细胞培养实验室的设置及设备

细胞培育试验室的设置及设备细胞培育试验室的设置及设备1/171/17一、细胞培育试验室的设置及设备〔一〕细胞培育试验室的设置。消毒灭菌处理、贮存。无菌操作区最好能与外界隔离，不能穿行或受其他干扰。抱负的无菌操作室应划为三局部：更衣室—―供更换衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。—―位于更衣间与操作间之间，目的是为了保证操作间的无菌环境，同时可放置恒温培育箱及某些必需的小型仪器。细胞培育试验室的设置及设备细胞培育试验室的设置及设备2/172/17—―专用于无菌操作、细胞培育。其大小要适当，且其顶部不宜过高〔不超过2.5m〕以保证紫外线的有效灭菌效果；墙壁光滑无死角以便清洁和消毒。工作台安置不应靠墙壁，台面要光滑压塑作外表，漆成白色或pH的观看。无菌操作间的空气消毒：—－产生臭氧，并且室内温度及湿度均较高，不利于工作人员安康。空气过滤的恒温恒湿装置—－最好。1干净室〔区〕空气干净度级别表沉降菌／皿1003,50005110000350,0002,00010031000003,500,00020,0005001030000010,350,00060,000-15无臭氧紫外线消毒器细胞培育试验室的设置及设备细胞培育试验室的设置及设备3/173/17—－在高压电场作用下，电子管的内外电极发生猛烈电子杀菌之目的，消毒时没有死角。消毒后空间的残留臭氧只需30～40min即能自行复原成氧气，空气不留异味，消毒物体外表不留残毒。净化工作台：操作简洁，安装便利，占用空间小且净化效果很好。一般细菌培育室使用的净化工作台主要有两种：a)侧流式或称垂直式b)外流式或称水平层流式。净化工作台工作原理〔大致一样〕—－通常是将室内空气经粗过滤器初以肯定的均匀的断面风速通过无菌区，从而形成无尘无菌的高干净度工作环境。—－空气净化后的气流由左或右侧通过工作台面流向对侧，为封闭式。〔水平式〕工作台—－净化后的空气面对操作者流淌，因而外方气放式〔已少用〕。净化工作台应用留意：细胞培育试验室的设置及设备细胞培育试验室的设置及设备4/174/17土过多易使过滤器堵塞，降低净化效果，缩短其使用寿命。安装的或长期未使用的工作台，工作前必需对工作台和四周环境外线灭菌进展灭菌处理。使用净化工作台前，应先用75％酒精擦洗台面，并提前以紫外线灭菌灯照耀30～50min处理净化工作区内积存的微生物。关闭灭菌灯后应启动风机使之运转两分钟后再进展培育操作。扰。留意净化区内气流的变化，一旦感到气流变弱，如酒精灯火焰不〔无纺布〕应定期清洗更换，时间应依据工作环3-6个月进展一次。面使之始终保持干净。细胞培育试验室的设置及设备细胞培育试验室的设置及设备5/175/17否到达要求，例如进展无菌试验，定期检查台面空气的干净度是否达标。超净工作台的无菌程度检查超净工作台在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数；取直径约90mm平皿，在超净工作台内点燃酒精灯，在酒精灯旁，以无菌操作，将平皿半开注入溶化的养分琼脂培育基约20ml，制成平板，在30～35℃预培育48小时，证明无菌后将平板3个，以无菌方式带入超净工作台内左、中、右各放一个；翻开平皿盖扣置，平板在空气中暴露30分钟后将平皿盖盖好，置30～35℃培育48小时，取出检查，100级清洁度要求：31个。超净工作台应定期请有关部门检查其干净度，应到达100级〔一般用尘埃粒子计数仪〕检测尘埃粒径≤53.5个／升；空气流量应掌握在0.75~1.0m3/s；细菌菌落数平均<1个，可依据无菌状况必要时置换过滤器。孵育区费用高，一般试验室多承受孵箱进展工作。制备区细胞培育试验室的设置及设备细胞培育试验室的设置及设备6/176/17在该区主要进展培育液及有关培育用的液体等的制备。