青蒿素类抗疟药课件

掌握青蒿素类抗疟疾药物的基本结构和主要性质

第十二章

第二节青蒿素类药物的分析熟悉青蒿素类抗疟疾药物的鉴别试验和纯度检查方法了解青蒿素类抗疟疾药物的杂质检查方法是继乙氨嘧啶、氯喹、伯喹之后最有效的抗疟特效药，尤其是对于脑型疟疾和抗氯喹疟疾，具有高效、速效和低毒的特点，曾被世界卫生组织称做是“世界上唯一有效的疟疾治疗药物”。

(3R,5aS,6R,8aS,9R,12S,12aR)-八氢-3,6,9-三甲基-3,12-氧桥-12H-吡喃并[4,3-j]-1,2-苯并二塞平-10(3H)-酮

青蒿素简介2011年9月，中国女药学家屠呦呦因创制新型抗疟药———青蒿素和双氢青蒿素的贡献，获得被誉为诺贝尔奖“风向标”的拉斯克奖。这是中国生物医学界迄今为止获得的世界级最高级大奖。

基本结构基本性质鉴别含量测定重点内容倍半萜过氧桥内酯氧化性易水解旋光性无共轭碘化钾-淀粉羟戊酸铁反应香草醛酸-硫酸水解后UV法HPLC一、青蒿素类药物的基本结构与主要性质青蒿素将青蒿素结构中C-10位羰基还原成羟基得到双氢青蒿素(dihydroartemisinin)，进一步烷氧基化得到蒿甲醚(artemether)，而进行酯化可得到青蒿琥酯(artesunate)。药物名称物理性质鉴别检查含量青蒿素Artemisine无色针状结晶，味苦。在丙酮、乙酸乙酯、三氯甲烷中易溶，在甲醇、乙醇、稀乙醇、乙醚及石油醚中溶解，在水中几乎不溶；在冰醋酸中易溶。熔点为150～153℃[]D(无水乙醇)+75o～+78o。1.碘化钾试液-淀粉2.羟肟酸铁反应3.HPLC4.IR1.有关物质(TLC)2.干燥失重HPLC法双氢青蒿素Dihydroartemisinin白色针状结晶；无臭，味苦。在三氯甲烷中易溶，在丙酮中溶解，在甲醇或乙醇中略溶，在水中几乎不溶。熔点为145～150℃，熔融时同时分解。1.碘化钾试液-淀粉2.香草醛硫酸反应3.旋光4.IR1.有关物质(TLC)2.干燥失重3.水分4.炽灼残渣5.重金素HPLC法青蒿琥酯Artesunate白色结晶性粉末；无臭，几乎无味。在乙醇、丙酮或三氯甲烷中易溶，在水中极微溶解。熔点为131～136℃(口服用)或132～137℃(注射用)[]D(二氯甲烷)+4.5o～+6.5o。1.香草醛硫酸反应2.羟肟酸铁反应3.HPLC4.IR1.酸度2.溶液的澄清度3.氯化物4.有关物质(HPLC)5.水分6.炽灼残渣7.重金素HPLC法蒿甲醚Artemether白色结晶或结晶性粉末；无臭；味微苦。在丙酮或三氯甲烷中极易溶解，在乙醇或乙酸乙酯中易溶，在水中几乎不溶。熔点为86～90℃。[]D(无水乙醇)+168o～+173o。1.碘化钾试液-淀粉2.香草醛硫酸反应3.HPLC4.IR1.氯化物2.有关物质(TLC)3.残留溶剂(GC)4.干燥失重5.炽灼残渣HPLC法青蒿素类药物的物理性质、鉴别、检查及含量测定

(一)典型药物的结构与物理性质

由于青蒿素类药物分子结构中母核，不具有共轭体系，其紫外吸收光谱的主要是末端吸收。但C-10由于取代基的不同具有一定吸收特征。

(二)主要化学性质

由于青蒿素类是具有过氧桥的倍半萜内酯类化合物，这类化合物具有氧化性。

青蒿素类药物都均有旋光性，均为右旋体药物。青蒿素其比旋度为+75°～+78°，蒿甲醚其比旋度为+168°～+173°。

青蒿素结构中由于有内酯，在碱性条件下，发生水解，但其他药物由于母核中没有内酯，没法发生水解。氧化性旋光性水解反应UV吸收特性二、鉴别试验(一)、呈色反应(二)、吸收光谱特征(三)、色谱法(一)呈色反应

ChP2010青蒿素的鉴别：取本品约5mg，加无水乙醇0.5ml溶解后，加碘化钾试液0.4ml，稀硫酸2.5ml与淀粉指示液4滴，立即呈紫色。ChP2010双氢青蒿素片的鉴别：取本品的细粉适量(约相当于双氢青蒿素20mg)，加无水乙醇2ml使双氢青蒿素溶解，滤过，滤液中加碘化钾试液2ml与稀硫酸4ml，摇匀，加淀粉指示液数滴，溶液即显蓝紫色。由于青蒿素类是具有过氧桥的倍半萜内酯类化合物，这类化合物具有氧化性。在酸性条件能将I-氧化成I2与淀粉指示液，生成蓝紫色。

1.碘化钾试液-淀粉反应(过氧桥的氧化反应)

含有内酯的化合物、羧酸衍生物和一些酯类化合物在碱性条件与羟胺作用，生成羟肟酸；在稀酸中与高铁离子呈色。ChP2010收载了青蒿素和青蒿琥酯的羟肟酸铁鉴别反应。

2.

