主管检验技师考试临床医学检验微生物检验讲义细菌的培养与分离技术

第第1页共6页·细菌的培育与分别技术考点根本条件细菌的接种与分别技术细菌培育的方法细菌的生长现象细菌L【内容讲解】细菌培育是将细菌接种到培育基内，并在适当的环境内，使细菌生长和生殖。分别培育是指从标本中培育出细菌或者从混有多种细菌的标本中将各个菌种分别同时培育出来。一、根本条件〔一〕细菌试验室〔二〕无菌试验室〔三〕根本设备和器具〔一〕细菌试验室标本接种、培育、分别、鉴定及药敏试验等工作都要在此完成。细菌室必需安装严密的门窗，以防室内环境受到外界的污染。且室内禁用风扇，避开细菌的播散。细菌室必需安装供空气消毒的紫外线灯，置于操作台上面lm处，每天开头工作前照耀20min。对其消毒效果要定期检查，准时更换失效的灯管。室内应备有消毒剂，用于试验中发生菌液洒溅时的准时消毒处理。同时还应备有供工作人员浸手用的盛有消毒剂的水盆、肥皂及自来水源等。室内操作台须每日用消毒剂擦洗，地面至少一周用消毒剂擦洗l次。对接收的标本、无菌器具、用过的物品等应明显分开并放在指定位置。同时要对用过的物品准时进展灭菌处理。细菌室依据当地的气温特点，安装空调机，以适合细菌试验工作。同时室内应设置必要的消防设备。〔二〕无菌试验室无菌试验室是细菌试验室内用于无菌操作的小室，其内部装饰、消毒条件要求更严格。无菌室应完全封闭，人员出入应有两道门，其间应隔有缓冲区。用前应以紫外线消毒30min，定期用乳酸或甲醛熏蒸，彻底消毒。在无菌室中一般仅限于分装无菌的培育基及传染性强的细菌的接种，不进展有菌标本的分别及其他操作。无菌室内应仅限操作人员进入，而且进入无菌室应着隔离衣和专用鞋，操作时戴口罩，随时保证室内的无菌状态。条件有限的试验室，可用超净工作台代替无菌试验室进展相应的操作。超净工作台应选择垂直气流通风方式。无菌室应配备空调设备，保证不因室温而影响工作。〔三〕根本设备和器具温箱、C02培育箱、厌氧培育设备；显微镜；高压蒸气灭菌器、干烤箱；冰箱和冷藏柜；接种器具，包括接种环和接种针；pH二、细菌的接种与分别技术选择好适宜的培育基，依据待检标本的来源、培育目的及所使用培育基的性状，承受不同的接种方法。接种分别法 用途接种分别法 用途连续划线分别法主要用于杂菌不多的标本。平板划线分别法分区划线分别法适用于杂菌量较多的标本。斜面接种法 要用于单个菌落的纯培育、保存菌种或观看细菌的某些特性。液体接种〔避开气溶胶的产生多用于一些液体生化试验管的接种。穿刺接种法倾注平板法涂布接种法此法主要用于半固体培育基、明胶及双糖管的接种。测定牛乳、饮水和尿液等标本细菌数时常用此方法。常用于纸片法药物敏感性测定，也可用于被检标本中的细菌计数。三、细菌培育的方法〔一〕需氧培育法〔二〕二氧化碳培育法〔三〕厌氧培育法〔一〕需氧培育法临床细菌室最常用的培育方法，适于一般需氧和兼性厌氧菌的培育。35℃18～24h。〔二〕二氧化碳培育法5%～l0%C0环境才能生长良好。2二氧化碳培育箱：是一台特制的培育箱，既能调整CO的含量，又能调整所需的温度。CO从钢瓶通2 2过培育箱的CO运送管进入培育箱内，调整好所需CO浓度自动把握器后，将接种好的培育基直接放入培育2 2箱中培育即可。适于大型试验室应用。烛缸法：将已接种好的培育基置枯燥器内，并放入点燃的蜡烛。