动物房SOP操作规程

豫欠中科技上挈TianjinUniversityofSci@nee&Technology食品工程与生物技术学院实验动物屏障环境管理制度目的：加强动物实验屏障环境管理，确保设施安全运行，保证实验动物和动物实验的质量。范围：动物实验屏障环境职责：动物实验屏障环境全体工作人员内容：.对工作的要求本实验室是我校科研工作质量管理的重要组成部分，直接反映我校科研管理工作的整体水平，因此日常管理工作受科技处的监督。本实验室面向校内各相关专业开放，承担着科学研究与人才培养的双重责任。要求本实验室全体人员不断提高自身素质，做好本职工作。凡在本实验室工作的人员必须接受学院的领导和工作安排。本实验室的管理、实验、饲养和辅助人员应接受专门培训和进修，并持证上岗。在本实验室工作和进行动物实验的全体人员，必须严格执行《动物实验屏障环境标准操作规程（SOP）》。凡需进入本实验室工作的人员，需申请、经同意并参加培训后，方可进入实验室。工作时间内保持各动物实验室内的安静，不可大声喧哗。未经消毒的物品以及私人用品一律不准带入屏障系统。凡需带入屏障环境与实验有关的仪器设备，必须提前申请，经同意后严格按照实验室操作规程传递进入实验室。本动物实验室为非感染性实验室，不得进行感染性实验。.设施管理要求本设施属于单走廊布局的实验动物实验设施，洁净区内洁净度为l万级。本设施启用前或已停止使用一段时间后应按照使用工艺要求进行消毒程序。设施日常运行应严格按照设备使用手册要求进行，严格执行本部制定的屏障设施运行操作规程(SOP)进行操作。设施内的环境指标值应符合“实验动物环境及设施”(GB14925—2010)的要求。为保证设施安全运行，每季度应进行一次自检。天津科技大学食品工程与生物技术学院

动物实验屏障环境标准操作规程

(SOP)二o—年H--月、动物实验屏障环境管理人员工作流程目的：保障屏障系统安全运行范围：适用于动物实验屏障环境责任人：实验室饲养管理人员内容：.管理人员走向：应按箭头所指方向行进（图-1）。虚方框只有管理人员进入。管理人员鞋柜- 1换外用拖鞋，脱外衣，洗手I .一更衣室y P换内用拖鞋二更衣室t ［穿无菌服，戴灭菌手套，， .口罩，手消毒风淋室缓冲区X I ； +__

动物房AI 1 V 清洁走廊图-1管理人员进出动物房路线图

注：（表进入路线图；表返回路线图2.消毒与管理规范管理人员在鞋柜前第一次换外用拖鞋，在走廊脱去外衣，将个人物品放人自己的衣柜中。在更衣前室洗、刷手后，进入一更衣室，第二次换鞋。进入二更衣室更换无菌隔离衣、手套和口罩，并进行手消毒。由缓冲区进入清洁走廊后，通常先进入清洁物品贮藏间，取笼器具、饲料、垫料等回到清洁走廊，再进入动物饲养室。在动物实验室，实施饲喂与清洁操作后，打开通向次清洁走廊的门，将废弃物、换下的笼器具推入次清洁走廊。管理人员可打开指向清洁走廊的门回到清洁走廊，然后再进入另一饲养室，在每一室都应注意随手关门。工作结束后，从饲养室将废弃物、笼器具放入传递柜内将门关闭，外边人员再打开传递柜门取出废弃物及笼器具。最后经清洁走廊返回更衣间，脱下隔离衣、口罩、手套，放在指定位置（隔离衣每周洗涤灭菌一次，手套每次用后洗消后备用），开启紫外线灯照射30分钟，更换外用拖鞋后离开更衣室。在一更室内衣柜换上自己的外衣，取回自己的用品，在鞋柜处换上自己的鞋，离开实验室。

二、动物实验屏障环境实验人员工作流程目的：保障屏障系统安全运行范围：适用于动物实验屏障环境责任人：实验人员内容:.实验人员走向：应按箭头所指方向行进（图-1）。图-1实验人员进出动物房路线图

