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文档简介

酶活性测定技术一、酶用来诊断各种疾病早在1908年以测定尿液中的淀粉酶来诊断急性胰腺炎30年代临床测定碱性磷酸酶用于诊断骨骼疾病、肝胆疾病特别是出现阻塞性黄疸时碱性磷酸酶也明显增高临床上可根据不同体液中酶浓度的变化来诊断各种疾病由于酶蛋白的含量甚微很难直接测定其蛋白质的含量而且在生物组织中酶蛋白又与其他多种蛋白混合存在，将其提纯耗时费力故以酶活性的测定来了解血清中酶的存在与多寡二、酶活性的概念酶活性即酶促反应速度，指在规定条件下单位时间内底物的减少量或产物的生成量。v=-d〔S〕/dt或v=d〔P〕/dt。注：在实际测定酶促反应速度时，以测定单位时间内产物的生成量为好。底物浓度为〔S〕,产物浓度为〔P〕,时间为t，反应速度为v三、酶活性测定的最主要的方法按照对酶促反应时间的选择不同

连续监测法定时法(固定时间法)四、酶偶联反应技术概念：酶偶联反应测定技术是指将两种或两种以上的数种酶组成一个连续反应体系来测定待测酶活性或代谢物浓度的技术。应用：对于底物或产物不能直接测定或难于准确测定的酶促反应。ExEaEiABCP式中A为底物，B、C为中间产物，P为产物（必须能够直接测定），Ex为待测酶，Ea、Ei都为工具酶。按照工具酶作用的不同，Ea又称为辅助酶，Ei又称为指示酶，CP称为指示反应。四、酶偶联反应技术酶偶联反应常用指示酶及其指示反应（1）脱氢酶用作工具酶的脱氢酶都是以NAD(P)H为辅酶的脱氢酶，例如LDH、MDH、G6PD、GLDH等，它们催化下列反应：可对NAD(P)H在紫外吸收或紫外激发荧光进行测定。应用：ALT、AST、CK等酶活性测定。P+NAD(P)H+H+

PH2+NAD(P)+(2)过氧化物酶POD可催化过氧化氢与某些色原反应，例如与4-氨基安替比林（4-AAP）和酚反应，将其氧化为有色物质，反应如下：（Trinder反应，1969）应用：GOD、COD、GPO、甘油氧化酶、尿酸酶（属于氧化酶类）等都可以将各自的底物氧化为过氧化氢，因此都可以与POD偶联，通过Trinder反应加以测定。POD2H2O2+4-AAP+酚醌亚胺（红色）+4H2O小结：酶活性测定的最主要的方法是连续监测法当底物

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