动物疾病的实验室诊断-细菌病的实验室诊断基本技术（动物微生物与免疫）

细菌培养基的制备培养基制备的基本要求和程序要求：选取所需营养物质调整pH培养基应均质透明不含抑菌物质灭菌处理基本程序：

配料溶化测定及矫正pH过滤分装灭菌无菌检验备用肉膏汤培养基的制备普通琼脂平板和斜面培养基的制备半固体培养基的制备

细菌培养基的制备

材料牛肉膏、蛋白胨氯化钠、蒸馏水、琼脂、10%NaOHpH试纸、三角烧瓶量筒，天平酒精灯、等。方法

⑴调配成分⑵溶解⑶调节pH⑷分装⑸灭菌⑹质量检验⑺保存

培养基配制步骤

1.肉膏汤培养基的配制:

⑴称样：牛肉膏0.5g蛋白胨1g氯化钠0.5g

(2)待冷至40～50℃时，矫正酸碱度为pH7.6

(3)分装于试管内（每管约5ml）置高压蒸汽灭菌器内灭菌(121.3-20min)。

加至100ml蒸馏水中，加热溶化

2.普通琼脂平板培养基配制：

于100ml肉膏汤培养基中加入2.5g琼脂，溶解，矫正pH值，高压蒸汽灭菌，待冷至50～60℃，倒制平板。3.普通斜面培养基

于100ml肉膏汤培养基中加入1g琼脂，分装于试管内（每管约5ml）置高压蒸汽灭菌器内灭菌(121.3℃，20-30min)

.

配制见瓶签说明3.半固体培养基糖发酵培养基

取蛋白胨1g，氯化钠0.5g，琼脂0.5g，加入蒸馏水溶解，调节pH（7.6），加入1.6%溴甲酚紫0.1mL,加入事先溶解的单糖溶液，加蒸馏水定容100mL。分装，高压蒸汽灭菌。葡萄糖蛋白胨水

取蛋白胨0.7g，葡萄糖0.5g，磷酸氢二钾0.38g，蒸馏水溶解并定容100mL，调pH7.6，分装，灭菌。蛋白胨水

取蛋白胨1g，氯化钠0.5g，蒸馏水溶解并定容100mL，调pH7.6，分装，灭菌。细菌的生化检测二、

原理

各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异。不同微生物因具有不同的酶系统，分解利用糖类、脂肪类和蛋白类物质的能力不同，其发酵的类型和产物也不相同。细菌的生理生化反应在菌株的分类鉴定中有很大作用。

用于区分产气杆菌属和大肠杆菌属糖发酵实验不同菌对不同糖的利用情况不同：分解某糖产酸分解某糖产酸产气不能利用某糖糖发酵试验结果判断反应现象结果描述酸性变色、有气泡分解××糖产酸、产气酸性变色、无气泡分解××糖产酸、不产气培养基不变色不分解××糖甲基红(MR)实验葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇ＰＨ＞５.４甲基红阴性（–）

如:产气肠杆菌:-葡萄糖→丙酮酸PH≤４.５甲基红阳性（+）

如:大肠杆菌:+V-P实验葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇→二乙酰＋胍基化合物→红色化合物葡萄糖→丙酮酸H2S实验

含硫AAH2S+FeSO4FeS

(黑色)靛基质实验

色氨酸→吲哚→玫瑰吲哚吲哚试剂(对二甲基氨基苯甲醛)枸橼酸盐利用实验利用枸橼酸盐，细菌生长，培养基内铵盐分解产生氨从而变为碱性，指示剂溴麝香草酚兰由草绿色变为深蓝色+不能利用枸橼酸盐，无细菌生长，培养基仍为草绿色-大肠杆菌和产气杆菌生化特性比较大肠杆菌产气杆菌靛基质MRVP枸橼酸盐

大肠杆菌++--产气杆菌--++IMViC试验结果细菌的生理生化特性一、细菌的营养1、细菌的化学组成细菌的化学组成水分（70-90%）：结合水和游离水有机物蛋白质（主要成分，占固形物50%-80%）核酸（有RNA和DNA两种，前者主要存在于胞浆中，胞膜上；后者存在于核质、质粒中）糖类（主要以多糖、脂多糖和粘多糖的形式存在）脂类（存在于细胞壁、胞浆膜及胞浆内）其他有机物（各种生长因子和色素）无机物：以磷和钾含量最多2、细菌的营养类型营养类型自养菌光能自养菌化能自养菌异养菌光能异养菌化能异养菌腐生菌寄生菌按能量来源分按生活方式分按能量来源分

