核酸(DNA和RNA)的亚细胞定位观察

首都师范大学生命科学学院实验报告姓名胡瑱霞刘畅学号112080000111120800017成绩课程名称细胞学实验时间星期三（上/下）上午实验题目核酸（DNA和RNA）的细胞核定位观察【实验目的】掌握经典的核酸定位细胞学方法-Unna染色法了解并掌握细胞核中含有RNA成分的亚细胞结构及其关系。【实验原理】1.Unna染色法原理：核酸是酸性的，它们对于碱性染料具有亲和力，但是DNA和RNA对甲基绿-派洛宁混合染料的亲和力不同，而使这两种染料对两类核酸具有了选择性。DNA被甲基绿染成绿色，RNA被派洛宁染成红色，这样就能使细胞中两种核酸分布显示出来。固定的目的和意义：为了使切取的标本最终能真实地反映其生活状态下正常的结构，必须用物理或者化学的手段迅速地杀死组织和细胞，使组织和细胞中的各种细胞器以及大分子保持生活状态的结构，并牢固地固定在其以原来的位置上。5、核酸（DNA和RNA）的分子组成：一个核苷酸是由一分子含氮的碱基、一分子五碳糖和一分子磷酸组成的。DNA是染色体的主要成分，主要在细胞核质内呈双螺旋结构。RNA是单链线形，主要有三种类型:RNA种类rRNAtRNAmRNA含量细胞全RNA的80％左右约占全部RNA的15％只占5％左右作用核糖体重要组成部分它在蛋白质生物合成过程中具有转运氨基酸的作用。它是以DNA为模板合成的，它又是蛋白质合成的模板。存在部位行使功能的rRNA存在于细胞质中。而其合成、加工和核糖体大、小亚单位的装配都是在核仁中进行的。存在于细胞质中。合成时存在于细胞核中，但作为模板翻译蛋白质时则存在于细胞之中【实验结果及其分析】现象：①实验组：40倍镜下的洋葱表皮细胞细胞核染色质核仁洋葱内表皮细胞细胞核染色质核仁洋葱内表皮细胞②对照组：40倍镜下的洋葱表皮细胞洋葱内表皮细胞细胞核染色质核仁洋葱内表皮细胞细胞核染色质核仁（2）结果：实验组的洋葱表皮细胞细胞核染色质部位呈绿色，核仁呈红色，同时细胞质也呈现微微的红色。在对照组中，细胞核染色质部位没有被染成绿色，核仁和细胞质也没有被染成红色。（3）分析：①DNA和RNA对甲基绿-派洛宁混合染料的亲和力不同，使这两种染料对两类核酸具有了选择性。DNA被甲基绿染成蓝绿色，RNA被派洛宁染成红色，使细胞中两种核酸分布显示出来。由于实验组的洋葱内表皮细胞中既含有RNA又含有DNA，所以图一中每个细胞核都有蓝绿色和红色之分。因为rRNA是核糖体的重要组成部分,而rRNA的合成、加工和核糖体亚单位的装配都是在核仁中进行的。所以呈红色的为细胞核的核仁；因为细胞核的染色质是由大量DNA和蛋白质等复合形成的，所以被染成了蓝绿色。同时，细胞质中也含有微微红色，这是由于其中也有RNA的存在的缘故，比如装配好行使功能的rRNA和它游离的大小亚基，作为合成蛋白质模板的mRNA以及转运氨基酸的tRNA等。②对照组中，经过强酸（TCA）和90°C水浴处理后，洋葱内表皮细胞中的RNA和DNA结构均遭到一定程度的破坏，无法被Unna染液染色，所以呈现阴性结果，用来排除假阳性，保证实验结果的正确性。【实验反思】根据我们组的结果，阴性对照组背景有一些偏红，估计可能是分色是的时间较短。在用丙酮的时候，应注意控制时间，这是染色成功的关键，这次我们的时间是12s左右，以后可以适当延长，这样镜检时可能就会发现背景比较清晰，能够更好的反应出核酸的细胞核定位。在进行实验时我们发现，因为对照组需要90°C水浴加热，所以容易把洋葱内表皮煮烂，导致无法进行很好的纸片镜检。建议可否缩短水浴时间，或者降低水浴的温度，在呈现实验结果的同时使其对照组不容易被破坏。七、思考题1.DNA和RNA的亚细胞定位在哪里?为什么？答：DNA定位在细胞核的染色质中，因为染色质是由大量DNA和蛋白质复合形成的，所以在染色后呈现蓝绿色。RNA定位在细胞核的核仁以及细胞质中。因为rRNA是核糖体的重要组成部分,而rRNA的合成、加工和核糖体亚单位的装配都是在核仁中进行的；同时，细胞质中也有RNA存在，比如装配好行驶翻译功能的rRNA和它游离的大小亚基，作为合成蛋白质模板的mRNA以及转运氨基酸的tRNA等。所以细胞核的核仁及细胞质均被染成淡红色。2.解释一下本实验中设立对照组的必要性是什么，三氯乙酸和丙酮各起什么作用。答：对照组中，经过强酸（TCA）和90°C水浴处理后，洋葱内表皮细胞中的RNA和DNA均遭到一定程度的破坏，无法被Unna染液染色，所以无色，呈现阴性结果，来排