血型检查方法学评价及其质量控制

血型概述

血型是人类血液以血型抗原为表现型的遗传性状，ABO血型系统和Rh血型系统是红细胞的两大血型抗原抗体系统，在临床输血和血液遗传学研究上有重要意义。

血型鉴定(bloodtyping)是临床输血的首要问题，正确的血型鉴定是保证输血安全的前提条件。目前一页\总数三十四页\编于十二点主要内容ABO血型系统ABO血型系统抗原ABO血型系统抗体ABO血型系统亚型ABO血型鉴定检测原理鉴定方法方法学评价质量控制RH血型系统RH血型系统抗原RH血型系统抗体RH血型鉴定检测原理鉴定方法方法学评价质量控制目前二页\总数三十四页\编于十二点ABO血型系统抗体分为天然抗体和免疫性抗体天然抗体主要为IgM型免疫球蛋白免疫性抗体则来自母婴血型不合的妊娠或血型不合的输血，通常是来自母体的IgG型免疫球蛋白。目前三页\总数三十四页\编于十二点ABO血型系统抗体两种抗体的比较特性IgM型IgG型分子量（kD）1000160耐热性（70℃）破坏稳定与红细胞结合最适温度（℃）4-2537与红细胞反应介质生理盐水酶处理或清蛋白溶液被血型物质中和能不能通过胎盘不能能目前四页\总数三十四页\编于十二点ABO血型系统亚型A抗原的主要亚型有A1和A2，均能与抗A血清发生直接凝集反应。AB血型中也存在相应的A1B和A2B亚型。B亚型较少见，且抗原性弱，故临床意义不大。目前五页\总数三十四页\编于十二点ABO血型检测原理血型抗原与相应抗体在反应介质中形成红细胞和相应血型抗体结合的免疫复合物，出现肉眼可见的凝集现象。正向定型（directtyping）反向定型（indirecttyping）目前六页\总数三十四页\编于十二点鉴定方法血凝试验玻片法试管法全自动微板法流式细胞技术酶联免疫吸附试验微柱凝胶试验目前七页\总数三十四页\编于十二点鉴定方法盐水凝集法（saltmediumtest）目前八页\总数三十四页\编于十二点鉴定方法正定型，玻片法目前九页\总数三十四页\编于十二点鉴定方法玻片法评价它是目前临床常用的血型鉴定的初筛试验方法。具有操作简便，节省材料的优点。但弱凝集反应需要借助显微镜观察确定。目前十页\总数三十四页\编于十二点鉴定方法反定型，试管法目前十一页\总数三十四页\编于十二点鉴定方法试管法评价——优点试管法是交叉配血试验中最基础的试验方法之一。与玻片法原理相同，但是借助试管更大的反应空间，并对待测红细胞予以一定的浓度的稀释或者加入更多的待测红细胞，通过低速离心后可根据有无肉眼可见凝集反应来判断结果。由于待测红细胞经过稀释，在一定程度上减少了血液中非特异性抗体的浓度，从而提高了试验的敏感性。比玻片法更具有准确可靠的优点。目前十二页\总数三十四页\编于十二点鉴定方法试管法评价——缺点只能检测出完全抗体（抗A、抗B）引起的血型不合，对免疫性抗体引起的血型不合不能检出，有输血史或不明输血史及妊娠史不能用该法。本实验中的生理盐水对血清（浆）中的抗体有稀释作用，易导致配血结果假阴性。易受冷凝集素的干扰。目前十三页\总数三十四页\编于十二点方法学评价盐水凝集法操作简便，无需特殊仪器。玻片法：无需离心，适用于血型普查。但反应时间长，灵敏度差，凝集较弱时易导致定型错误。不适于反向定型。试管法：用离心法加速反应，所需时间短，适于急诊定型。因离心增强红细胞凝集，可发现较弱的凝集现象，有助于检出亚型，故为常用血型鉴定方法。只能检测完全抗体易受冷凝集素干扰目前十四页\总数三十四页\编于十二点鉴定方法凝胶微柱法目前十五页\总数三十四页\编于十二点鉴定方法凝胶微柱法的结果目前十六页\总数三十四页\编于十二点方法学评价凝胶微柱法重复性好，特异性和灵敏度高，结果准确。试剂成本较高，需用离心设备。根据不同需要可选用中性凝胶、特异凝胶或抗球蛋白凝胶作为反应介质。结果既可肉眼观察，也可用血型分析仪分析。目前十七页\总数三十四页\编于十二点鉴定方法全自动微板法标准化加样、孵育、离心、悬浮、静止反应前后吸光度值增加数值的计算对血型进行正定型与反定型目前十八页\总数三十四页\编于十二点方法学评价全自动微板法此法正反定型试验，准确率高，且能提高检测灵敏度，使弱凝集样本更加易显现。快速、准确、自动化程度高等优点，适合批量操作。血型微量化检测具有节约大量昂贵抗血清、缩短检测时间、操作程序简单等优点，目前在各大采供血机构已得到广泛应用。目前十九页\总数三十四页\编于十二点鉴定方法流式细胞技术稀释：将待测血样的红细胞用生理盐水稀释成百分之五的红细胞悬液。标记：分装各管分别等比加入荧光素标记抗体，避光放置15min待受检红细胞上的血型抗原与相应荧光标记抗体结合后，用生理盐水洗涤离心除去未结合抗体。检测：重悬后立即用流式细胞仪检测与荧光标记抗体结合的红细胞，通过软件分析，从而得到待测样本的红细胞血型。目前二十页\总数三十四页\编于十二点方法学评价流式细胞术在细胞分型方面具有速度快、灵敏度高、特异性好，检测结果准确，重复性好。特别适合应用于ABO血型亚型的快速鉴定。目前有研究指出流式细胞技术亦可通过分离孕妇血液中的胎儿红细胞用于产前非侵入性胎儿血型检测。目前二十一页\总数三十四页\编于十二点质量控制1.标准血清要求：新鲜，在有效期内，效价高，凝集力强，严防污染常用的抗血清有：人血清ABO血型抗体：稳定性高，已灭活补体人ABO血型单克隆抗体：稳定性较人血清抗体的稳定性差目前二十二页\总数三十四页\编于十二点质量控制2.被检红细胞标本新鲜，严防污染。某些疾病出现假凝集，可加做自身血清和红细胞，自身红细胞和生理盐水对照试验及结合反定型结果进行鉴定。当疑有血浆成分干扰血型鉴定时可用生理盐水反复洗涤红细胞以除干扰。目前二十三页\总数三十四页\编于十二点质量控制3.试验器材器材清洁、干燥、标记清楚。用试管法定型时，应同时进行正向和反向定型。须设置对照。红细胞浓度按要求配置，红细胞与相应抗体的比例适当。反应温度、反应时间、离心时间。弱A亚型和弱B亚型，肉眼判断必同时须用显微镜复查。目前二十四页\总数三十四页\编于十二点Rh血型系统抗原及抗体Rh血型系统抗原目前已发现的Rh抗原有45种，其中与人类关系最为密切的是D、E、C、c、e五种。D抗原的抗原性最强。Rh血型系统抗体绝大多数Rh抗体由输血或妊娠刺激机体免疫系统产生的IgG型免疫性抗体。主要Rh血型系统抗体有抗D、抗E、抗C、抗c、抗e五种，其中抗D最为常见。目前二十五页\总数三十四页\编于十二点Rh血型检测方法酶介质法聚凝胺试验（polybrenetest）目前二十六页\总数三十四页\编于十二点Rh血型检测方法抗球蛋白试验（antiglobulintest）目前二十七页\总数三十四页\编于十二点Rh血型检测方法人源盐水介质抗D试验低离子强度溶液试验目前二十八页\总数三十四页\编于十二点CompanyLogo方法学评价

