实验一培养基的制备消毒与灭菌及超净工作台的使用

课堂纪律严格遵守实验室规章制度严肃课堂纪律不允许无故旷课、早退（1次）迟到（3次）不能做与实验无关的事当前第1页\共有24页\编于星期三\22点实验室安全和卫生安全实验室严禁吸烟。注意用水、防电和防火正确使用化学试剂和仪器卫生每次实验需留下6位同学值日，协助保持实验室清洁当前第2页\共有24页\编于星期三\22点1、了解培养基的概念、种类和用途，明确培养基的配制原理。2、学习掌握培养基配制的一般方法和步骤。3、掌握高压蒸汽灭菌的原理和方法步骤。实验目的一、培养基的配制当前第3页\共有24页\编于星期三\22点

培养基(culturemedium)是指人工配制的、适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究目的不同，所以培养基的种类很多，不同种类的培养基一般都应含有微生物生长所需的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水六大营养要素，且各成分比例应合适。为了满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求，还必须控制培养基合适的pH。实验原理当前第4页\共有24页\编于星期三\22点常用凝固剂是琼脂，固体培养基琼脂加量通常为1.5%-2%；半固体培养基琼脂加量为0.5%-0.8%。实验原理常用培养基：牛肉膏蛋白胨培养基广泛用于细菌的培养；高氏一号培养基用于培养放线菌；麦芽汁培养基和豆芽汁培养基通常用于酵母菌的培养；马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养霉菌。当前第5页\共有24页\编于星期三\22点实验分组安排5-6人一组，配制牛肉膏蛋白胨固体培养基每组配500mL牛肉膏蛋白胨固体培养基斜面1支（每人），其余分装在两个500mL三角瓶。

当前第6页\共有24页\编于星期三\22点当前第7页\共有24页\编于星期三\22点当前第8页\共有24页\编于星期三\22点当前第9页\共有24页\编于星期三\22点当前第10页\共有24页\编于星期三\22点包扎：

加塞后，试管通常每7支一起，包上一层牛皮纸或两层报纸，用线绳扎紧。三角瓶加塞后也用牛皮纸包扎。

以活结形式扎紧，以便使用时容易解开。

用记号笔注明培养基名称、配制日期、配制人或实验组。灭菌时包牛皮纸、报纸当前第11页\共有24页\编于星期三\22点灭菌：

培养基灭菌一般采用压力蒸汽灭菌

通常灭菌条件为1.05kg/cm2,121℃灭菌20-30分钟；含糖量高的培养基，如马丁氏培养基则为0.56kg/cm2,115℃灭菌30分钟。当前第12页\共有24页\编于星期三\22点二、消毒与灭菌当前第13页\共有24页\编于星期三\22点当前第14页\共有24页\编于星期三\22点当前第15页\共有24页\编于星期三\22点紫外线灭菌----紫外线波长在200-300nm,具有杀菌作用，其中以265-266nm杀菌力最强。无菌室或无菌接种箱空气可用紫外线灯照射灭菌。当前第16页\共有24页\编于星期三\22点干热灭菌电烤箱1、干热灭菌2、压力蒸汽灭菌当前第17页\共有24页\编于星期三\22点干热灭菌1、装入待灭菌物品2、升温：接通电源，加热升温至160-170℃。3、恒温：保持160-170℃2小时。4、降温：切断电源，自然降温。5、开箱取物：待烤箱温度降到70℃以下以后，方可打开箱门，取出物品。箱内温度高于70℃，切勿自行打开箱门，以免玻璃器皿炸裂。当前第18页\共有24页\编于星期三\22点当前第19页\共有24页\编于星期三\22点当前第20页\共有24页\编于星期三\22点当前第21页\共有24页\编于星期三\22点三、超净工作台的使用方法工作原理：相对无菌的隔离小环境使用方法和步骤：紫外线的效用和紫外灯的使用方法；照明系统的效用使用方法；酒精灯的效用和使用方法。维护常识：酒精擦理当前第22页\共有24页\编于星期三\22点实验报告与问题讨论1、培养基配制的原理、方法、步骤及注意事项。2、干热灭菌、压力蒸汽灭菌方法的原理和方法步骤3、思考题1）培养基应具备哪些条件？为什么？2）在配制培养基过程中应注意哪些问题？为什么？3）培养基配制好后，为什么要立即灭菌？如何检查灭菌是否彻底？4）压力蒸汽灭菌时，为什么要将锅内冷空气排尽？5）灭菌完毕