~209℃鉴别:本品的红外吸收图谱应与对照的图谱一致。酸度:PH值应为2.4—3.0产品说明:性状:白色或类白色的结晶或结晶性粉末;无臭,味酸苦;遇光渐变质。在水中易溶,在乙醇中微溶,在氯仿或乙醚中不溶。水溶液呈微酸性反应。吡哆醇是醇式维生素B6,是较稳定的一种结构,在酸性或碱性溶液中可耐热維生素B1(鹽酸硫胺素)作用主要用於防治缺乏維生素B1所致的腳氣病。也用於神經炎、心肌炎、消化不良輔助治療。甲狀腺機能亢進患者,妊娠或高熱患者,可適當補充維生素B1,以改善症狀。罗纳普朗克动物营养公司的盐酸硫胺素(维生素B1)是盐酸铵素粉状产品,符合美国药典标准。组成:化学式C12H17C1N4OLHCI维生素B4VitaminB4(腺嘌呤,氨基嘌呤,Adeninephosphate)【性状】常用其磷酸盐,为白色针状结晶或结晶性粉末。易溶于水,微溶于乙醇,不溶于乙醚或氯仿。其饱和水溶液呈中性。【药理及应用】本品是核酸的组成成分,在体内参与RNA和DNA合成。当白细胞缺乏时,它能促进白细胞增生,一般用药2~4周左右,白细胞数目可增加。用于各种原因如放射治疗、苯中毒、抗肿瘤药和抗甲状腺药等引起的白细胞减少症,也用于急性粒细胞减少症。叶酸(维生素BC,维生素M)水溶性;维生素B族中的一种,亦称为维生素BC或维生素M;计量单位是微克(mcg);是制造红血球不可缺少的物质;帮助蛋白质的代谢。-生物素(d-biotin,1)又名维生素H,属水溶性维生素B族。d-生物素是转化酶的辅酶R,也是蛋白质和脂肪中间代谢中的一个重要辅酶,在维持人和动物正常生长发育,保护皮肤,羽毛和骨髓健康起着必不可少的作用。因而为医疗,多维制剂和饲料行业等方面得以广泛应用。生物素的补充物为右旋生物素(D-生物素)制剂,纯品一般含D-生物素98%以上,是一种近白色结晶性粉末,在冷水中溶解度低,随水温升高其溶解度增加,但高温时稳定性受到影响,配制生物素溶液时,最适温度为50℃D-生物素(维生素H)化学名称:D-Biotin(VITAMINH)标准:USP24/BP98规格:医药级(≥99.0%)饲料级(≥2%)二四滴(2,4-dichlorophenoxyaceticacid,2,4-D)一种人工合成的具有与生长素类似生理效应的有机物。化学名称为2,4-二氯苯氧乙酸,合成过程简单,可以大量生产,在农业及园艺生产上已广泛应用。低浓度具有促进插枝生根,阻止器官脱落,形成无子果实等作用,如10~15ppm(1ppm=10-6)溶液蘸花或喷洒花簇,即可得到无子果实;高浓度可杀死双子叶植物,作为单子叶植物小麦、玉米、高梁等田间的除草剂。吲哚丁酸(IBA)和一种植物细胞分裂素:6—苄基腺嘌吟(6—BA)D-生物素/VH叶酸/VBc萘乙酸简称NNA,是一种植物生长调节剂,近年来在果树生产上应用十分广泛。5.5.3培养基的种类培养基有许多种类,根据不同的植物和培养部位及不同的培养目的需选用不同的培养基。培养基的产生最早是Sacks(1680)和Knop(1681),他们对绿色植物的成分进行了分析研究,根据植物从土中主要是吸收无机盐营养,设计出了由无机盐组成的Sacks和Knop溶液,至今仍在作为基本的无机盐培养基得到广泛应用。以后根据不同目的进行改良产生了多种培养基,White培养基在40年代用得较多,现在还常用。而到60和70年代则大多采用MS等高浓度培养基,可以保证培养材料对营养的需要,并能生长快、分化快,且由于浓度高,在配制、消毒过程中某些成分有些出入,也不致影响培养基的离子平衡。培养基的名称,一直根据沿用的习惯。多数以发明人的名字来命名,如White培养基,Murashige和Skoog培养基(简称MS培养基),也有对某些成分进行改良称作改良培养基。目前国际上流行的培养基有几十种,常用的培养基及特点如下:(1)MS培养基它是1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。特点是无机盐和离子浓度较高,为较稳定的平衡溶液。其养分的数量和比例较合适,可满足植物的营养和生理需要。