完全在无机环中生存，以CO2、碳酸盐为碳源，以铵盐和硝酸盐为氮源来合成细胞质的微生物称为自养微生物。自养微生物（无机营养型）

光能自养微生物（光能无机营养型）

可在完全无机的环境中生长，以CO2为碳源，光做能源，合成细胞有机物质的微生物叫光能自养微生物。

化能自养微生物（化能无机营养型）

在完全无机的环境中生长发育，以无机化合物氧化时释放的能量为能源，以CO2或碳盐为碳源，合成细胞物质的微生物叫化能自养微生物。这类细菌包括硫细菌、硝化细菌、铁细菌等。异养微生物（有机营养型）

在完全有机环境中生长繁殖，以含碳有机物为碳源，含氮有机物或无机物为氮源，合成细胞物质，称为异养微生物。光能异养微生物（光能有机营养型）

这类微生物具有光合色素。能利用光做能源，利用有机碳合成细胞物质的微生物，称光能异养微生物。化能异养微生物（化能有机营养型）

这类微生物以有机化合物为碳源，利用有机化合物氧化过程中产生的能量为能源，以有机或无机含氮化合物为氮源，合成细胞物质。这类微生物称为化能异养微生物。

由于栖息场所和摄取养料不同，可将异养微生物分为腐生型和寄生型两大类。腐生型：利用无生命的有机物获得营养物质。寄生型：从活的寄生体内获取营养物质。中间类型（兼性腐生或兼性寄生）如大肠杆菌。四种微生物的营养类型比较以上四种营养类型划分不是绝对的红螺菌既可利用光能，也可利用化能。氢单胞菌是异养和自养的过渡型（称兼性自养型）。微生物的营养类型区别

营养类型主要碳源能源代表菌光能自养型二氧化碳光能蓝细菌光能异养型有机物光能红螺细菌化能自养型二氧化碳无机物硫杆菌化能异养型有机物有机物大肠杆菌3、细菌的营养物质水溶剂和运输介质参与细胞内许多生化反应维持蛋白质、核酸等生物大分子稳定的天然构像有利于调节细胞温度和保持环境温度稳定碳源来源于糖类、脂类，提供合成物质原料、能量氮源来源于氨基酸、蛋白质等，合成菌体成分生长因子生长必需但自身不能合成的物质。如，维生素、氨基酸等。无机盐类钾、纳、钙、镁、磷、硫等，维持结构稳定，调节渗透压。大肠杆菌培养基

牛肉膏——碳源、能源、磷酸盐和维生素

蛋白胨——氮源和维生素

NaCL——无机盐

水鸭疫里氏杆菌培养时需有：X因子（高铁血红素）、V因子（辅酶Ⅰ或Ⅱ），即需用加鲜血制备的巧克力培养基培养。单纯扩散特点：物质进入细胞的动力是细胞内外的浓度差。这种运输方式不消耗能量。没有特异性，被运输物质不与膜上物质发生任何反应，物质不发生化学变化。4、细菌摄取营养的方式促进扩散特点:膜载体（载体蛋白）有很强的特异性在运输过程中，本身不发生化。能加快物质运输的速度。

膜载体在膜外与营养物质亲合力强，与这种物质结合，进入细胞后亲合力降低释放营养物质。像渡船一样，膜外装货，膜内卸货，这种扩散方式比单纯扩散速度快。被运送的物质可逆浓度梯度进入细胞内要消耗能量，必需有能量参加。有膜载体参加被运送物质不发生任何变化。主动运输特点:基团移位：是在研究糖的运输时发现的一种主动运输方式。运输过程中需要能量，被运输的物质发生化学变化的运输叫基团移位。许多糖就是靠基团移位进行运输的。这种运输方式是微生物通过磷酸转移酶系统来运输营养物质的。基团移位特点四种物质运输方式小结：单纯扩散——最简单的交换方式

