复试分子生物学1移动又叫转位因子由于它可以在染色体基因组上甚

一．geneMuD108。断裂（splitgene：真核细胞的结构，其核苷酸序列中含有与氨基酸编码无关DNA间隔区段，从而被分割成不连续的若干区域。将这种编码序列不连续，有间隔区段的DNA片断称为断裂。非编码间隔区段称间隔子，有转录和编码功能序列称表达子。 genes：核苷酸彼 假：在珠蛋白簇（genecluster）各片断核苷酸序列分析时发现，除了有正常的功BamHBglⅡ。和扩增，可包装30-45kb外源，可由Ampr抗性筛选，常用于构建文库。COS细胞：用一个起始部位缺失的SV40突变种猴细胞，由于DNA不能自COS细胞。DNA载体相接，而后转入大肠杆菌，建立克隆株，即cDNA文库（genelibrary。转化：以质粒作为克隆载体将目的导入宿主细胞。转化作用就是一种型细胞从周围介质中吸收来自另一种型细胞的DNA，进而使原来细胞的遗传和遗传性发生（体是细菌的，因此噬菌体DNA导入大肠杆菌的感受态细胞也称转染。（启动子：是位于结构上游，转录起始调控所必需的一段DNA序列，是RNA聚合酶列。当启动子与全酶结合后可在+1转录起始点开始转录。ATG，酸。在细菌中也有罕见的起始子GUG，编码缬氨酸。其起始表达作用AUG＞GUG。mRNA合成的信号。一般为一段发卡结构的反向重复序列。粘性末端DNA分子在限制酶切割后产生一条链多出几个碱基的互补对称的突出末端，若5’突出称5’粘性末端，他们能够通过碱基间的配对而重新环化起来，末端的DNAUAG，UGA，DNA链DNA噬菌体M13)、动物。PCR.：聚合酶链反应，是依据细胞内DNA半保留的机理，以及体外DNA分子于不同温度下双链和单链可以互相转变的性质，在试管中给DNA的体外合成提供一种合适条件：模板DNA，寡链核苷酸引物，DNA聚合酶，合适的缓冲液系统和DNA变性、复性及延伸的温度与时间等，使加入的4dNTP5’→3’按碱基配对原则,形成与模板DNA互补的半保留链。23.GenomicDNA：即组DNA，指组成生物组的所有DNA，包含一个生物体的全部遗DNADNA总和即为一组24、Intron：即间隔子（内含子），与原核的蛋白质编码相比真白质编码最主要的特点是其转录区的编码序列是间断的不连续的其中非编码序列叫间隔子。它是转录物被剪除掉的相应DNA分子。25、Exon：即表达子（编码序列）,与原核的蛋白质编码相比真白质编码最主要的特点是其转录区的编码序列是间断的不联系的其中编码氨基酸的序列叫表达子。它是转录物经加工后被保留的相应的DNA分子。26transformation（trancriptio：过程称为转录。包括转录起始、延伸、终止等过程。转录是不对称的，体现为在DNA双链（translatio：上游,含有特有的相似或一致序列,RNA聚合酶的转录效应。按功DNA序列片段。反式作用因子DNA的顺式作用元件特定序列结合，发挥调节作用的核内非组蛋白，激活或阻遏表达。transcriptionfactor：即转录因子，能够结合在某上游特异核苷酸序列上的蛋白质，活化后从胞质转位至胞核，通过识别和结合启动子区的顺式作用元件,启动和调控瞬时表达：外源进入宿主细胞后，不整合到受体细胞而独立于其外，稳定表达：具有选择性标记，有完整的哺乳动物细胞转录系统，但无真核子的表达载体，在转染哺乳动物细胞后，外源进入真核细胞后，可将整合到细胞上，可随细胞转录表达和传代。通过对转染DNA的阳性细胞克隆筛选，则可获得外源整合到细胞中稳定表达的细胞亮氨酸拉链：存在于蛋白C末端，为两组平行，带亮氨酸的α—螺旋形成的对称二30个氨基酸，每两个亮氨酸之间隔有六个氨基酸，于是每两圈螺旋就有一个亮2个α-螺旋的蛋白分子之间形成一条拉链。