贮存区需要清洁无尘。清洗和消毒灭菌区洗、预备、消毒及三蒸水制备等工作。(二)细胞培育试验室的设备备。1.常用的根本设备仪器：a〕显微镜：倒置显微镜——是组织细胞培育室所必需的日常工作常规使用设备之一，便于把握细胞的生长状况并观看有无污染等。细胞培育试验室的设置及设备细胞培育试验室的设置及设备7/177/17——假设有条件，尚可配置带有照相系统的高质量相差显微镜、解剖显微影细胞生长状况。a〕培育箱：体外培育的细胞和体内细胞一样，需要在恒定的温度下生存，大多数状况下，最适温度是37℃，温差变化一般不应超过±0.5℃，细胞在温度上升2℃时，持续数小时即不能耐受，40℃以上将很快死亡。因此需要有能掌握温度的培育箱，如具有较高灵敏度的恒温培育箱及CO2培育箱。恒温培育箱——应选隔水式或晶体管自控温培育箱，此类培育箱灵敏度式培育。CO2培育箱——目前多数的细胞培育室已广泛使用。CO2培育箱的优点是能够供给进展细胞培育时所需要的肯定量的CO2〔常用浓度为5％〕，易于使培育液的pH保持稳定，适用于开放或半开放培育。培育细胞的器皿可用培育皿、培育板或培育瓶；当使用培育瓶时，可将瓶盖略微旋松，使培育瓶内与外界保持通气状态。由于这种培育方法培育器皿内部与外界相通，培育箱内空气必需保持清洁，应定期以紫外线照耀或酒精消毒。同时培育箱应放置盛有无菌100％。枯燥箱：用于细胞培育箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用，玻璃器皿等须干热消毒。干热消毒时，电热枯燥箱升温较高，一般需到达160℃细胞培育试验室的设置及设备细胞培育试验室的设置及设备8/178/17温过程较慢。升温时不能先升温后鼓风而应鼓风与升温同时开头，至100℃100℃以下方可开门。水纯扮装置：细胞培育对水的质量要求较高，细胞培育以及与细胞培育用于玻璃器皿的冲洗，也应使用二次以上蒸馏水。〔石英管加热〕，使用便利，安全、蒸馏速度快〔1600ml/h〕。使用留意：果；同时，还需视蒸馏器内存水垢程度定期彻底清洗蒸馏器。再次蒸馏。细胞培育试验室的设置及设备细胞培育试验室的设置及设备10/1710/17免影响培育用水的质量。依据各类试验用水需求选择配备有效杀菌或去除DNA酶、RNA酶、蛋白酶等，甚至可有效去除掉热源、内毒素的超滤型纯水器。冰箱：细胞培育室必需配备○a一般冰箱或冷藏柜Hank’s液试剂等培育用的物品及短期保存组织标本。○b低温冰箱〔-20℃〕、超低温冰箱用于储存需要冷冻保存生物活性及较长时期存放的制剂，如酶、血清等。细胞培育室的冰箱应属专用，不得存放易挥发、易燃烧等对细胞有害的物质，且应保持清洁。细胞冷冻储存器：储存器常用的是液氮容器。依据使用需要分为不同的类型及多种规格。选择购置液氮容器时要综合考虑容积大小，取放使用便利及液氮挥发量〔经济〕三种因素。液氮容器的大小可自25L～500L，可以储存1ml的安瓿250～15000个左右。液氮温度可低达-196℃，使用时应防止冻挥发过多而致细胞受损。各种型的细胞冷冻储存器具有性能优异，使用便利等特点。例如：可通过先进的电子掌握器实现冻存自动化并监测液氮水平和样品温度，确保样品温度始终处于设定温度点；可配备先进的报警系统，分别警报液氮液面、温度、电池、电压、电源等失常状况：——同时具备热气体旁路系统，防止高于-130℃的暖空气进入液氮罐，从而更有效地保护样品，防止升温。接收给储存罐补充液氮，提高工作效率，保证样品安全。度、洗涤、收集细胞等工作，通常需要使用离心机。○a一般可常规配置4000rpm的国产台式离心机，例如细胞沉降，使用80～100g的离心机即可，离心力过大有时可能引起细胞的损伤。○b另外，可依据需要添置其他类型如大容量或可调整温度的离心机等试验所需的具备其他特别功能的离心机。