气体、水溶性小分子物质、某些离子促进扩散——需浓度差和载体

糖或氨基酸主动运输——主要方式，需载体和能量消耗

氨基酸和各种营养物质基团转位——需化学修饰，需载体和能量消耗主要存在于厌氧性和兼性厌氧型细菌中，主要用于糖的运输，脂肪酸、核苷、碱基等各种摄取营养方式的比较运输方式浓度载体耗能运送分子发生变化单纯扩散高→低不需要不耗能不变化促进扩散高→低需要不耗能不变化主动运输低→高需要耗能不变化基团转位低→高需要耗能变化二、细菌的生长繁殖1、生长繁殖条件充足的营养物质适宜的酸碱度(pH)多数病原菌最适pH为7.2~7.6合适的温度

多数病原菌最适37℃

必要的气体据对氧气的需求可将细菌分为：专性需氧菌：如结核杆菌专性厌氧菌：如破伤风梭菌兼性厌氧菌：大多数病原菌微需氧菌：如空肠弯曲

CO2对细菌的生长也很重要。大部分细菌在新陈代谢过程中产生的CO2可满足需要。恰当的湿度和渗透压2、生长繁殖方式和速度细菌繁殖方式

无性二分裂二分裂繁殖；繁殖速度

多数细菌繁殖速度一般为20-30min一代；但少数细菌代时较长，如结核分枝杆菌为18～24h才分裂一次。

繁殖速度一般20～30分钟一代

二分裂繁殖3、细菌生长曲线

将一定数量的细菌接种在适宜的液体培养基中，定时取样计算细菌数，可发现细菌生长过程的规律性。以时间为横坐标，菌数的对数为纵坐标，可形成一条生长曲线，曲线显示了细菌生长繁殖的4个时期。

生长曲线是依据在体外人工培养条件下细菌的繁殖速度绘制的，在动物体内的细菌繁殖速度规律不符合生长曲线。生长曲线12培养时间细菌总数细菌数目的对数34活菌数

迟缓期12对数生长期23稳定期34衰退期4551.迟缓期特点生长速率常数等于零菌体粗大ＲＮＡ含量增加代谢活力强对不良条件抵抗能力降低

缩短迟缓期的意义和方法可以缩短生产周期，提高设备利用率。接种对数生长期的菌种，采用最适菌龄加大接种量用与培养菌种相同组成分的培养基2、指数期(对数期）

特点①活菌数呈对数增加②酶系活跃，代谢旺盛③生长速率最大，生产时间最短④细胞的化学组成及形态，生理特性比较一致特点活菌数保持相对稳定，总菌数达最高水平。细菌代谢物积累达到最高峰。芽胞杆菌这时开始形成芽胞。这是生产收获时期。3、稳定期4、衰亡期特点细菌死亡数大于增殖数,活菌数明显减少,群体衰落细胞出现多形态,大小不等的畸形,变成衰退型细胞死亡,出现自溶现象。三、细菌的新陈代谢1、细菌的酶（营养物质代谢）据作用位置分

胞内酶：细胞内发挥作用，与代谢有关（参与呼吸、蛋白质和多糖代谢过程的酶）

胞外酶：分泌到细胞外发挥作用，与毒力有关

（水解酶）据酶生产的条件分

固有酶：必须有的（如脱氢酶）

诱导酶：为适应环境而产生的，如大肠杆菌的半乳糖酶。（如大肠杆菌的半乳糖苷酶，只有培养基中加入乳糖时才产生该酶，分解乳糖。）2、细菌呼吸的类型（能量代谢）细菌的呼吸：细菌借助菌体呼吸酶从物质氧化过程中获得能量的过程。

据对氧的需求不同可分为3大类专性需氧菌

呼吸酶系统完善，呼吸时必须有充足的氧，在无氧的条件下不能生长。在高层振荡培养时，生长在表面。如，结核分枝杆菌。专性厌氧菌呼吸酶系统不完善，必须在无氧或氧浓度极低的条件下才能生长。在高层振荡培养时，生长在试管底部。如，破伤风梭菌。兼性厌氧菌

酶系统复杂，在有氧或无氧条件下均可生长，但有氧更佳。大多数细菌属此类。沉淀生长混浊生长菌膜生长专性厌氧型兼性厌氧型专性需氧型3、新陈代谢产物分解代谢产物糖的分解产物

产物：气体（CO2、H2）、酸类、醇类和酮类。鉴定试验：糖发酵试验、维-培（V-P）试验、甲基红（MR）试验等。蛋白质和氨基酸的分解产物产物：硫化氢、吲哚（靛基质）、明胶、氨、亚硝酸盐等。鉴定试验：靛基质试验、硫化氢试验、尿素分解试验、明胶液化试验、硝酸盐还原试验等。

