马鞭草抗乙肝有效部位化学成分研究

马鞭草抗乙肝有效部位化学成分探讨马鞭草抗乙肝有效部位化学成分探讨（作者:___________单位:___________邮编:___________）作者：

陈丽花,李志军,王定勇【摘要】目的探讨马鞭草(VerbenaofficinalisL.)抗乙肝有效部位的化学成分。

方法采纳柱层析和薄层层析分别马鞭草有效部位中的化学成分;用IR、ESIMS、1HNMR、13CNMR等波谱技术鉴定结构。

结果分别并鉴定了6个化合物，分别为山柰酚(1)、槲皮素(2)、杨梅素(3)、熊果酸(4)、马鞭草苷(5)和杨梅苷(6)。

结论首次报道马鞭草抗乙肝有效部位的化学成分;化合物3、6为首次从该植物中分别得到。

【关键词】马鞭草杨梅素抗乙肝作用Abstract:ObjectiveTostudythechemicalconstituentsintheantiHBVactivefractionofVerbenaofficinalis.MethodsTheconstituentswereseparatedandpurifiedbycolumnchromatographyandthinlayerchromatography,andtheirstructureswereelucidatedbyIR,MS,1HNMRand13CNMR.ResultsSixcompoundswereisolatedfromtheeffectivefractionofVerbenaofficinalis:kaempferol(1),quercetin(2),myricetin(3),ursolicacid(4),verbenalin(5)andmyricetrin(6).ConclusionsChemicalconstituentsintheantiHBVactivefractionofVerbenaofficinaliswerefirstreported.Compounds3and6wereobtainedfromthisplantforthefirsttime.Keywords:Verbenaofficinalis;chemicalconstituents;myricetin;antihepatitisBvirus马鞭草(VerbenaofficinalisL.)为马鞭草科(Verbenaceae)多年生草本植物，始载于《名医别录》，民间以其全草或带根全草入药。

马鞭草作为传统中药，具有清热解毒、消肿利尿、活血通经等功效，广泛用于治疗伤风感冒、水肿、痢疾、黄疸等证[1]。

现代探讨表明，马鞭草能抑制乙型肝炎病毒(HBV)和HBsAg，并能抗乙肝纤维化[2-3]。

利用酶联免疫吸附检测(ELISA)技术[4]，作者筛选到马鞭草抗乙肝活性的有效部位。

为阐明其药效物质基础，本文对该有效部位进行系统的化学成分探讨，从中分别得到6个化合物，分别鉴定为山柰酚(1)、槲皮素(2)、杨梅素(3)、熊果酸(4)、马鞭草苷(5)和杨梅苷(6)，其中化合物3和6为首次从该植物中分别得到。

1仪器与材料熔点用XRC1显微熔点仪(四川高校科仪厂制造)测定,温度计未校正;红外光谱用NicoletPROTG460光谱仪测定,溴化钾压片;核磁共振用BrukerAM500型核磁共振仪测定,TMS为内标;ESIMS在HP1100LC/MS上测定。

柱色谱用硅胶(200～300目)、薄层色谱用硅胶(10～40m)均为青岛海洋化工厂生产，SephadexLH20为美国GE公司产品，ODS为日本YMC产品。

马鞭草于2008年8月采自广东省广州市，由广东药学院中药学院曾令杰博士鉴定为马鞭草(VerbenaofficinalisL.)。

2提取与分别取阴干的马鞭草10kg，粉碎至约60目，用适量甲醇室温浸泡3次,每次7d,合并提取液,抽滤,减压回收甲醇得墨绿色黏膏状提取物280g。

取该提取物250g分散于适量热水中再转移至2500mL分液漏斗,依次用石油醚、CHCl3萃取3次(每次用1000mL溶剂)，除掉极性小的化学成分,再用EtOAc萃取3次(每次用1000mL),减压浓缩乙酸乙酯萃取液后得到乙酸乙酯萃取物35g。

ELISA法检测结果表明乙酸乙酯萃取物为马鞭草抗乙肝活性有效部位[4]。

有效部位经硅胶柱层析(200～300目)，三氯甲烷甲醇系统(体积比20∶1～0∶1)梯度洗脱。

TLC检测，合并相同组分，共得到7个部分;各部分再经SephadexLH20柱层析[洗脱剂为甲醇水(体积比3∶2)]、ODS柱层析[洗脱剂为乙腈水(体积比1∶1)]、制备薄层层析(绽开剂为氯仿甲醇体系)等反复分别纯化，得到化合物1(20mg)、2(38mg)、3(15mg)、4(30mg)、5(55mg)和6(10mg)。

3结构鉴定化合物1：

黄色粉末，mp275.0～276.5℃。

HClMg试验显阳性。

ESIMS(m/z):287.0[M+H]+。

1HNMR(500MHz,DMSOd6):12.18(1H,s,5OH),8.15(2H,d,J=8.5Hz,H2,6),7.02(2H,d,J=8.5Hz,H3,5),6.55(1H,d,J=2.0Hz,H8),6.27(1H,J=2.0Hz,H6)。

13CNMR(125MHz,DMSOd6):146.9(C2),133.5(C3),176.5(C4),162.2(C5),99.0(C6),164.9(C7),94.3(C8),157.6(C9),103.9(C10),123.1(C1),130.3(C2,6),116.2(C3,5),160.1(C4)。

