细菌的形态学检查（动物微生物与免疫）

细菌的形态学检查目录/CONTENTS1不染色标本的检查3细菌的革兰氏染色2染色标本的检查细菌染色标本片电子显微镜下的细菌01不染色标本的检查不染色标本的检查不染色标本的检查法主要用于检查细菌的动力及运动状况。湿片法悬滴法负染色法不染色标本的检查湿片法湿片法又称压片法。用接种环取细菌培养液2环，置于清洁载玻片中央，轻轻覆上盖玻片，于显微镜油镜下观察。制片时菌液要适量，不可有气泡，不可外溢。不染色标本的检查取洁净的凹窝载玻片、盖玻片各一块，将凹孔四周的平面上涂薄薄一层凡士林，取1环接种环菌液置盖玻片中央，将凹窝载玻片的凹面向下，对准于盖玻片的液滴上，然后迅速翻转玻片，用小镊子轻轻压，使盖玻片与凹孔边缘粘紧，使凡土林密封其周缘，菌液不致挥发变干。悬滴法不染色标本的检查于玻片上加一滴苯胺黑，用灭菌的接种环取待检材料少许，混于苯胺黑中，并立即将其涂开，使成薄的涂片，干后用油镜检查，可在黑色的背景上，看到不着色的细胞。负染色法02染色标本的检查染色标本的检查通过对标本的涂片及染色，能观察细菌的形态、大小、排列、染色特性，以及芽孢、鞭毛、芽胞、异染颗粒等结构，有助于细菌的初步识别或诊断。单染色法复染色法特殊染色法染色标本的检查单染色法是只用一种染料使菌体着色，如美兰染色。涂片干燥固定滴加美兰染色液吸干镜检

染色标本的检查复染色法是用两种或两种以上的染料染色，可使不同菌体呈现不同颜色，故又称为鉴别染色法，如革兰氏染色法、抗酸染色法等。复染色法染色标本的检查细菌的荚膜、鞭毛、芽孢用普通染色法均不易着色。普通染色时，芽孢呈“空泡”状，荚膜呈“透明圈”，鞭毛则必须用特殊染色法才能观察到。荚膜特殊染色法鞭毛特殊染色法03细菌的革兰氏染色细菌的革兰氏染色革兰氏染色法是由一位丹麦医生汉斯·克里斯蒂安·革兰于1884年所发明，最初是用来鉴别肺炎球菌与克雷白氏肺炎菌之间的关系。汉斯·克里斯蒂安·革兰细菌的革兰氏染色革兰氏阳性菌革兰氏阴性菌细菌的革兰氏染色革兰氏阳性细菌细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此呈现蓝紫色。细菌的革兰氏染色革兰氏阴性细菌细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。细菌的革兰氏染色酒精灯、接种环、载玻片、吸水纸、生理盐水、革兰氏染色液、染色缸、洗瓶、显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、细菌培养物。细菌的革兰氏染色（1）抹片取洁净的载玻片一张，把接种环在酒精灯火焰上烧灼灭菌后，取1～2环的无菌生理盐水，放于载玻片的中央，再将接种环灭菌，冷却后，从固体培养基上挑取菌落或菌苔少许，与水混匀，作成直径1cm的涂面。接种环用后需灭菌。（2）干燥涂片应在室温下自然干燥，必要时将涂面向上，置火焰高处微烤加热干燥。（3）固定将干燥好的抹片涂面向上，在火焰上来回通过数次（一般4～6次），以手背触及玻片微烫手为宜。细菌的革兰氏染色初染：草酸铵结晶紫媒染：革兰氏碘液脱色：95%酒精复染：石炭酸复红细菌的革兰氏染色革兰氏阳性菌革兰氏阴性菌细菌的革兰氏染色操作注意事项(1)制作的细菌涂片应薄而匀，否则不利于染色和观察。(2)干燥及火焰固定时切勿紧靠火焰及时间过长，以免温度过高造成菌体结构破坏甚至烤焦。(3)标本片固定必须要结实，以免水洗过程中菌膜被冲掉。(4)在染色过程中，掌握酒精的脱色时间极为重要，如脱色时间过长，则若干革兰氏阳性的细菌被脱色而误染成阴性；反之，如脱色时间不足，则原为阴性的细菌可因脱色不足而误认为阳性。脱色的时间长短，与涂片的厚薄、脱色时玻片摇动的快慢和滴加酒精