意义：利用生物化学方法（生化反应）来鉴别不同细菌合成代谢产物通过新陈代谢不断合成菌体成分，如糖类、脂类、核酸、蛋白质和酶类等。此外，还能合成一些与人类生产实践相关的产物。动植物健康维生素：肠道菌合成VC，VB抗生素：放线菌和真菌可产生抗生素细菌素：抗菌范围较抗生素狭窄。大肠菌素、绿脓菌素等。杀菌或抑菌作用，用于治疗感染性疾病抗生素具抑菌或杀菌作用，但抑菌谱窄，主要用于细菌分型和流行病的调查。细菌素如维生素B6、B12、K2等，可用于治疗维生素缺乏所致的疾病维生素毒力毒素：内、外毒素，与细菌毒力有关热原质：生长在液体环境细菌产生一种多糖，注入动物体内引起反应，主要为细胞壁中的脂多糖，可成为内毒素，耐高温。酶类：代谢所需酶和毒力相关酶，如透明质酸酶细菌鉴定色素：金黄色色素、类胡萝卜素，对细菌鉴定有意义对组织细胞有毒害作用如透明质明酸酶、血浆凝固酶等。侵袭性酶内毒素

G－菌的脂多糖外毒素

G＋菌和少数G－菌产生的蛋白质毒素某些G-菌及少数G+菌产生的一类多糖物质，注入人体或动物体内可引起发热反应。革兰氏阴性菌产生的热原质为脂多糖。耐热，用高压灭菌法不能破坏，可经250℃，30分钟或180℃，4小时高温处理，液体中的热原质可用离子交换剂或过滤方法除去。热原质如葡萄球菌产生的金黄色色素、绿脓杆菌产生的绿脓素，可用于鉴别细菌。色素白色柠檬色细菌病的实验室诊断细菌实验室诊断在临床诊断的基础上，通过实验室诊断，确定病原是否是细菌以及病原菌的类型。病料收集采集保存运送细菌分离分离培养涂片染色镜检细菌鉴定纯化和鉴别培养生化试验动物接种血清学试验分子生物学试验一、病料的采集、保存和运送病料采集遵循的原则

防止污染、无菌采样、适时采样、适当部位（病料含病原多和病料适量）病料采集方法（不同病料不同方法）

实质脏器、液体材料、其他病料、病料的保存和送检二、细菌的形态学检查方法光学显微镜检查电子显微镜检查意义观察病料中有无细菌以及细菌的形态、数量、分布、结构、种类等，进行初步判断。染色镜检方法（2个时机）病料的涂片镜检（美蓝染色或瑞士染色）决定分离培养的重要依据确诊（禽霍乱、炭疽）分离培养菌的涂片染色（革兰氏染色）细菌鉴定方法之一生化鉴定和血清学鉴定的前提禽霍乱多杀性巴氏杆菌，组织或血液涂片瑞氏染色，菌体呈两极着色。是两端钝圆，中央微凸的短杆菌，长1～1.5um，宽0.3～0.6um，不形成芽胞，也无运动性。病料组织或体液涂片用瑞氏、姬姆萨氏法或美蓝染色镜检，见菌体多呈卵圆形，两端着色深，中央部分着色较浅，很象并列的两个球菌，所以又叫两极杆菌炭疽炭疽杆菌菌体粗大，两端平截或凹陷，是致病菌中最大的细菌。排列似竹节状，无鞭毛，无动力，革兰氏染色阳性，本菌在氧气充足，温度适宜（25～30℃）的条件下易形成芽孢。三、细菌的分离培养方法：用分区划分法在合适培养基上培养意义看培养基中有无细菌生长推断是否为细菌病依据菌落的特征判断细菌种类用菌落中的细菌进一步作形态学鉴定可进一步作生化鉴定、血清学鉴定及动物试验可进一步作药敏试验1、分离培养通常选用适合目标菌生长的平板培养基对细菌进行分离培养。不同细菌的菌落大小、形态、色泽、表面特征、边缘状态、隆起度、透明度等特征不同。有的细菌在鲜血琼脂平板上形成溶血环。