它的硝酸盐含量较其他培养基为高,广泛地用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培养,效果良好。有些培养基是由它演变而来的。(2)B5培养基是1968年由Gamborg等为培养大豆根细胞而设计的。其主要特点是含有较低的铵,这可能对不少培养物的生长有抑制作用。从实践得知有些植物在B5培养基上生长更适宜,如双子叶植物特别是木本植物。(3)White培养基是1943年由White为培养番茄根尖而设计的。1963年又作了改良,称作White改良培养基,提高了MgSO4的浓度和增加了鹏素。其特点是无机盐数量较低,适于生根培养。(4)N6培养基是1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计的。其特点是成分较简单,KNO3和(NH4)2SO4含量高。在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花药培养和其他组织培养。(5)KM-80培养基它是1974年为原生质体培养而设计的。其特点是有机成分较复杂,它包括了所有的单糖和维生素,广泛用于原生质融合的培养。5.5.4培养基的选择1、选择合适的培养基选择合适的培养基是植物组织培养成功的基础。选择合适的培养基主要从以下两个方面考虑:一是基本培养基;二是各种激素的浓度及相对比例。MS培养基适合于大多数双子叶植物,B5和N6培养基适合与许多单子叶植物,特别是N6培养基对禾本科植物小麦、水稻等很有效,White培养基适合于根的培养。首先试用这些培养基进行初步实验,可以少走弯路,大大;减少时间、人力和物力的消耗。当通过一系列初试之后,可再根据实际情况对其中的某些成分做小范围调整。在进行调整时,以下情况可供参考。一是当用一种化合物作为氮源时,硝酸盐的作用比铵盐好,但单独使用硝酸盐会使培养基的PH向碱性方向漂移,若同时加入硝酸盐和少量铵盐,会使这种漂移得到克服。二是当某些元素供应不足时,培养的植物会表现出一些症状,可根据症状加以调整,如氮不足时,培养的组织常表现出花色苷的颜色(红、紫红色),愈伤组织内部很难看到导管分子的分化;当氮、钾或磷不足时,细胞会明显过度生长,形成一些十分蓬松,甚至呈透明状的愈伤组织;铁、硫缺少时组织会失绿,细胞分裂停滞,愈伤组织出现褐色衰老症状;缺硼时细胞分裂趋势缓慢,过度伸长;缺少锰或钼时细胞生长受到影响。培养基外源激素的作用也会使培养物出现上述一些类似的情况,所以应仔细分析,不可轻易下结论。2、激素浓度和相对比例的确定组织培养中对培养物影响最大的是外源激素,在基本培养基确定之后,实验中要大量进行的工作是用不同种类的激素进行浓度和各种激素间相互比例的配合试验。在实验中,首先应参考已有的报道,看是否有用相同植物、相同组织或相近者做过成功或失败的试验,如果有则可直接作为参考;如果没有,则在建立激素配比中,将每一种拟使用的激素选择3-5个水平,再按随机组合的方式建立起如下的实验方案。这样就设计出了16种激素配比的实验方案,即16种不同的培养基。用着16种培养基进行初试之后,你会找到1种或几种是比较好的。再在这些比较好的组合的基础上进行小范围的调整,设计出一组新的配方。如在表一中,您认为6号培养基较有希望,就可以在此基础上做出如表二的一组新的设计。表一两种激素4种浓度的组合试验浓度为mg/L-1细胞分裂素0.51.534.5生长素012340.556781.091011122.013141516有16种不同的培养基表二第二次激素配比实验浓度为mg/L-1细胞分裂素1.01.251.501.75生长素0.2512340.556780.759101112有12种不同的培养基一般来说,经过这次实验就可能选出一种适合于你的实验材料的培养基,或许不是最好的,但结果是可靠的。在此基础上可进行培养基中其他成分的变动实验,如可变动蔗糖浓度、琼脂用量、培养基的PH或添加某些氨基酸等。但必须掌握一个原则,就是要有理有据,特别是对一些宝贵的植物培养材料,更要慎之有慎。