注：（表进入路线图；表返回路线图.消毒与管理规范实验人员在鞋柜前第一次换鞋，在进入走廊后脱去外衣，将个人物品放人自己的衣柜中。在更衣前室洗、刷手后，进入一更衣室，第二次换鞋。进入二更衣间更换无菌隔离衣、口罩、手套，并进行手消毒。进入清洁走廊后，请直接进入指定动物实验室，未经允许不得进入其他动物室。实验人员在动物实验室实施实验操作，将废弃物放在指定容器内，当实验结束后，打开通向次清洁走廊的门，把废弃物、换下的笼器具推入次清洁走廊。实验人员可打开指向清洁走廊的门回到清洁走廊离开实验室，或经允许进入另一实验室，在每一室都应注意随手关门。实验结束后，实验人员通过清洁走廊返回更衣间，将脱下的隔离衣、口罩、手套放至指定位置，更换外用拖鞋离开更衣间。在走廊更衣柜换上自己的外衣，取回自己的用品，在鞋柜处换上自己的鞋，离开实验室。三、物品进出动物实验屏障环境操作规程目的：保障屏障系统安全运行，防止微生物污染范围：适用于动物实验屏障环境物品的传递操作责任人：饲养管理人员，实验人员内容：动物实验室的物品包括笼器具、工作服、饲料、垫料、饮水和动物房的废弃物。饲料和饮水另列操作规程。.笼具进出动物实验室消毒、灭菌管理规范笼具走向，笼具应按箭头所指方向行进，不可逆反（图-1）。笼器具洗刷消毒间^ 传递柜灭菌器清洁物品储藏室一清洁走廊一动物房图-1物品进出动物房消毒、灭菌路线图洗消、灭菌、传递规范。饲养人员将笼器具通过传递柜送入洗涤间，关好传递柜的门。笼器具的洗涤用水应加入洗涤剂。笼器具应先在水池中用水浸泡1〜2h后，用刷子清洗。洗毕，再用清水冲净，放入高压灭菌器灭菌。笼器具经高压灭菌器传递：通过双门高压灭菌器，高压灭菌器的一扇门打开时，另一扇门必须关闭。物品经传递窗传递：小而少量的物品（不适宜高压）采用本法传递。首先物品表面喷洒消毒液，开启传递窗（柜）外窗（门）放入物品，关闭外窗，开启灭菌紫外线灯，照射20分钟后，开启内窗，将物品传入屏障系统。注意内外窗（门）不得同时开启。.工作服动物实验屏障环境的工作服应有特殊标记，专人、专用，不得乱穿。穿着工作服不允许离开屏障系统，一经发现则按违章操作处罚。工作人员进入动物房的工作服每周更换一次。洗衣机是洗涤实验动物饲养室工作服的专用设备，不得用来洗涤其他场合穿着的工作服、服装或材料，以防交叉污染。工作服的运行线路（图-2）。工作服洗衣机 洗衣筐高压灭菌器 工作人员清洁物品储藏间 ^更衣间图-2工作服的运行线路清洗、消毒与灭菌规范管理人员每周从更衣间的洗衣筐中取出应该清洗的衣服，带回洗涤消毒间。将工作服放入洗衣机，加水、洗涤剂浸泡30min。设定全自动洗衣机的洗涤、脱水程序。开启洗涤机，自动洗涤、烘干。擦拭打包桌桌面，将工作服折叠、打包。灭菌与传递：打包后的工作服可直接放入高压灭菌器中高压灭菌后，衣服包通过通道式灭菌器直接传入清洁物品储藏间（屏障内），放到更衣间备用。工作人员每天工作结束后，回到更衣间脱下工作服放到指定位置。.工作鞋工作鞋为不同颜色同时明确标记内用和外用，以显示其穿着于公共区和屏障区。穿着于某一区段的工作鞋只能在这一区段穿着，进入另一区段必须按规定换鞋。每周两次洗刷鞋柜处的外用拖鞋。内用拖鞋每日用后须放入1：100的次氯酸钠液浸泡消毒后备用。消毒过的内用拖鞋应放置在一更衣间指定位置。其应用范围为屏障系统内，经二次更衣间、风淋室、缓冲区、清洁走廊、动物房、最后回到一更衣间。内用拖鞋每日用后须放入1：100的次氯酸钠液浸泡消毒后备用。.垫料垫料的运行路线：垫料一装入鼠盒f灭菌（121℃，30min）一清洁贮藏间垫料的验收：实验动物的垫料应是无毒、清洁、少尘、无异味、吸水性强的材料，通常选用干净的细刨花。垫料在清洁贮藏间内装入经晾干的鼠盒，然后将带垫料的鼠盒推人动物房换盒。购入经6（€。照射的抽真空包装垫料，脱外包装后喷消毒液，放入传递柜，经紫外线照射后传入屏障系统，或经渡槽传入屏障区。.废弃物废弃物运行路线废弃物（产生于动物房）一塑料袋包修一传递木冰箱冷冻废弃物管理规范动物的废弃物（不含动物尸体）丢入污物桶的塑料袋内，并扎好袋口，不得泄露。每天下午将动物房扎好袋口的废弃物经传递柜传递非洁净区，集中冷冻，准备送处理场。废弃物应及时送到垃圾处理场，不得在动物室外停留，以防蚊蝇、野生动物的叮咬，污染环境。（见无害化处理协议书）四、动物进出实验动物屏障环境操作规范目的：保障屏障系统安全运行，防止微生物污染范围：适用于动物实验屏障环境动物的传递操作责任人：饲养管理人员，实验人员内容：.