也可采用选择培养基或鉴别培养基，以起到抑制杂菌或快速鉴别的效果。比如肠道杆菌科可选择麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂。分区划线法不同细菌的菌落大小、形态、色泽、表面特征、边缘状态、隆起度、透明度等特征不同不同细菌的菌落溶血环有的细菌在鲜血培养基上有β-溶血现象伊红美蓝培养基、麦康凯培养基上大肠杆菌菌落2、细菌的生化试验进行生化试验的细菌必须是纯培养物。检验时，根据可疑细菌的生化特性选择特定的一组生化试验，将结果与标准进行对比，以确定病原菌的种类。例：不同种沙门氏菌的生化鉴定鸡白痢沙门氏菌鸡伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌不同种沙门氏菌的生化鉴定意义将待检细菌液接种到动物体内，观察动物发病情况，进一步确认可疑细菌的致病作用和类型。接种对象本种动物试验动物接种途径3、动物接种灌口肌肉注射腹腔注射皮下注射脑内接种静脉注射常用的动物接种途径4、血清学试验临床诊断中，可用于细菌的血清分型、快速诊断或大群检疫。用已知抗体检测动物体内的病原菌用已知的病原菌抗原检测动物血清中的抗体例：鸡白痢的检疫1、加一滴抗原2、加一滴鸡的全血3、将抗原和血液混匀4、静置2min,观察结果鸡白痢检疫—全血平板凝集试验鸡白痢检疫结果5、分子生物学方法分子生物学技术对病原菌的快速诊断和不能人工培养的细菌的探索发挥巨大的作用。

PCR技术、核酸分子杂交技术等。大肠杆菌病实验室诊断方案病料中细菌的形态学检查病料中细菌的分离培养18小时后动物致病性试验涂片革兰氏染色生化试验H2S试验糖发酵试验MR试验10日龄小鸡，皮下注射0.2ml/只收集病料纯培养大肠杆菌病实验室诊断结果剖检（采集病料）纤维素渗出物的涂片染色分离培养（麦康凯或伊红美蓝琼脂平板）培养物涂片革兰氏染色生化试验动物接种试验大肠杆菌病纤维渗出物中的细菌伊红美蓝培养基、麦康凯培养基上大肠杆菌菌落伊红美蓝培养基麦康凯培养基大肠杆菌培养物涂片革兰氏染色大肠杆菌生化特性细菌的分离纯化

1.细菌培养皿的接种方法（分区划线法）

123452.肉膏汤培养基3.普通斜面培养基4.半固体培养基细菌的人工培养1、培养基概念：把细菌生长繁殖所需的各种营养物质合理地配合在一起，制成的营养基质。按物理性状不同分种类用途液体培养基增菌，生化反应半固体培养基鉴别动力、保存菌种固体培养基斜面短期保存菌种、运送菌种固体培养基平板

纯化细菌，分离单个菌落常用培养基液体培养基半固体培养基固体培养基基础培养基厌氧培养基选择培养基鉴别培养基营养培养基按用途不同分基础培养基含细菌生长所需的基本营养成分：

常用牛肉浸膏，加适量的蛋白胨、NaCl、磷酸盐，调PH7.2-7.6即成常用类型：肉汤普通营养培养基蛋白胨水营养培养基基础培养基+生长因子常用类型：鲜血琼脂培养基血清琼脂培养基巧克力琼脂培养基用途：营养要求较高的细菌培养鉴别培养基培养基加入指示剂常用类型：伊红美兰培养基麦糠凯培养基三糖铁培养基用途：细菌鉴别三糖铁培养基麦康凯培养基厌氧培养基培养基加还原剂（如巯基乙酸钠），或用石蜡或凡士林封住培养基表面，以隔绝空气。常用类型：疱肉培养基。用途：厌氧菌的培养。选择培养基培养基中加某种化学物质，抑制不需要的细菌(非肠道菌)生长，利于需要分离细菌的生长(沙门氏杆菌分离)

常用类型：SS培养基3、制备培养基的基本要求和程序要求：选取所需营养物质调整pH培养基应均质透明不含抑菌物质灭菌处理基本程序：

配料溶化测定及矫正pH过滤分装灭菌无菌检验备用4、细菌在培养基中的生长现象液体培养基中生长现象

混浊：大多数细菌

沉淀：链状生长的细菌

菌膜：专性需氧菌，如结核杆菌、枯草杆菌菌膜沉淀浑浊对照液体培养基沉淀生长混浊生长菌膜生长固体培养基中生长情况分离培养：

将标本或培养物划线接种在固体培养基的表面，因划线的分散作用，使许多原混杂的细菌在固体培养基表面上散开。菌落：在固体培养基上，单个细菌分裂繁殖成一堆肉眼可见的细菌集团。用途：细菌分离、纯化、鉴定、药敏试验等类型：平板、试管斜面、高层菌落（R型）菌落（S型）菌苔半固体培养基中生长情况