天平：常用的有扭力天平、周密天平及各种电子天平。分析天平的感量为0.1mg、0.01mg和0.001mg。依据称取物质的量和称量精度的要求，选择适宜级别的天平。要求周密称定时，当取样量大于100mg选用感量为0.1mg天平，在100－10mg选用感量为0.01mg天平，小于10mg0.001mg天平。常用：○a手提式高压蒸汽消毒器○b目前市场上，具有高效、安全、便利等性能，适用于各种器皿、液〔如脉动真空灭菌器〕。可供使用者在灭〕支持系统转变各种参数〔例如灭菌、排气、加热等参数〕，即使在进展灭菌时发生停电故障，仍可保存所设定的参数清、消化用胰酶等常含有维生素、蛋白、多肽、生长因子等物质，这些物质在高温或射线照耀下易发生变性或失去功能，因而上述液体多承受滤过消毒以除去细菌。目前常使用的滤器有Zeiss滤器、玻璃滤器和微孔滤器，各种滤器有其使用原理和特点〔后详述〕。培育用器皿：性硬质玻璃或无毒而透亮光滑的特制塑料制成。复使用，并且透亮而便于观看；缺点是易碎，清洗时费人力。翻开即可用于细胞培育操作。常用的培育器皿：〔ml〕表示，如250ml、100ml、25ml等；进口培育瓶则多以底面积〔cm2〕表示。10cm、9cm、6cm、3.5cm等。多孔培育板：为塑料制品。可供细胞克隆及细胞毒性等各种检测试验使板分为各种规格，常用的规格有：96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。器皿的底外表积和细胞体积的大小。常用培育器皿及可获得的细胞数〔以Hela细胞为例〕2。2常用的培育器皿及可获得的细胞数培育器皿底面〔cm2〕加培育液量〔ml〕可获细胞量96孔培育板0.320.11×10524孔培育板21.05×10512孔培育板4.52.01×1066孔培育板9.62.52.5×1064孔培育板285.07×1063.5cm83.02.0×1066cm215.05.2×1069cm4910.012.2×10610cm5510.013.7×10625cm塑料培育瓶255.05×10675cm7515~302×10725ml玻璃培育瓶194.03×106100ml37.510.06×106250ml7815.07×1072500ml700100~2502.0×108培育操作有关的器皿：a贮液瓶：主要用于存放或配制各种培育用液体如培育液、血清及试剂等。贮液瓶分为各种不同规格，如1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml、5ml等。○b吸管：主要分为刻度吸管、无刻度吸管。刻度吸管主要用于吸取、转移液体，常用的有1ml、2ml、5ml、10ml传代细胞。○c加样器〔移液器〕：用于吸取、移动液体或滴加样本。可依据需要调整〔或试剂〕者选择，能确保加样准确、快速、便利并且到达无菌要求。其他用品：尚有收集细胞用的离心管，放置试剂或临时插置吸管用的压消毒的铝制饭盒或贮槽，套于吸管顶部的橡胶吸头，封闭各种瓶、管的胶精或其他消毒液的微型喷壶等。器械：主要用于解剖、取材、剪切组织及操作时持取物件。常用的〔弯剪及直剪〕，用于解剖动物、分别〔弯剪或直剪〕，用于将组织材料剪成小块；血管钳及组织镊、眼科镊〔弯、直〕，用于持取无菌物品〕夹持组织等；口腔科探针或代用品，用以放置原代培育之组织小块。2、特别设备一些特别或先进的设备仪器，以便更有效、更准确、更深入地进展试验室工作。例如：——可用于进展免疫学测定及细胞毒性、药物敏感性检测等。超低温冰箱〔-85℃〕——便于储存某些试剂及标本。旋转培育器——用于某些特别细胞或需要收获大量细胞的培育。——进展荧光染色样本的观看。——可更准确及快速检测细胞。基中主要或关键养分成分、代谢产物及气体含量设计