形成二聚体后可使肽DNA亲和力较强而发生结合。突变：是组DNA分子在结构上发生碱基对组成或排列顺序的改变（通常它只涉及中部分序列的变化，并引起表型的改变,而使生物体发生遗传性变异。无义突变：某个碱基的改变可使某种氨基酸的子突变为终止子。如赖氨酸的密码子AAG突变为终止子TAG,使肽链合成过早终止,因而蛋白质产物一般没有活性。若是发生在DNA的3’末端处,它所表达产生的多肽常有一定活性或有部分活性,这种突死突变（leakymutation。同义突变是指碱基被替代后,没有改变产物氨基酸序列,这是与子的简并性相关,如CTT、CTC、CTA、CTG的第3位碱基互相替代后其编码表达的产物均为亮氨酸,因此这种突DNA1IFN-2IFN-1/2或IFN-2/1IFNs也可根据需要将具有协同效应的不同进行接拼。缺失：将原中的非功能区域的编码子人为地使之缺失的过程称为缺失，所表达的产物相对分子质量虽然小了，但有时可提高表达效率，如IL-6N17~25个核苷酸可使IL-6的表达效率提高。有时还可降低一些毒性作用。如TNF缺失某一区域可42、重组载体：将外源性的DNA直接插入缺陷型的组上，插入的外源片段的细胞中增殖，并包被成颗粒。但为了补充被取代组DNA功能，必须用一种与之互补的辅助。43.重组质粒型载体：即重组-质粒载体，这类载体只取组中维持在哺乳动物中进行的有关序列以及抗性标记，使它与一个细菌质粒融合，这样的重组体也能够在大肠杆菌中进行和增殖，不过这种重组体不能够被包装成病毒颗粒，不能出现裂解的情况。44.工程多肽：使微生物对具保护作用的抗原经体外重组表达后所的生物活性多肽类称工程多肽或亚单位其表达系统可以是酵母，也可以是哺乳动物细胞，若无需糖基化的多肽甚至可在大肠杆菌等原核细胞中表达。45.置换(generecement)：指将致病整个地被有功能的正常所置换，使致病永久地得到更正。但操作难度大，有学问题。46.修正(genecorrection)：指将致病的突变碱基序列得以纠正，而正常序列部分予47.修饰(geneaugmentation)：指将目的导入缺陷细胞或其它细胞目的的表48.失活(geneinactivation)：应用反义技术特异封闭某些的表达，以达到抑制或阻止某些有害的表达。SiRNA的干扰可造成靶（异常）的失活（或沉默。转动物：就是把外源性目的导入动物的卵或其囊胚细胞中，并在细，物的内,使之发育成具表达目的的胚胎动物,并能传给下一代。这样的动物为转动物。这类动物由于外源性目的的稳定存在而赋于子代动物。，与细胞核供体相同动物的技术，就叫做动物克隆。敲除：是向正常生物内引入某个突变位点而选择性地使某特定功能失组率原因，较大。：指编码有功能蛋白质多肽链或RNA分子所必须的全部核酸序列。一个不仅5’3’端的终止子非编码序列。前者为结构后者为调控。什么叫？何谓的新概念？其主要功能是什么：答就是指编码有功能蛋白质多肽链或RNA分子所必须的全部核酸序列。所谓的新概念是随着近年分子生物实验技术的发展从分子水平上研究的结构和功能移动遗传信息的基本遗位是构成DNA的功能单位。：答：不能，真核细胞序列中的内含子是插入在结构中间使其不能连续的间隔序DNAmRNA，而后在转录后的加工修饰过程中通过两次转脂反应而剪切，在原核细胞中，由于其组序列不包括这类内含子，也缺乏相应的内含子的同时，真核生物在原核细胞中表达还必须有相应的原核RNA聚合酶以及可识别的原核RNA试述DNA分子的结构及其意义答：DNADNAA,T,C,G一些特定序列以其大量信息决定着DNA的空间结构及间相互作用和调控功能。