组培基本操作技术-培养基制备（园艺植物组织培养）

项目一培养基制备模块三

组培基本操作技术12CONTENTS母液配制培养基种类、成分项目一培养基制备3培养基配制及灭菌

母液一般分为五种：大量元素母液、微量元素母液、铁盐母液、有机物质母液、激素母液。一、母液配制一、母液配制园艺植物组织培养

1.保证培养基成分的称量准确性及配制时的快速移取；2.便于培养基低温保藏；3.提高工作效率。一、母液配制（一）培养基母液配制的目的园艺植物组织培养一、母液配制（二）母液配制流程图园艺植物组织培养

称量确定培养基

溶解

定容贴标签保存于冰箱一、母液配制称量药品园艺植物组织培养天平预置全显示清零称药一、母液配制园艺植物组织培养在冰箱内

低温保存

1.母液浓缩倍数：10-100；2.选用蒸馏水、重蒸馏水、分析纯或化学纯试剂；3.选用化学纯或分析纯试剂；4.称量、定容要准确，标识清晰，记录填写规范、全面；5.注意混合顺序，防止产生沉淀；

6.激素母液浓度不可过高：1mg/ml,1次配成50或100ml。一、母液配制（三）母液配制要求园艺植物组织培养7.激素溶解：IAA、IBA、GA、先溶95%酒精再定容；NAA先溶于热水或95%酒精再加水；2，4-D先溶于1mol/LNaOH再加水；

KT、ZT、BA先溶于1mol/LHCl再加水。一、母液配制（三）母液配制要求园艺植物组织培养一、母液配制MS培养基母液的配制园艺植物组织培养一、母液配制任务1：母液配制园艺植物组织培养1.学生分组提交母液配制方案，并准备所需设备和物品；2.各小组分别配制MS培养基大量元素母液；3.母液标识与保存：将配制好的母液分别倒入棕色瓶中，贴上标签，注明1.MS培养基母液名称、浓缩倍数、配制日期等。放入冰箱中保存。4.填记录：配制完后，填写母液配制登记表。项目一培养基制备模块三组培基本操作技术123CONTENTS母液配制培养基种类、成分培养基配制及灭菌项目一培养基制备

人为提供离体培养材料的营养源。配制的不同培养基，是为满足不同类型离体材料的营养需要。（一）配制培养基的目的二、培养基种类、成分园艺植物组织培养

完全培养基

固体培养基

液体培养基

基本培养基（二）培养基种类二、培养基种类、成分园艺植物组织培养◆无机盐、离子浓度高，含高K、N，硝酸盐含量较高，含铵盐。◆营养丰富。◆加速形成愈伤组织，促进培养物生长。MS培养基B5培养基SH培养基N6培养基KM-8P培养基White培养基（二）培养基种类二、培养基种类、成分园艺植物组织培养◆无机盐量较低。◆使用广泛。◆适合生根培养、胚培养◆胎培养等。MS培养基White培养基SH培养基B5培养基N6培养基KM-8P培养基二、培养基种类、成分园艺植物组织培养（二）培养基种类◆含较低的铵，硝酸盐和盐酸硫胺素用量较高。◆适合双子叶植物，尤其木本植物组培。MS培养基SH培养基B5培养基N6培养基KM-8P培养基White培养基二、培养基种类、成分园艺植物组织培养（二）培养基种类◆特点与B5相似，硫酸铵改用磷酸二氢铵。◆无机盐浓度较高。MS培养基SH培养基B5培养基N6培养基KM-8P培养基White培养基二、培养基种类、成分园艺植物组织培养（二）培养基种类◆成分简单。◆硝酸钾和硫酸铵含量高。◆适合花粉、花药培养。MS培养基SH培养基B5培养基N6培养基KM-8P培养基White培养基二、培养基种类、成分园艺植物组织培养（二）培养基种类◆有机成分复杂。◆用于原生质体培养(包括原生质融合的培养)。MS培养基SH培养基B5培养基N6培养基KM-8P培养基White培养基二、培养基种类、成分园艺植物组织培养（二）培养基种类营养分布均匀，生长发育整齐一致，但通气性差。通气性较好，便于操作，但营养分布不均，生长发育不一致。固体培养液体培养固液培养基二、培养基种类、成分园艺植物组织培养1.比较固体培养基和液体培养基的优缺点。2.配制MS培养基时，琼脂和蔗糖的加入量一般为多少？3.培养基的成分包括哪几类？各有何作用？4.在培养基成分中什么决定着外植体发育方向？5.抗生素的作用是什么？复习思考题二、培养基种类、成分园艺植物组织培养项目一培养基制备模块三组培基本操作技术123CONTENTS母液配制培养基种类、成分培养基配制及灭菌项目一培养基制备二、培养基种类、成分（三）培养基成分水分有机物天然物质

培养基支持物质辅助物质无机盐培养基成分园艺植物组织培养要求：蒸馏水或重蒸馏水（即蒸馏水再蒸馏一次）

配制母液和研究时以保证各种成分的精确性和完全人为控制；大规模生产时可用自来水。二、培养基种类、成分培养基成分--水分园艺植物组织培养二、培养基种类、成分培养基成分--无机盐

