经典液相色谱分析技术-薄层色谱分离分析技术（仪器分析技术）

薄层色谱分离分析技术

——薄层色谱参数介绍仪器分析技术主要内容比移值12相对比移值仪器分析技术一、比移值(Rf值)仪器分析技术

在薄层色谱中，一般采用定时展开，即在同一展开时间内组分与展开剂迁移的距离。组分的移动距离（L）与展开剂移动距离（L0）之比称为比移值，为定性参数。

Rf=L/L0L：原点至斑点中心的距离L0：原点至溶剂前沿的距离

L0

原点

溶剂前沿ABL1L2Rf的测量示意图当Rf=0组分留在原点Rf=1

组分随溶剂前沿一起移动Rf可用范围是0.2～0.8，最佳范围是0.3～0.5，Rf总是小于1影响Rf值的因素

(1)待分离物的化学性质(2)薄层板的性质：固定相的粒度、厚度(3)展开剂的极性(4)其他条件：温湿度、饱和情况等仪器分析技术二、相对比移值（Rr值）

指被测组分的比移值与参照组分的比移值之比。Rf(i)、Rf(s)分别为组分i和参考物质S在同一波层板上同一展开条件下所测得比移值。仪器分析技术特点：在不同的实验室、不同实验者间进行的测定Rf是比较困难的，因此建议采用相对比移值Rr值。由于参考物与组分在完全相同的条件下展开，能消除系统误差，重复性和可靠性都比比移值好。Rr可以大于1，也可以小于1。仪器分析技术谢谢观看！仪器分析技术薄层色谱分离分析技术

——薄层色谱参数介绍仪器分析技术主要内容相平衡参数12分离度仪器分析技术一、相平横参数仪器分析技术在色谱条件确定的情况下，Rf只与组分性质有关，是薄层色谱基本定性参数，说明组分的色谱保留行为，K或k大Rf小，K或k小Rf大。

容量因子

k=

CsVs/CmVm分配系数K=Cs/Cm

K、k与Rf值的关系：二、分离度

衡量薄层色谱分离效果的重要指标，是指相邻两斑点中心至原点的距离之差与两斑点平均径向宽度（径向宽度是指斑点沿着展开方向的宽度）的比值。仪器分析技术L2、L1：原点至两斑点中心的距离W1、W2：两色谱峰宽

计算举例在薄层板上分离A、B两组分的混合物，当原点至溶剂前沿距离为16.0cm时，两斑点质量重心至原点的距离分别为6.9cm和5.6cm，斑点直径分别为0.83cm和0.57cm。求两组分的分离度及Rf值。解：仪器分析技术谢谢观看！仪器分析技术仪器分析技术薄层色谱分离分析技术

——薄层色谱操作技术3、展开2、点样1、制板4、检视薄层色谱操作技术主要包括四个步骤仪器分析技术一、制板仪器分析技术1、自制薄板无黏合剂：将固定相直接涂布玻璃板上。含黏合剂：固定相中加煅石膏（10%～15%）、羧甲基纤维素钠水溶液（0.2%～0.5%）。具体操作如下2、市售薄板普通薄层板：玻璃、聚酰胺薄膜、铝基薄层板高效薄层板：固定相粒径为5-7μm

自制薄板的操作方法将1份固定相和3份水（或羧甲基纤维素钠水溶液）在研钵中沿同一方向研磨混匀，去除表面的气泡后，置玻璃板上使涂布均匀，或倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布(涂层厚度为0.2mm～0.3mm)，取涂好的薄层板，置水平台上于室温下晾干后，在110℃活化30分钟，立即置于有干燥剂的干燥器中备用。手动涂布器仪器分析技术市售薄板临用前的处理一般应在使用前110℃活化30分钟，聚酰胺薄膜不需活化，铝基片薄层板和聚酰胺薄膜可根据需要剪裁，但需注意剪裁后的薄层板底边硅胶层不得有破损，如存放期间被空气杂质污染，使用前可用甲醇、二氯甲烷和甲醇的混合溶液在展开容器中上行展开预洗，取出、晾干，110℃活化后，置干燥器中备用。硅胶类薄层板仪器分析技术每次点样后，使其自然干燥或将其吹干，只有干后，才能第二次点样；点样时勿损伤薄层表层，不得出现凹点，不可刺出空洞。二、点样仪器分析技术普通板点样基线：距底边2.0cm圆点状：直径≤3mm条带状：点样宽度5～10mm点或条带间距：＜8mm

点样量：＜10μl高效板点样基线：距底边0.8～1cm圆点状：直径R≤2mm条带状：点样宽度4～8mm点或条带间距：＜5mm

点样量：＜5μl三、展开同一物质在同一薄层板上出现中间部分的Rf值比边缘部分的Rf值小，这种现象称为边缘效应，所以展开缸预先用展开剂饱和可避免此效应。

要求：将点好样的薄层板放入展开缸中，浸入展开剂的深度为距薄层板边0.5-1cm，密封顶盖待展开至规定的距离，如20cm的薄层板，上行距离为8-10cm，高效薄层板上行距离为5-8cm，取出薄板在前沿处做好标记，晾干，待检。仪器分析技术展开方式展开方式有:上行、近水平、双向、多次展开上行展开近水平展开仪器分析技术四、检视仪器分析技术在日光下直接检视化学检出法：利用化学试剂与被测物质反应，使斑点产生颜色而定位，显色的方法有：喷雾法、熏蒸法、浸渍法。荧光检出法：对无色物质可在紫外灯下，观察有无暗斑或荧光斑点，并记录其颜色、位置、强弱；有荧光的物质或显色后激发产生荧光的物质可在紫外灯（254nm或365nm）下观察荧光斑点。有色物质斑点无色物质斑点谢谢观看！仪器分析技术薄层色谱分离分析技术