DNA二级结构：为DNA双螺旋结构，由两条反向平行互补的脱氧核糖核苷酸链组成，两条链之间靠碱基间的氢键结合，多为右手螺旋。意义：解释了DNA时两条链可分别作为模板生成新的子代互补链，从而形成遗传信息稳定传递的半保留机制。序列的分子剪刀；2、作为表达抑制物，选择阻断靶，抑制转录；3、序列专性蛋白质结合，影响DNA与蛋白质结合及DNA转录等试述cDNA文库的构建过程及其意义答：过程：1、cDNA克隆：选用目的含量丰富的组织细胞，提取总RNA，根据3’末端polyA尾长度不一亲和层析法获取较纯的mRNA2第一股cDNA合成分离纯化的mRNAmRNA的不同结合点合成全长cDNA第一链（RNA-DNA）3、第二股cDNA的合成：⑴自身引导4、cDNAcDNADNA。意义：1mRNAcDNA2、真核生物细胞表达mRNA的量比人类组少很多，因此减少了筛选目的的工作量。3、列中直接找到编码区，推测氨基酸顺序，分析性质和功能。5、克隆后可在原核细胞中试述组文库的构建过程及其意义：（1）DNA（2）的DNA片断：包括完全酶解，部分酶解和机械切割（3）构建组文库载体，常用载体：粘性质粒，λ噬菌体酵母人工系统（4）DNA片段与载体的连接包装直接与经BamHⅠ消化酶切的λT4DNA，然后进行体外包装产生完整的具有强力的噬菌体颗粒，继而形成噬菌斑（5）导入细胞，一DNADNA→②组DNA+λ噬菌体→重组DNA→包装成噬菌体→细菌→噬菌（1）化，又催化非甲基化的DNA的水解；而Ⅱ型只催化非甲基化的DNA的水解；III型同时具有试述双脱氧末端终止DNA法的原理及过程2’，3’–双脱氧核苷酸（ddNTP）DNAddATP,ddCTP,ddGTP,ddTTP),然后进行聚合反应.在第一个反应物中,ddATP会随机地代替dATP加反应一旦ddATP入了新合成的DNA链,由于其3的羟基DNA链都是到AGTPCRPCRPCR23DNA2PCRPCR1一起再对靶作第二轮PCR扩增其产物即DNA。道球菌转化实验，不仅证明了生物的遗传物质是DNA，而且还证明了DNA可以转移，并1961年Monod和Jacob提出子学说，1968年Crick和Nireberg完全破译64个遗传密码子，确定遗传信息是以子方式传递的；4、转移载体的发现：20世纪60年代，发现了细菌的质粒，它是指生物体以外的环状DNA，具有独立自我的能力，可在；序仪；PCR（PCR。M13答：作为理想的质粒载体应具备以下几个条件（1）能自主，即本身是子（2）具功能（3）在组中有1-2个筛选标记为寄主细胞提供易于检测的表型特征（4）分子量插入失活效应也为克隆的选择提供了表型常用的有免疫功能失活和大肠杆菌-半乳例一：免疫功能失活。Imm434是噬菌体434的免疫区段，通过噬菌体杂交的办法导入噬菌体组，构成插入型的派生载体。在CⅠ内部有EcoRⅠ和HindⅢ的单一切割位点，若在这两个位点中任意一个插入外源DNA片段，都会导致CⅠ的失活，阻遏蛋白合成受例二：-半乳糖甘酶组中含有一个大肠杆菌的LacZ区段，在诱导物IPTG存在下，可指导合成-半乳糖甘酶与X-gal结合形成蓝色化合物因此由这样的载体的大肠杆菌Lac-指示菌，涂布在含有IPTGX-gal的培养基上，会形成蓝色噬菌斑。但若在LacZ区段插图DNA如何利用抗体标记答：1、抗生素抗性标记筛选：大多数质粒载体均带有抗生素抗性，如抗氨苄西林2、抗性的插入失活：在含有两个抗性的载体中，如果目的DNA片段插入其中对照筛选，可筛选出阳性重组子克隆菌株。