如果上述试验失败,那就要做一些更细致、更麻烦的实验,花费更多的时间、人力和物力,而且最好在专业人员的指导下进行,切莫根据想象来随意设计培养基,这样成功的概率极小,使宝贵的植物材料丢失,或失去时机。5.5.5培养基的配制配制培养基有两种方法可以选择,一是购买培养基中所有化学药品,按照需要自己配制;二是购买商品的混合好的培养基基本成分粉剂,如MS、B5等。自己配制可以节约费用,但浪费时间、人力、且有时由于药品的质量问题,给实验带来麻烦。就目前国内的情况看,大部分还是自己配制。为了方便起见,现以MS培养基为例介绍配置培养基的主要过程。1、配制几种母液(1)配制MS大量元素母液一般将大量元素分别配制成100倍的母液,使用时再分别稀释100倍。分别称取NH4NO3165gKH2PO4KNO3190gCaCl2·2H2O44gMgSO4·7H2O37g各自配成1L的母液。倒入1L试剂瓶中,存放于冰箱中。(2)配制MS微量元素母液一般将微量元素配制成100倍母液。依次称取KI0.083gNa2MoO4·2H2O0.025gH3BO30.62gCuSO4·5H2O0.0025gMnSO4·H2O1.69gCoCl2·6H2O0.0025gZnSO4·7H2O0.86g配成1L母液,倒入1L试剂瓶中,存放于冰箱中。CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O由于称取量很小,如果天平精确度没有达到万分之一,可先配成调整液。分别称取CuSO4·5H2O0.05gCoCl2·6H2O0.05g各自配成100ml的调整液,然后取5ml就还有0.0025g的量。(3)配制MS有机母液一般配制成100倍MS有机母液。依次称取肌醇10g盐酸硫胺素(VB1)0.01g烟酸0.05g甘氨酸0.2g盐酸吡哆醇(VB6)0.05g配成1L母液,倒入1L试剂瓶中,存放于冰箱中。(4)配制MS铁盐母液一般配制成100倍MS铁盐母液。依次称取EDTA二钠3.73gFeSO4·7H2O2.78g配成1L母液,倒入1L试剂瓶中,存放于冰箱中。所以MS母液有5种大量元素母液,加上MS微量元素母液、MS有机母液和MS铁盐母液,共8种母液。5.5.6激素母液的配制各种生长素和细胞分裂素要单独配制,不能混合在一起,生长素类一般要先用少量95%的酒精或1当量的NaOH溶解,细胞分裂素一般要先用1当量的盐酸溶解,然后再加蒸馏水定容。一般取100mg配成100ml母液。2、配制培养基以配置1LMS培养基为例,按顺序进行如下操作:(1)先在烧杯中放入一些蒸馏水。(2)分别取上面八种母液10ml倒入。(3)一般称取30g蔗糖倒入,搅拌溶解。(4)加蒸馏水用量筒定溶至1L。(5)按设计好的方案添加各种激素,由于激素的用量很小,而且激素对组培植物的生长至关重要。所以有条件的话最好用微量可调移液器吸取,减少误差。(6)用精密试纸或酸度计调整PH至5.7-5.8。(有条件的话使用酸度计,比较精确)可配1当量的HCL和1当量的NaOH用来调溶液PH值。1当量HCL配制:用量筒量取8.3ml配成100ml溶液。1当量NaOH配制:称取NaOH4g配成100ml溶液。(7)称取5g左右琼脂粉(质量好的琼脂粉),倒入上面配好的溶液中,放在电炉上加热至沸腾,直到琼脂粉熔化。(8)稍微冷却后,分装入培养容器中。无盖的培养容器要用封口膜或牛皮纸封口,用橡皮筋或绳子扎紧。(9)放入消毒灭菌锅灭菌,灭菌20分钟左右。(10)灭菌后从灭菌锅中取出培养基,平放在实验台上令其冷却凝固。5.5.7有机营养成分有机营养成分包括维生素、氨基酸或某些有机混合物。维生素在某些酶系统中有催化作用,加速酶功能的发挥。硫氨素(维生素B1)可能是几乎所有植物都需要的一种维生素,缺少维生素B1时离体培养的根就不能生长或生长十分缓慢。维生素B1常常以盐酸盐的形式即盐酸硫胺素加入培养基中。盐酸吡哆醇(维生素B6)和烟酸可能有刺激生长的作用。在细胞分裂素浓度低于0.1mg/L的情况下特别需要添加维生素B1,在细胞分裂素浓度高于0.1mg/L时,烟草细胞在没有维生素B1的培养基上亦可缓慢生长,这表明细胞分裂素可能有诱导植物合成维生素B1的作用。