羟肟酸铁反应

ChP2010青蒿素的鉴别：取本品约5mg，加无水乙醇0.5ml溶解后，加盐酸羟胺试液0.5ml与氢氧化钠试液0.25ml，置水浴中微沸，放冷后，加盐酸2滴和三氯化铁试液1滴，立即显深紫红色。ChP2010青蒿琥酯的鉴别：取本品约50mg，加含7％盐酸羟胺的乙醇溶液(80→100)1ml，再加乙醇制氢氧化钾试液3ml，置水浴中加热至沸，放冷，加稀盐酸至呈酸性，再加三氯化铁试液l滴，即显紫红色。香草醛-硫酸溶液又称硫酸香兰素显色剂，很多的物质如有机酸、挥发油、甾醇、萜类等都可以显色。

3.香草醛-硫酸反应

ChP2010青蒿琥酯的鉴别：取本品约50mg，加三氯甲烷1ml溶解后，取3～4滴置白瓷板上，待三氯甲烷挥发后，加2％香草醛硫酸溶液1滴，显红色。

硫酸香草醛溶液显色原理:使羧基脱水，增加双键结构，再经双键位移，双分子缩合等反应生成共轭双键系统，又在酸作用下形成阳碳离子盐而显色。是一种通用显色剂。

(二)、吸收光谱特征青蒿素类抗疟原料药在ChP2010中均采用红外光谱的方法进行鉴别。1.红外吸收光谱特征

ChP2010青蒿琥酯片的鉴别：取本品的细粉适量(约相当于青蒿琥酯0.1g)，加15ml丙酮振摇使溶解，滤过，滤液挥干，残渣用硅胶为干燥剂减压干燥。残渣的红外光吸收图谱应与青蒿琥酯的对照图谱一致。

但是制剂的红外光吸收图谱鉴别须经提取分离，残渣干燥后，进行红外光吸收图谱与对照的图谱比较。要求所得的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致。

由于青蒿素类药物分子结构中母核，不具有共轭体系，其紫外吸收光谱的主要是末端吸收。但C-10由于取代基的不同具有一定吸收特征。ChP2010均未采用本法鉴别所收载青蒿素类药物。

2.紫外吸收光谱特征

(三)、色谱法

1.利用比较供试品溶液主峰与对照品溶液主峰的保留时间(tR)是否一致或比较供试品溶液所显主斑点的位置和颜色与对照品溶液主斑点的位置和颜色是否相同进行鉴别。2.HPLC法一般都规定在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。3.青蒿素类抗疟原料药在ChP2010中均采用HPLC的方法进行鉴别。但制剂中也有采用TLC法进行鉴别。三、纯度检查

目前青蒿素的制备仍以天然药材分离提取为主，并用于其衍生药物的生产，所以药品中通常都存在结构类似的有关物质，主要通过TLC和HPLC进行检查控制。

ChP2010青蒿素有关物质的TLC检查：取本品适量，加丙酮溶解制成每1ml中含15mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液0.5ml，置100ml量瓶中，加丙酮稀释至刻度，作为对照溶液(1)；精密量取对照溶液(1)5ml，置10ml量瓶中，加丙酮稀释至刻度，作为对照溶液(2)；另取青蒿素对照品和双氢青蒿素对照品，加丙酮溶解并释稀制成每1ml中含青蒿素10mg和双氢青蒿素0.1mg的混合溶液，作为对照品溶液。吸取上述四种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(沸程60～90℃)-丙酮-冰醋酸(8:2:0.1)为展开剂，展开15cm以上，取出，晾干，喷以含2%香草醛的20%硫酸乙醇溶液，在85℃加热10～20分钟至斑点清晰，对照品溶液应显青蒿素与双氢青蒿素各自的清晰斑点。供试品溶液如显杂质斑点，颜色深于对照溶液(2)主斑点(0.25%)且不深于对照溶液(1)主斑点(0.5%)的斑点不得多于1个，其他杂质斑点的颜色均不得深于对照溶液(2)的主斑点(0.25%)。四、含量测定

ChP2010双氢青蒿素片的紫外分光光度法测定：取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于双氢青蒿素10mg)，置50ml量瓶中，加乙醇，振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，静置2小时，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；另精密称取双氢青蒿素对照品约10mg，置50ml量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀后，静置2小时，作为对照品溶液。精密量取对照品溶液与供试品溶液各