元素名称添加形式大量

元素

(≥0.5mmol/L)微量元素(≤0.5mmol/L)NPKCaMgSFeBMnCuMoClKNO3,NH4NO3KH2PO4NaH2PO4KClKNO3CaCl2·2H2OMg2SO4·7H2OMg2SO4·

7H2OFeNa2-EDTAH3BO3MnSO4CuSO4Na2MoO4·2H2OCaCl2·2H2O园艺植物组织培养二、培养基种类、成分有机物维生素氨基酸植物激素碳水化合物培养基成分--有机物园艺植物组织培养二、培养基种类、成分培养基中有机物--碳水化合物种类：蔗糖或葡萄糖、果糖等。蔗糖浓度：2-3%，胚培养为4-15%注意：高压灭菌部分糖会分解。大生产时可用白砂糖。园艺植物组织培养二、培养基种类、成分培养基中有机物--维生素种类：VB1、VB6、Vpp、Vc及生物素、叶酸。浓度：0.1－1.0mg/L

VB1

促愈伤组织产生，提高活力

VB6

促根生长

Vpp

与代谢和胚发育有关

Vc

防组织褐变作用园艺植物组织培养二、培养基种类、成分培养基中有机物--植物激素1.生长素类（1）种类：IAANAAIBA2,4－D（2）作用：诱导愈伤组织和根分化，促进细胞分裂和伸长。（3）稳定性与溶解性：除IAA外，对热和光均稳定。多用95%酒精或稀NaOH溶液助溶。一般配成0.1-0.5mg/ml的母液。（4）浓度：0.05－5mg/L园艺植物组织培养二、培养基种类、成分培养基中有机物--植物激素

2.赤霉素（GAs）（1）种类：GA3（2）作用：促茎伸长，促胚发育成植株；打破休眠；一般在器官形成后加入。（3）稳定性和溶解性：不耐热，在低温条件下保存；溶于酒精，配制时可用少量95%酒精助溶。园艺植物组织培养二、培养基种类、成分培养基中有机物--植物激素

3.细胞分裂素（CTK）（1）种类：6－BAKTZT（2）作用：诱导不定芽分化和茎、苗增殖。（3）稳定性与溶解性：CTK对光、稀酸和热均稳定；溶解于稀酸和稀碱中，配制时常用稀HCl助溶。通常配制成1mg/ml的母液。（4）浓度：0.05－10.0mg/L园艺植物组织培养二、培养基种类、成分培养基中有机物--氨基酸培养基中最常用的氨基酸是甘氨酸，丙氨酸等。有时采用水解乳蛋白或水解酪蛋白，用量在10-1000mg/L之间。缺点：营养丰富，极易引起污染。如无特别需要，以不用为宜。园艺植物组织培养二、培养基种类、成分天然复合物香蕉泥马铃薯椰乳培养基成分--天然复合物园艺植物组织培养椰乳促愈伤组织和细胞培养，用量10～20%，使用注意茎尖大小。

香蕉泥对PH值缓冲大，用量150～200ml/L，应用在兰花组培。培养基成分--天然复合物园艺植物组织培养二、培养基种类、成分二、培养基种类、成分培养基成分--支持物质1.琼脂(1)用量：6－10g/L(2)种类：琼脂粉琼脂条(3)作用：固化作用注意：新买应试凝固力。2.其它

玻璃纤维、滤纸桥、海绵等园艺植物组织培养二、培养基种类、成分辅助性物质抗氧化物活性炭抗生素培养基成分--辅助性物质园艺植物组织培养种类

抗生素作用：防污染，减少材料损失。注意：抗生素对组织生长有抑制作用，使用要慎重用量：5－20%二、培养基种类、成分园艺植物组织培养二、培养基种类、成分抗氧化物1.常用抗氧化剂：半胱氨酸、VC、PVP2.用量：50－200mg/L，3.作用：防止氧化注意：可用抗氧化剂洗涤外植体伤口表面。园艺植物组织培养二、培养基种类、成分活性炭1.作用：具吸附作用；茎尖初代培养可防褐化；促进新梢增殖（浓度0.1—0.2%）；促进生根；防止组培苗玻璃化（浓度0.3%）；有利于胚胎培养。2.常用浓度：0.5－10g/L园艺植物组织培养二、培养基种类、成分组培所需药品价钱一览表药品名称规格包装价格（元）琼脂粉强度900g/cm2

1kg180琼脂条强度500g/cm21kg140MS干粉培养基（41.5克配成一升培养基）含蔗糖和琼脂粉500g90园艺植物组织培养二、培养基种类、成分组培所需药品价钱一览表药品名称包装价格（元）IBA10g100NAA50g30KT10g2502,4-D100g50TDZ塞苯隆100mg350反玉米素50mg2806-BA10g150园艺植物组织培养二、培养基种类、成分组培所需药品价钱一览表药品名称包装价格（元）烟酸100g60肌醇100g35VB1100g55甘氨酸100g10VB650g50园艺植物组织培养二、培养基种类、成分组培所需药品价钱一览表药品名称包装价格（元）硫酸亚铁500g30乙二胺四乙酸二钠盐500g50KI500g174钼酸钠500g340吐温-80500ml23