枯燥器盖的边缘涂上凡士林，盖上CO含量约占5%～1035℃温箱内培育。218～24h3～7d化学法：按每升容积参与碳酸氢钠0.4g0.35ml〔三〕厌氧培育法适用于专性厌氧菌和兼性厌氧菌的培育。常用的厌氧培育法有：①疱肉培育基法；②焦性没食子酸法；③厌氧罐法；④气袋法；⑤厌氧手套箱法。四、细菌的生长现象〔一〕细菌在固体培育基上的生长现象〔二〕细菌在液体培育基中的生长现象〔三〕细菌在半固体培育基中的生长现象〔一〕细菌在固体培育基上的生长现象观看菌落血琼脂上的溶血气味色素观看菌落菌落特征包括大小、外形、突起、边缘、颜色、外表、透亮度和粘度等。依据细菌菌落外表特征不同，可将菌落分为三型：光滑型〔S〕菌落粗糙型〔R〕菌落粘液型〔M〕菌落血琼脂上的溶血α溶血：又叫草绿色溶血，菌落四周血培育基变为绿色环状。β溶血：又称完全溶血，菌落四周形成一个完全清楚透亮的环。γ 溶血：即不溶血，菌落四周的培育基没有变化；红细胞没有溶解或无缺损。双环：上层溶血环，内层为β溶血，外层为α溶血。如产气荚膜梭菌。气味通过某些细菌在平皿培育基上代谢活动产生的气味，有助于细菌的鉴定。如铜绿假单胞菌〔生姜气味〕、变形杆菌〔巧克力烧焦气味〕、厌氧梭菌〔腐败的恶臭味〕、放线菌〔泥土味〕等。〔二〕细菌在液体培育基中的生长现象浑浊生长：大多数细菌。沉淀生长：少数链状排列的细菌如链球菌、炭疽芽胞杆菌。菌膜生长〔外表生长〕：专性需氧菌如枯草芽胞杆菌、结核分枝杆菌和铜绿假单胞菌。〔三〕细菌在半固体培育基中的生长现象半固体培育基用于观看细菌的动力。羽毛状或云雾状浑浊生长，为动力阳性。无鞭毛的细菌只沿穿刺线呈明显的线状生长，为动力试验阴性。Lβ-内酰胺类和其他作用细胞壁抗生素的抵抗性。标本采集应尽量采集无杂菌污染的组织或体液标本。胸水、腹水及尿液标本，应加20%蔗糖无菌溶液，以保持高渗；血液标本应接种高渗肉汤增菌培育。培育方法〔1〕L将标本接种到1～7天，然后转种L37℃2～7。典型菌落为“荷包蛋”样，但从患者标本中分别的L型菌落常不典型，多呈颗粒型菌落，涂片染色为多形性。〔2〕检验报告：①血平板无菌生长，LLL型平板中有LL③血平板及L型平板均有菌落生长。涂片有原菌及L型两种形态特征，可报告细菌型及L型同时存在，并分别作药敏试验以供临床用药参考。【例题】单个细菌在固体培育基上生长可形成A.菌丝B.菌落C.菌团D.菌苔E.菌膜502389090101]【正确答案】B【例题】尿液标本作L20%蔗糖的缘由是供给高养分使尿中蛋白质变性C.稀释尿液D.保持高渗环境E.中和尿液的酸度502389090102]【正确答案】D【例题】多用于含细菌量较多的标本的接种方法是分区划线分别法琼脂斜面培育基接种法C.半固体培育基接种法D.液体培育基接种法E.倾注平板法502389090103]【正确答案】A【例题】关于平板划线分别培育法，表达错误的选项是适用于临床标本的分别培育目的是使标本中的细菌各自形成单一菌落C.常用划线方式为平板分区划线D.接种细菌越多越好E.接种时斜持平板〔45°〕502389090104]【正确答案】D【例题】以下细菌试验室一般留意事项，错误的选项是A.穿着专用白外套、帽B.操作中不应谈话C.养成在室内手不触及口、面、发的习惯D.除接等紧急状况下，离室前必需消毒液洗手E.室内不准跑动，以免引起风