——薄层色谱法分类及原理仪器分析技术主要内容薄层色谱法及其分类12薄层色谱法的原理仪器分析技术一、薄层色谱法及其分类1、定义将固定相均匀地涂布在具有光洁表面的玻璃、塑料、金属板上形成薄层，在此薄层上进行色谱分离的方法称为薄层色谱法。

铺固定相的板称为薄层板或薄板。薄层色谱仪器分析技术2、薄层色谱分类吸附薄层色谱法

分配薄层色谱法

分子排阻薄层色谱法胶束薄层色谱法按分离机制分仪器分析技术1）吸附薄层色谱法

固定相为吸附剂的薄层色谱法。固定相通常为硅胶。2）分配薄层色谱法

利用样品中各组分在固定相与流动相之间的分配系数差别实现分离的薄层色谱法。固定相通常是液体。3）胶束薄层色谱法

以表面活性剂胶束溶液为展开剂的薄层色谱法。常用聚酰胺薄层板，也用氧化铝板，较少用硅胶板。仪器分析技术二、薄层色谱法的原理薄层色谱是一种开放性色谱，是将混合组分样品溶液点在薄层板一端的起始线上，点样处称为原点，在密闭容器中用适宜的流动相（展开剂）展开。因吸附剂对不同组分的吸附能力不同，展开剂对不同组分的解吸能力也不完全相同，造成各组分在薄层析上移动的速度有快有慢，经过一段时间展开后，不同的组分彼此分开，最终形成相互分离的斑点。仪器分析技术谢谢观看！仪器分析技术薄层色谱分离分析技术

——吸附剂与展开剂仪器分析技术主要内容吸附剂12展开剂仪器分析技术一、吸附剂吸附薄层色谱法的固定相为吸附剂，常用的有硅胶、氧化铝、聚酰胺等。氧化铝硅胶仪器分析技术1、硅胶薄层色谱用硅胶的粒度是10-40µm，平均孔径是100nm，硅醇基密度为8µmol/m2。分类组成适用硅胶H不含粘合剂硅胶硅胶G硅胶和煅石膏混合而成硅胶HF254不含粘合剂含有无机荧光剂本身不发光，且不易显色的物质仪器分析技术2、氧化铝氧化铝和硅胶类似，主要有三种形式分类组成适用氧化铝H不含粘合剂氧化铝G氧化铝和煅石膏混合而成氧化铝HF254不含粘合剂含有无机荧光剂本身不发光，且不易显色的物质仪器分析技术吸附剂对薄层色谱的影响颗粒大，总表面积小，吸附量低，展开速度快，展开斑点较宽，分离效果差。颗粒小，总表面积大，吸附量大，展开速度慢。吸附剂颗粒大小适宜，粒度分布窄。颗粒大小两种表示方式：一、颗粒直径表示；二、用目表示仪器分析技术二、展开剂吸附薄层色谱过程中，组分的分子与展开剂分子争夺吸附剂表面活性中心，色谱条件的选择主要是展开剂的选择。仪器分析技术分离极性较小组分，宜选用吸附活性较大的薄层板，以极性较小的洗脱剂展开；否则Rf太大，不利于分离。分离极性较大组分，宜选用吸附活性较小的薄层板，以极性较大的洗脱剂展开；否则Rf太小，分离不好。展开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性；②可使成分间分开；③待测组分的Rf在0.2～0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间④不与待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中，黏度较小；⑥展开后组分斑点圆且集中；⑦混合溶剂最好用新鲜配制。仪器分析技术谢谢观看！仪器分析技术仪器分析技术薄层色谱分离分析技术

——薄层色谱法常用仪器与材料主要内容吸附剂12载板仪器分析技术4展开容器点样器36显色装置显色剂5检视装置7一、吸附剂硅胶聚酰胺微晶纤维素氧化铝硅藻土常用粒径5~40μm硅胶H硅胶G硅胶GF254硅胶HF254

仪器分析技术玻璃板（常用）塑料膜金属箔厚度2mm5cm×20cm10cm×10cm10cm×15cm10cm×20cm种类要求：表面光滑、平整清洁玻板处理措施：清洁剂或铬酸洗液浸泡洗涤，用清水充分清洗，再用蒸馏水或去离子水冲洗，表面应不附水珠，晾干备用二、载板仪器分析技术三、点样器手动全自动点样仪定量毛细管平口微量注射器定量毛细管全自动点样仪平口微量注射器仪器分析技术四、展开容器双槽薄层色谱专用展开缸平底色谱专用展开缸展开缸应适合薄层板的大小，并配有严密的盖子，展开缸底部应平整光滑，侧面应便于观察，常用的有以下两种。仪器分析技术五、显色剂通用型：与多数有机化合物反应，显示相同颜色斑点专属型：对特定官能团化合物起反应，显示特定颜色斑点。显色剂适用范围显色方法斑点颜色浓硫酸乙醇溶液多数有机化合物喷雾加热多数加热后呈黑色碘