除维生素B1、维生素B6之外,在部分培养基中还添加维生素BX(氨酰苯甲酸)、维生素C(抗坏血酸)、维生素E(生育酚)、维生素H(生物素)、维生素B12(氰钴胺酸)、维生素BC(叶酸)、维生素B2(核黄素)、泛酸钙和氯化胆碱等维生素。除叶酸外各种维生素都溶于水,叶酸需要先用少量稀氨水溶解,再加蒸馏水定容。甘氨酸(氨基乙酸)和肌醇(环己六醇)也是一些培养基的添加成分。另外,在某些植物或某些组织的培养中还加有水解乳蛋白、水解酪蛋白、椰子汁、玉米胚乳、麦芽浸出物、西红柿汁和酵母浸出物等。这些可能对某些植物或植物的某些代谢过程有重要作用,如肌醇主要以磷酸肌醇和磷脂酰肌醇的形式参与由Ca介导的信号转导。5.5.8无机营养成分无机营养成分就是人们平常所说的矿物质、无机盐或无机元素。它们在植物生活中具有非常重要的作用,如氮(N)、硫(S)、磷(P)是蛋白质、氨基酸、核酸和许多生物催化剂即酶的主要或重要组分。它们与蛋白质、氨基酸、核酸和酶的结构、功能、活性等有直接的不可缺少的关系。氮占蛋白质含量的16%-18%,在植物生命活动中占有首要的地位,故又称为生命元素。磷是能量货币腺苷三磷酸(ATP)的主要成分之一,与全部生命活动紧密相连,在糖代谢、氮代谢、脂肪转变等过程中不可缺少。钾对于参与活体内各种重要反应的酶起着活化剂的作用,钾供应充分时糖类合成加强,纤维素和木质素含量提高,茎秆坚韧,植株健壮。胱氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸等氨基酸中都含有硫,这些氨基酸几乎是所有蛋白质的构成分子。镁离子(Mg2+)是叶绿素分子结构的一部分,缺少镁,叶绿素就不能形成,叶子就会失绿,就不能进行光合作用。镁也是染色体的组成成分,在细胞分裂过程中起作用。钙是细胞壁的组分之一,果胶酸钙是植物细胞胞间层的主要成分,缺钙时细胞分裂受到影响,细胞壁形成受阻,严重时幼芽、幼根会溃烂坏死。现代生物学研究还证明钙是植物体内的信号分子(信使)之一,在植物信号转导中发挥重要作用,钙离子与钙调蛋白结合形成的Ca2+·CaM复合体,能活化各种酶,调节植物对外界环境的反应与应答过程。根据植物对这些元素要量的不同或者根据目前植物培养基中添加的这些元素量的大小,可将它们分成大量元素和微量元素。大量元素一般指在培养基中的浓度大于0.5mmol/L的元素,微量元素指小于0.5mmol/L的元素。1、大量元素主要包括氮、磷、钾、钙、镁和硫六种。其中,氮常以硝态氮(NO3-)或氨态氮(NH4+),或两者相互配合的形式存在。缺氮时某些植物的愈伤组织会出现一种很引人注目的花色素苷的颜色,愈伤组织内部不能形成导管。镁常MgSO4·7H2O的形式,既提供了镁也提供了硫。硫还有用Na2SO4的形式提供,不过其中的钠(Na)对植物并不是必需的,或者说常常是不利的。磷常以NaH2PO4·H2O,KH2PO4或(NH4)H2PO4的形式提供。钾常以KCl、KNO3或KH2PO4形式。钙常以CaCl2·2H2O、Ca(NO3)2·4H2O或其无水形式提供。缺硫时培养的植物组织会明显的退绿;缺磷或钾时细胞会过度生长,愈伤组织表现出极其蓬松状态。(1)N是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分,是生命不可缺少的物质。在制备培养基时以硝态氮(NO3-)或氨态氮(NH4+)两种形式供应。大多数培养基既含有硝态氮(NO3-)又含有氨态氮(NH4+)。氨态氮(NH4+)对植物生长较为有利。供应的物质有KNO3、NH4NO3等。有时,也添加氨基酸来补充氮素。(2)P是磷脂的主要成分。而磷脂又是原生质、细胞核的重要组成部分。磷也是ATP、ADP等的组成成分。在植物组织培养过程中,向培养基内添加磷,不仅增加养分、提供能量,而且也促进对N的吸收,增加蛋白质在植物体中的积累。常用的物质有KH2PO4或NaH2PO4等。(3)K对碳水化合物合成、转移、

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