无创产前项目简介

无创产前基因检测简介

钦州市妇幼保健院检验科胡天2015年9月22内容提要sd_bao@常见染色体疾病概述染色体非整倍体病发病机理传统产前筛查与诊断技术介绍无创产前项目、院内流程四一二三一，染色体非整倍体概述（唐氏综合征为例）sd_bao@7世纪考古学家挖掘出典型唐氏综合征体征颅骨。素描画中见到具有唐氏综合征样面容的儿童。JohnLangdonDown医生第一次对唐氏综合征的典型体征进行完整的描述并发表。Down’ssyndrome.法国遗传学家(JeromeLeJeune)发现唐氏综合征是由人体的第21号染色体的三体变异造成的现象。16世纪1866年1959年21、18、13-三体综合征是人类最常见的三种染色体疾病，患儿面容特殊，绝大多数为严重智力障碍及器官畸形，对家庭和社会造成巨大危害和负担。现代医学对胎儿染色体疾病尚无有效治疗方法，最好的方法是在孕期通过产前筛查及诊断，发现异常并及时采取相应措施染色体非整倍体疾病临床表现21－三体照片a.同源染色体不分离;b.姐妹染色单体不分离

二，染色体非整倍体病发病机理减数分裂中染色体不分离第一次减数分裂第二次减数分裂三，现有的产前筛查与诊断手段sd_bao@产前筛查母血清学筛查颈项透明膜厚度筛查产前诊断羊水穿刺绒毛取样

脐静脉穿刺7侵入性诊断方式风险计算现有产前筛查和产前诊断的缺陷性来源：Estimatedprenatalscreeningperformance1991-2006(2006dataareprovisional),EnglandandWales.sd_bao@产前筛查（S）100,000筛查结果阳性（SP）7,000筛查结果阴性（SN）93,000唐氏综合征胎儿400真阳性（TSP）340假阴性（FSN）60非唐氏综合征胎儿99,600假阳性（FSP）6,660真阴性（TSN）92,9401992-2006传统诊断方法（穿刺）导致的正常胎儿流失5619最紧迫任务：新方法的探索：提高检测的准确性与检出率、降低检测过程中的假阳性率和假阴性率。sd_bao@

四，无创产前基因检测技术产生前提一：孕妇外周血中存在胎儿DNA

胎儿DNA来源和特点来源：1胎儿细胞通过胎盘渗透到母血中，被母体免疫系统破坏，胎儿DNA残留下来；2胎儿细胞凋亡；3胎盘滋养层细胞的凋亡基本特点：1含量有一定的变化规律。妊娠第4周开始可检出胎儿游离DNA，随着孕周增加而增加，存在个体差异，平均浓度。2分娩后短时间内消失，平均半衰期为16.3min(4-30min)，2h就无法检出。再次妊娠不影响检测结果。3DNA片段较小，平均166bp左右。常规技术很难检测前提二：第二代高通量测序仪发明6亿个DNA片段/次，全基因组测序只要10天/台；90个DNA片段/次，全基因组测通要50年/台。（2012年）无创产前基因检测：母血浆DNA+高通量测序2023/5/22母体和胎儿ＤＮＡ的混合物13Uniquereads(单一序列读取）:nomismatch,onelocation(Loetal,PNAS,2008)理论模型

母亲Chr21：95×2=190母体外周血中Chr21=190+10=200以21-三体为例：100DNA单位/毫升血浆。其中，95个单位来源于母亲，5个单位来源于胎儿通过大规模并行测序，获得分布在每条染色体上的真实的核酸片段数量，经过计数与比较：正常胎儿或者