有鞭毛细菌：

扩散生长，周围浑浊无鞭毛细菌：

沿穿刺线生长，周围透明细菌人工培养的意义在医学中的应用：①诊断和治疗；②细菌鉴定和研究；③生物制品。在工农业生产中的应用：发酵等在基因工程中的应用：外源DNA的重组细菌的染色常用的细菌染色法单染色法：只用一种染料使菌体着色，如美蓝染色复染色法：用两种或两种以上的染料染色，可使不同菌体呈现不同颜色，故又称为鉴别染色法，如革兰氏染色法、抗酸染色法等。

特殊染色法：细菌的荚膜、鞭毛、芽孢用普通染色法均不易着色。普通染色时，芽孢呈“空泡”状，

荚膜呈“透明圈”，

鞭毛则必须用特殊染色法才能观察到。美蓝染色原理

美蓝是常用的活体染色染料,当它处于氧化状态是呈现出蓝色,而还原态时为无色。用它进行活体染色时,由于活细胞代谢过程中的脱氢作用,美蓝接受氢离子后就由氧化转变为还原态,故表现出无色;而衰老的细胞由于代谢缓慢或停止,不能使美蓝还原,所以呈蓝色或者淡蓝色。美蓝染色涂片干燥固定滴加美蓝染色液吸干镜检革兰氏染色原理通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，并且其包含的类脂少或不包含。故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，不出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。革兰氏染色葡大肠杆菌草酸铵结晶紫革兰氏碘液95%乙醇石炭酸复红水洗镜检G-菌红色

G+菌蓝紫色染色注意事项1.涂片过程中，去生理盐水和细菌不宜过多，涂菌要均匀，不宜过厚。2.固定时温度不可过高，以载玻片背面不烫手背为宜，因为温度过高会破坏细胞的形态。3.水洗时，不应直接冲洗细菌涂面，水流不应过大、过急，以免细菌涂面被冲掉。特殊染色法普通染色鞭毛不着色芽孢染色荚膜染色菌毛染色细菌培养结果的观察液体培养基中生长现象

混浊：大多数细菌

沉淀：链状生长的细菌

菌膜：专性需氧菌，如结核杆菌、枯草杆菌菌膜沉淀浑浊对照液体培养基沉淀生长混浊生长菌膜生长固体培养基中生长情况分离培养

将标本或培养物划线接种在固体培养基的表面，因划线的分散作用，使许多原混杂的细菌在固体培养基表面上散开。用途：

细菌分离、纯化、鉴定、药敏试验等类型：

平板、试管斜面、高层菌落（R型）菌落（S型）菌苔菌落：在固体培养基上，单个细菌分裂繁殖成一堆肉眼可见的细菌集团。半固体培养基中生长情况

有鞭毛细菌：

扩散生长，周围浑浊无鞭毛细菌：

沿穿刺线生长，周围透明空白对照无鞭毛有鞭毛动物微生物显微镜油镜的使用及细菌形态结构的观察实验目的掌握利用显微镜油镜观察细菌形态结构的技能学会显微镜的日常保养了解显微镜的结构和油镜的使用原理显微镜的基本结构（目间距调节）（镜臂）（粗调节器）（细调节器）（载物台调节器）（镜体）（物镜转换器）（聚光器）（载物台）（物镜）（孔径光栏；彩虹光圈）（镜座）（视野光栏）（光照强度调节）（目镜）油镜的使用原理普通光学显微镜的物镜通常有低倍物镜（10×），高倍物镜（40×），和油镜（100×）三种。油镜的识别：油镜是三者中放大倍数最大的，因使用时必须浸于香柏油内，故称油镜。油镜与其他物镜有以下区别：（1）油镜一般是所有物镜中最长的；（2）油镜头上标有其放大倍数“100×”；（3）不同厂家生产的显微镜，常在不同镜头上标有不同颜色的线圈以示区别，