以上波谱数据与文献[5]报道的山柰酚一样。

化合物2：

黄色粉末，mp303.0～304.5℃。

HClMg试验显阳性。

ESIMS(m/z):325.0[M+Na]+。

1HNMR(500MHz,DMSOd6):12.20(1H,s,5OH),7.80(1H,d,J=1.8Hz,H2),7.68(1H,dd,J=8.6,1.8Hz,H6),6.98(1H,d,J=8.6Hz,H5),6.51(1H,J=2.0Hz,H8),6.26(1H,J=2.0Hz,H6)。

13CNMR(125MHz,DMSOd6):146.8(C2),136.5(C3),176.6(C4),157.5(C5),99.1(C6),164.8(C7),94.3(C8),162.6(C9),104.0(C10),123.6(C1),115.6(C2),145.7(C3),148.1(C4),116.0(C5),121.3(C6)。

以上波谱数据与文献[5]报道的槲皮素一样。

化合物3：

棕黄色针晶(MeOH),mp324.0～325.5℃。

HClMg试验显阳性。

ESIMS(m/z):319.3[M+H]+。

IR(KBr)max/cm-1:3350,3028,1660,1609,1544,1447,1316,1245,1200,1163,1113,1095,1026,939。

1HNMR(500MHz,DMSOd6):12.50(1H,s,5OH),7.25(2H,s,H2,6),6.37(1H,d,J=2.0Hz,H6),6.17(1H,J=2.0Hz,H6)。

13CNMR(125MHz,DMSOd6):147.3(C2),136.5(C3),176.2(C4),161.2(C5),98.6(C6),164.8(C7),93.8(C8),156.6(C9),103.4(C10),121.2(C1),107.7(C2,6),146.2(C3,5),136.5(C4)。

以上波谱数据与文献[6]报道的杨梅素一样。

化合物4：

白色针状晶体(EtOAc)，mp285.6～287.0℃，硫酸香兰醛显紫色。

ESIMS(m/z):455.2[MH]-。

1HNMR(500MHz,CDCl3):5.13(1H,t,J=3.6Hz,12H),3.75(1H,dd,J=10.4,4.6Hz,3H),0.68(3H,s),0.75(3H,s,Me),0.87(3H,s,Me),0.89(3H,s,Me),1.05(3H,s,Me),0.80(3H,d,J=6.5Hz,Me),0.92(3H,d,J=6.3Hz,Me)。

13CNMR(125MHz,CHCl3):38.3(C1),26.9(C2),76.8(C3),38.7(C4),54.8(C5),18.0(C6),32.7(C7),39.0(C8),40.1(C9),36.5(C10),22.8(C11),124.5(C12),138.1(C13),41.6(C14),27.5(C15),23.8(C16),46.8(C17),52.3(C18),38.5(C19),38.4(C20),30.2(C21),36.3(C22),28.2(C23),15.2(C24),16.0(C25),16.8(C26),23.2(C27),178.1(C28),16.9(C29),21.0(C30)。

以上波谱数据与文献[7]报道的熊果酸一样。

化合物5：

无色针状晶体(MeOH)，mp181.5～183.0℃。

ESIMS(m/z):389.1[M+H]+。

1HNMR(500MHz,CD3OD):1.22(3H,d,J=6.7Hz,H10),2.01(1H,dd,J=4.0,18.3Hz,H7),2.21(1H,m,H9),2.48(1H,m,H8),2.54(1H,dd,J=8.0,18.3Hz,H7),3.62(1H,dd,J=5.6,12.0Hz,H5),5.22(1H,d,J=7.2Hz,H1),7,45(1H,s,H3),3.58(3H,s,11OCH3),4.64(1H,d,J=7.8Hz,H1),3.23(1H,dd,J=9.0,7.8Hz,H2),3.36(1H,t,H3),3.28(1H,m,H4),3.27(1H,m,H5),3.84(1H,dd,J=11.4,0.6Hz,H6a),3.63(1H,dd,J=11.4,5.4Hz,H6b)。

13CNMR(125MHz,CD3OD):97.5(C1),153.8(C3),105.4(C4),43.5(C5),215.8(C6),43.7(C7),29.8(C8),45.5(C9),20.6(C10),169.1(C11),51.9(11OCH3),100.5(C1),74.8(C2),77.9(C3),71.5(C4),78.5(C5),62.7(C6)。

以上波谱数据与文献[8]报道的马鞭草苷一样。

化合物6：

黄白色片状结晶(MeOH),mp182.5～184.0℃。

HClMg试验和Molish试验均显阳性。

ESIMS(m/z):465.3[M+H]+。

IR(KBr)max/cm-1:3401,2928,1655,1606,1458,1345,1290,1201,1165,1075,1040,969,917。

1HNMR(500MHz,DMSOd6):12.68(1H,s,5OH),6.88(2H,s,H2,6),6.36(1H,d,J=2.1Hz,H6),6.20(1H,J=2.1Hz,H6),5.21(1H,brs,H1),3.76(1H,brs,H2),3.56(1H,dd,J=9.4,2.9Hz,H3),3.16(1H,t,J=9.5Hz,H4),3.98(1H,brs,H5),0.85(3H,d,J=6.1Hz,H6)。

13CNMR(125MHz,DMSOd6):156.8(C2),134.5(C3),178.2(C4),161.9(C5),99.1(C6),164.7(C7),94.0(C8),158.0(C9),104.4(C10),121.1(C1),108.2(C2,6),146.2(C3,5),136.8(C4),102.5(C1),70.8(C2),71.1(C3),71.7(C4),70