项目6细菌抗酸染色

微生物检验技术

----细菌抗酸染色案例1：患者,男性,76岁,因“咳嗽、咯痰2个月余”于2007年6月入院。患者2个月前无明显诱因出现咳嗽、咯少量白色痰,偶有痰中带血丝。1个月前查体胸部CT提示双肺弥漫性结节状阴影,大小均匀,以双上肺为著,右上肺陈旧结核。痰涂片查抗酸菌案例导入案例2：患者女性，28岁，因间断低热、咳嗽伴左侧胸痛、气短2个月，于2002年5月28日入院。患者于2002年3月劳累后出现午后低热，体温在37.5℃～37.8℃，伴少量刺激性干咳。4天后无特殊诱因出现左侧胸部隐痛，深呼吸及平卧位时加重，且胸痛呈进行性加重。活动后感胸痛、气短。在当地医院经拍胸片、超声检查示“左侧胸腔积液”，予穿刺抽液，为粉红色乳糜样液体。考虑为“结核性胸腔积液”。穿刺液送检查抗酸菌案例导入问一问细菌有哪些染色方法？细菌染色方法复染法革兰染色法抗酸染色法单染法用单一的染料染色抗酸染色法1.熟练掌握细菌抗酸染色的操作方法2.熟练掌握细菌抗酸染色的结果判断3.掌握细菌抗酸染色的临床意义及注意事项学习目标抗酸染色操作步骤及注意事项抗酸染色原理及染液配方12抗酸染色结果及临床意义3学习目录抗酸染色原理及染液配方1抗酸染色法抗酸染色法是1882年由埃利希（Ehrlich）首创，并经齐尔（Ziehl）改进而创造出的一种细菌染色方法。1-1抗酸染色原理

分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色。细胞成分1-1抗酸染色原理

分枝杆菌一般不易着色，要经过加热或者延长染色时间来促使其与石炭酸复红染液结合而着色。着色特点1-1抗酸染色原理

分枝杆菌细胞结构中的分枝菌酸与染料结合牢固，一旦结合以后，就很难被酸性脱色剂脱色。难以脱色1-1抗酸染色原理

齐尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。染色结果1-1抗酸染色液的组成石炭酸复红染液13%盐酸酒精2碱性美蓝染液31-2石炭酸复红染液（第1液）碱性复红乙醇饱和溶液100ml取饱和液10ml石炭酸复红染液100ml碱性复红1g95%乙醇10ml5%石炭酸90ml5%石炭酸90ml1-23%盐酸酒精（第2液）浓盐酸3ml95%乙醇97ml3%盐酸酒精100ml1-2碱性美蓝染液（第3液）美蓝酒精饱和溶液100ml取饱和液30ml美蓝染液130ml美蓝2g95%酒精100ml0.01%KOH100ml1-2抗酸染色操作步骤及注意事项2厚涂片取标本在干净的载玻片上涂片，制成20mm×15mm大小的厚膜涂片。干燥自然干燥，让玻片上的水分挥发。固定玻片在酒精灯火焰外焰，以钟摆的速度通过火焰三次固定。抗酸染色操作步骤----制片2-1初染石炭酸复红，冷染或热染脱色3%盐酸酒精复染碱性美蓝抗酸染色操作步骤----染色2-1在已固定好的涂片上放置滤纸片（滤纸的作用是滤去染液中的沉渣，使标本清晰），滴加抗酸染液于滤纸片上，将整个滤纸片滴满。将加有染液的滤纸片加温：在火焰上方保持一定高度，加热至出现蒸气（注意不能使染液沸腾），如此反复2～3次（约5min）。在加热过程中要防止将染液烘干，应及时添加染液。抗酸染色操作步骤----染色2-1去掉滤纸片，待玻片冷却后，水洗。用3％盐酸酒精脱色，直到流下的液体无色为止，进行水洗。用碱性美兰染液复染30s，水洗，干燥，镜检。抗酸染色操作步骤----染色2-1抗酸染色操作步骤----镜检2-1涂片要略厚加温染色或延长染色时间，加温时随时补加染色液分枝杆菌呈红色(+)其他细菌和背景为蓝色(-)抗酸染色注意事项2-2抗酸染色结果及临床意义3结核杆菌染成红色，细长、直的或微弯曲杆菌，偶尔有杆菌着色不均，呈颗粒状者。标本的其余部分及非抗酸性细菌染成蓝色。必须逐一观察各个视野，直到整个涂片找不到结核杆菌时，方可报告“未找到结核杆菌”。抗酸染色的结果3-1抗酸染色的结果3-1抗酸染色的结果3-1抗酸染色的结果3-1抗酸染色的临床意义临床意义鉴别细菌确定分枝杆菌感染程度判定分枝杆菌感染预后3-21.细菌抗酸染色的结果是：A.红色为阳性，蓝色为阴性B.紫色为阳性，红色为阴性C.紫色为阳性，蓝色为阴性D.蓝色为阳性，红色为阴性2.抗酸液不包括()A.碱性美兰B.结晶紫C.复红D.3%HCL酒精3.下列哪种细菌宜用抗酸染色（）A.大肠杆菌B.链球菌C.结核杆菌D.布氏杆菌4.抗酸染色的操作程序是（）A.碱性美兰→复红→3