21-三体胎儿

正常胎儿

Chr21：5×2=10

母亲Chr21：95×2=190

21-三体胎儿

Chr21：5×3=15母体外周血中Chr21=190+15=205医院无创产前基因检测流程sd乔_b带ao撇@s葛in帖a.火co宫m准确遮性高证于99秘%；早期变诊断，12孕周呆即可调检测拣；减辜少妊礼娠晚善期引贫产对样孕妇颤造成永的伤辆害；非侵性入性，减泛轻孕奸妇心图理负秆担，禽无流晒产风险险以币及产冻前诊翻断引同起的过并发龟症；可以矩同时障检测其它哄染色住体异瓦常所需在样本韵量少，只柄需5毫升母体悲外周纱血。无创永产前态基因康检测痰的优势牲：无创养产前父基因羊检测浩的优势禾：保鸦险保滤障检测勺结果悲为高厕风险竿受检斧者产前拳诊断仔所产另生的恢费用{含：众羊膜良腔穿亡刺术(或经呈皮脐减静脉蝇穿刺乱术)和染悄色体该核型庭分析鼻和染拳色体采荧光铜原位虏杂交由（或FI志SH）}，保宫险公亦司给巴予报可销超谅过25胳00元。检测它结果肝为低厘风险，若任受检颂者婴比儿出明生后忽一年曾内经态县级治以上不检测弄医院隙专科稠医生拍明确厕诊断湖患有遭“21据-三体每综合念征”尖、“18忙-三体惨综合弃征”厚、“13另-三体斑综合啊征”焰，保铃险公潮司支俗付受播检者击保险寇二十骗万元意整孕期纷各项壳检测早信息驴图10恢-1装3.只5周早孕绵期筛漏查(检六出率辩85否%)中孕梳期筛叫查(检望出率什81凭%)15趁-2善0周16顶-2掠2周羊水喷穿刺（流携产率0.由5-性1%）9-掉11周绒毛瞧取样（流横产率1-送5%）24瘦-2阵8周脐带涉血取仅样（流摔产率血1-3%）040周12哨-2模4周无创仍产前修基因疯检测（准确坟率>交99夏%）适应秋人群窗和适劫应症经B超确椒认为嫁单、腔活胎庭孕妇瓦；可检椒测胎翅儿-1绵3三体核、18三体抄和21三体兵；孕12周以屯上均开可进饶行检广测。禁忌秋人群燃、禁侨忌症怀多篇胞胎习的孕花妇；孕妇升本人查为染坟色体渗非整畅倍体限疾病雅患者腊；孕妇抢接受铁过异虫体输倚血、柱移植奥手术帅、干谁细胞接治疗支、接农受过女配偶殊或亲分属淋遥巴细危胞免尽疫治壤疗等沈；无法精确检测农胎儿孕染色侄体嵌庸合型臣、易徒位型炉、微粱缺失厘、微优重复蚊、微障缺失布等结姜构性穗异常报；院内艰流程检测怜前确挖认事叠项：1.单活珠胎（榆超声校确认我）2.孕后截未接子受过脸异体带的血排液制独品；3.孕12周以迷后开晴始检青测产前戏诊断填中心/产科适就诊,医生近解释绑该项喉目孕妇庸签署软知情我同意盏书/送检怨单,领取朝保险贝卡孕妇咳交费雨后返限回产前叉诊断品护士涛站抽血故（附巾知情育同意/送检资单）采血汇：ED鼠TA抗凝懂管采集外周肃血5m债l（轻渗微颠泥倒采惊血管4次）护士徐打印2张条满形码1张贴支于采录血管及上，1张贴兆于申凑请单展的右母上角采血宗后护零士立察即交填给标本应处理博人员（附土申请郊单）密（产揉前诊节断中罗心3楼标裳本接吓收处（标鲜本4℃保存攀，不差可室挂温放宏置）；标本丝式处理贯人员8小时比内分离阁血浆牌，并芽填写歇样本卸信息豪单全血毁采集抽取仰孕妇践外周众血5假mL，采子用ED牧TA抗凝甘；采血赶完毕趴后，茎轻微书颠倒装采血精管4次，捐并及涂时将躲采血静管放仗置于4℃冰箱典中，惊在4小时溜内进验行血旨浆分榜离工隔作。【注意偏事项】采血陷时孕颤妇无搂需空眨腹；采血锐管为5真mL养E扫DT宰A抗凝石管；颠倒定混匀瓜时动减作不抱能太蠢剧烈寇，防腹止溶退血。血浆扑分离1、将什采血宾管4℃16稿00愁g离心10哑mi滨n，上迹清（嚷血浆涂）分扯装到铸置于鞋冰盒苦上且猾已编徐号的2.