如pBR322质粒编码有Tet抗性和Amp抗性，若通过外源DNA片段使Tet或Amp抗性失活，则重组体克隆能在只含有一种抗生如何从所克隆到重组体中鉴定目的的存在和正确性（1）记筛选：当带有完整抗性的载体转化抗性细胞后，所有转入载体的细菌都获得了抗性，能生长。b、抗性的插入失活筛选：在含有两个抗性的载体中，如果目的DNA片段插入其中一个抗性，就会导致抗性功能失活，用两个含不同抗生素的平板进行对照筛选。c、-半乳糖甘酶LacZ失活：通过内互补作用，使缺失LacZ的突LacI-半乳糖甘酶活性的的突变体结合，形成有功能活性的-半乳糖如果外源中能够表达Leu，则可使细菌生长。（1）利用能与插入片段两端互补的特异引物，以少量抽提的重组子DNA为模板扩增出特异性和用特异探针进行杂交（5）斑点杂交：将重组体DNA或RNA提取出来，将样品点在硝酸纤维膜上进行杂交。纯化的重组体去除了杂质干扰（6）Southernblot：将同源片段定位答：一般用细菌的或小牛肠的碱性磷酸酶（BAPCAP，预先处理线性的载体DNA分子，以连接起来了这样形成的杂种DNA分子的每接位点中，载体DNA都只有一条链是外源DNA连接上的，而另外一条链由于失去了5’-P基团，不能作此连接，故留下一个具有3’-OH和5’-OH的缺口，尽管如此，这样的DNA分子仍然可以导入细菌细胞，并在寄主细胞内切酶切割目的和载体，产生两个不同的粘性末端，避免该现象。作用特点：1、多数位于真核生物结构上游，只有终止子位于下游，而增强子可以在上游也可以在下游。2、能够与DNA结合蛋白质结合的特定序列的DNA片段。3、决定转录起始RNA作用特点：1DNA2DNARNARNA、应用：1、遗传性疾病的治疗2、肿瘤的治疗（1）抑癌转移的治疗（2）策略（2）使HIV细胞的方法（3）降解策略、20有哪几种反义核苷酸失活疗法？简述其原理答：原理：反义RNA是一mRNA互补的RNA它是双链DNA中无意义链转RNA，因此肿瘤癌活化表达的mRNA的起始翻译部位就会被相应的反义RNA互补结合形成RNA/RNA双链体进而就了核糖体与启动子结合或核糖体mRNA上移以抑制mRNA反义核酸包括三类：1mRNA和DNA结合，形成RNA/DNA杂链或DNA核苷酸三聚体，影响的翻译或转录。3、特常表达的mRNA而影响的翻译。或成年动物的体细胞使之与去掉细胞核的细胞融合，经短期培养后形成胚胎细胞并移植到生殖周期相近的之中，可以发育成为正常动物。经过核移植而产生的动物，其与细胞核供体相同动物的技术，就叫做动物克隆。应用价值：1、培育优良畜种和生产实验动物。2、生产转动物。3、生产人胚胎干细胞用于细胞和组织替代疗法。4、濒危动物物种，保存动物物种资源。试述PCR的原理及过程答：原理：是依据细胞内DNA半保留的机理，以及体外DNA分子于不同温度下双链和单链可以互相转变的性质，在试管中给DNA的体外合成提供一种合适条件：模板DNA，寡链核苷酸引物，DNA聚合酶，合适的缓冲液系统和DNA变性、复性及延伸的温度与时间等，使目DNAPCR1NA9CDNA2PCRDNA的通过控制退火条件就能使其与扩增34种dNP及g聚合酶在最适作用温度下可将3’30RT-PCR。录酶的作用下以mRNA为模板合成速、简便且敏感性极高的检测RNA的方法，可用于分析的转录产物、克隆cDNA及合成cDNAcDNART-PCR1mRNA，引物和逆转录酶以及适当的缓冲体系在70C5min，生成相应的cDNA。2、dNTP，DNA聚合酶，引物，适当的缓冲体系，37C1h，而后95C5min灭活反应体系中的其他杂质，4C24试述肿瘤的发生机理抑制作用。3细胞在增殖过程由于某些因素使DNA在