方法

评价酶介质法（直接法）

简单、快速、经济，但灵敏度低。酶介质法（间接法）

简单、经济、灵敏。可鉴定抗原和检测抗体。

但较费时，准确性和稳定性较差低离子强度溶液试验反应时间短，灵敏度高聚凝胺试验快速、灵敏、准确性高，应用较多抗球蛋白试验

检查不完全抗体最可靠方法，但操作复杂，

费时，试剂较贵。多用于新生儿溶血病的诊

断及因血型不合输血产生的血型抗体的检测人源盐水介质抗D试验

操作简单，特异性和灵敏度均高，应用广泛，

但试剂昂贵目前二十九页\总数三十四页\编于十二点质量保证检测前标本处理：标本新鲜，严防污染。为避免假阴性，被检红细胞要用生理盐水充分洗涤。试剂和器材：使用有效期内的合格试剂。抗血清要妥善保存，防治污染。使用的仪器、器材清洁干燥。目前三十页\总数三十四页\编于十二点质量保证检测中抗原抗体比例、介质浓度反应时间、反应温度、离心条件阴性对照、阳性对照及试剂对照红细胞上的Rh抗原与相应抗体反应形成的凝集较弱，观察结果不可用力振摇当结果可疑时，须用显微镜观察确认目前三十一页\总数三十四页\编于十二点质量保证检测后复查实验全过程，填写试验报告，查对无误后方可发出报告。标本置4℃保存1周以上，以备复查。目前三十二页\总数三十四页\编于十二点临床上血型检查的质量控制1、医务人员的问题临床医生临床护士抽取血标本时，未校对患者的姓名、床号检验科人员没有对报告核对正确，造成血型鉴定