炮0m津l的EP管中利。【注意通事项】1）严划格核核对样颤本编侮号、醋确保余编号沉唯一叙；2）开进启离守心管贩时，穿不能浓碰到姻管内驱盖；3）吸柏取血由浆过弟程中细不要痰吸到械中间抱层的性白细躺胞；2、上拍述血币浆4℃16姜00仍0g离心10拣m购in，冰隙盒上俘将上卸清转乘入已翻编号纤的2.仁0m兆l雨EP管中瓶，每撞个离跑心管咏转入60屿0u瞧l血浆专。同时时在茂每个2.狱0m买l离心对管上烈标记防样本胸编号散、血于浆体垄积、推分离平日期民。【注意搬事项】1）严团格核决对样旬本编设号、鸽确保忆样本纽奉编号茅唯一倦；2）开窃启离瞒心管患管盖呜时，督不能胜碰到熊离心萌管内摊盖；3）将龙分离绞好的输血浆南贴上议对应吨的条旅码并循用封难口膜熟密封释，密昼封结歪束后药立即尊将血未浆放慌入-2沈0℃或-8晴0℃冰箱乳中，宋避免药反复兔冻融它。【注意剧事项】全血命须保孝证在8小时肝内进义行血冠浆分剪离；分离允后的灵血浆刊在-2疑0℃冰箱次中可圈保存3天，开长期斯保存帝需存弯放于-8抬0℃冰箱在。样本运储存认与运勒输1、全苍血样爷本在昂冰袋(4℃)条件免下运候输，销且在4小时御内送斥达样纳本接座收处斜，样墨本接焦收后出要立询即完蜜成血扬浆分府离。2、血膜浆样纺本在蛛干冰梅（-2时0℃）条丛件下俗运输添，并扬确保脾样本填送达饰时有享干冰磁剩余质，到诉达后备及时换存放幸于-8莫0℃冰箱具中，脸禁止相将样晃本在踪蝶室温外下放衡置。【注意比事项】1）泡域沫箱留的规踢格：别壁厚6c曾m、外岂径长39晶cm、外肯径宽32粗cm、外肠径高35袍cm。2）干衡冰用酿量：10公斤/2屠-3天；15公斤/4萌-5天；菠根据晌运送蛋时间梯的长跟短，依相应膀增加圆干冰坏用量钉。样本数T21T18T13XOXXYXXXXYY样本总数26619272891513753核型分析347619163108643假阳性—1101000假阴性—0000000检出率—100%100%100%100%100%100%100%假阳性率—0.03%0.03%0.00%0.02%0.00%0.00%0.00%阳性预测值—99.48%98.44%100%88.89%100%100%100%假阴性率-0%0%0%0%0%0%0%阴性预测值—100%100%100%100%100%100%100%数据犹统计苗（截驶至20励12年3月）全球10序0多家湾合作布医院购。完成费核型训验证34魄76例，酱产后港随访爬验证54椒89例。病例惜分析葡：单右纯型/标准瓣型标准宏型T2傲1样本华编号构：PD伪P1蛮00脾03列76经1孕妇盾年龄粒：31唐牵筛凑：1/凭51饮0（低粥风险极）无创寻检测勒：T2岭1核型鹿分析哄：47，XX，+2曾1T1唐3样本他编号摊：PD门P1摔00镇00路33帝21孕妇竿年龄寻：32无创跌检测衣：T1顷3核型效分析兴：47，XX，+1萄3病例开分析孩：单亡纯型/标准牧型T1截8样本可编号萝：PD代P1壁00壤00围21永90孕妇务年龄蛛：32无创按检测怨：T1筋8核型肺分析佳：47，XY，+1外8T9PD研B1尖1A奋J0颠00抓26，41岁，生孕23捧w+训4周无创筒检测吐：T9羊水度核型府：T9T1缠6PD白B1火1A基J0挡07门83，30岁，声孕19周无创太检测必：16号染舌色体缎偏多羊水FI传SH：T1堤6病例草分析忍：其性它染什色非兼整倍搞体病例惹分析温：T9嵌合吩体PD铜B1辣1A东G0秤01痒06，39岁，筒孕20周无创标检测铺：两股次测肌序结史果均吨