动物的运行路线动物运输箱一传递窗一检疫室一动物实验室.动物进入动物实验室的操作规范2.1进入屏障动物房的动物必须来自有生产许可证的实验动物供应基地，或持有相应级别实验动物质量合格证书。将动物运输箱运到洗刷消毒间传递柜前，表面用消毒液喷洒后将其放人传递柜中，关上传递柜的外门，开启紫外线20分钟。在检疫室打开传递柜内侧门接运输箱，打开运输箱箱盖，用镊子把箱内小鼠挟入预先准备好的鼠盒。动物包装箱内的动物取完后，关闭传递柜的内侧门，运输箱由传递窗柜退回洗刷消毒间。将购入动物在检疫室内观察一周，未发现异常即转入动物实验室。3.批次实验结束后的动物尸体，或实验中死亡动物的尸体须放入指定垃圾袋，封口后送至传递窗传出屏障系统。五、实验动物引进和运输管理规程目的：规范实验动物引进和运输管理范围：适用于实验动物购买人员责任人：实验动物购买人员管理程序：.所有的实验动物均从有合法资质的单位购买。.运输用的车辆应有空调，并开至动物适宜的温度。.放置实验动物时注意动物的密度，不得使实验动物发生挤压现象。.购买后立即放入检疫室。.必须爱护实验动物，不得戏弄或虐待动物。六、饲料进入动物实验屏障环境操作规程目的：保障屏障系统安全运行，防止微生物污染范围：适用于动物实验屏障环境饲料的传递操作责任人：饲养管理人员，实验人员内容：.实验动物饲料应选用符合GB的全价营养颗粒饲料，来自于有饲料生产许可证的单位。.实验动物饲料的灭菌方法首选60Co灭菌的饲料，在传递前去除饲料的外包装时，注意观察包装上的辐照指示剂是否变红及是否漏气。.饲料的运行路线60Co灭菌饲料一传递窗一清洁贮藏动物室.饲料的灭菌与进入动物房的管理规范由传递窗进入屏障内：这是商品化60Co灭菌饲料首选的传递方法。传递操作由两人合作进行，一人于屏障外将饲料脱外包装，另一人于屏障内接过从传递渡槽另一端传入的饲料袋。非6Co灭菌饲料通过双门通道式高压灭菌器饲料的灭菌：一扇门打开时，另一扇门必须关闭。打开通向洗刷消毒间的一扇门，放人袋装的饲料，关上门并旋紧安全螺杆，灭菌后，屏障内的操作者开启内侧一扇门前，旋动安全螺杆，打开内侧门，取出灭菌的饲料。七、实验动物接收标准操作规程目的:为确保接收实验动物的健康和质量，制定本程序。适用范围：适用于实验动物接收的操作活动。职责：.动物实验室负责人负责监督、管理；.工作人员严格遵守实验动物检疫操作规程。规程：.购入动物时，应向有实验动物生产许可证、信誉好、动物质量佳、有严格管理和一定规模的单位购入。.当动物到达后，首先检查带空气过滤装置的运输密封情况，然后再对照运输箱上的标签，核对动物的信息与要求是否相符。.运输箱表面用消毒液喷雾消毒，放入缓冲间，用消毒液喷雾房间，关门，打开紫外灯半小时。.将动物移入检疫室，打开动物运输箱，观察是否有任何异常行为或疾病的迹象。.将动物移入饲养盒中，给予足够的饮水及饲料，并贴上标签。动物运输盒由缓冲传出或随人一起带出。.在检疫室饲养3〜5天后，检疫合格可转入动物房。八、实验动物检疫操作规程目的：为预防传染性疾病发生，避免新引起的动物对原有动物及有关人员造成危害，提高实验动物健康水平，制定本程序。适用范围：适用于实验动物检疫的操作活动。职责：.实验动物负责人负责监督、管理；.工作人员严格遵守实验动物检疫操作规程。规程：.新引起的动物必须隔离，确认无异常后，移入饲养区。.动物观察内容：皮毛：有无光泽、竖毛、出血、污物、脱毛等。眼：有无眼屎、流泪、白内障、角膜损伤等。口腔：有无流涎、出血等。耳：有无外伤、耳壳曲折、中耳炎等。四肢：有无外伤、弯曲、脱臼、肿胀、关节炎等。肛门：有无腹泻、血便、脱肛等。精神和食欲：沉默、倦怠、动作不活跃、食欲不振、据食等。营养状况：消瘦、过度肥胖、成长异常。姿势和步态：姿势异常、行走和站立困难、运动失调、跛行等。.触诊内容：外部触诊：脉搏触诊，淋巴结、骨骼等体表变化。内部触诊：口腔内黏膜、牙齿、牙周组织、舌等口腔检查。触觉：弹性、硬度、肿胀和疼痛等。SPF级来源的动物隔离观察3〜5天，如无异常情况则转入动物房。如有异常的动物则整批淘汰。九、实验动物编号标记操作规程目的：为了规范实验动物编号标记方法，对分组后的实验动物进行标记编号，制定本程序。适用范围：适用于实验动物编号标记的活动。职责：实验动物负责人负责选用合适的编号方法。规程.染色法染色法是用化学药品在实验动物身体明显的部位，如被毛、四肢等处进行涂染，以染色部位、颜色不同来标记区分实验动物，是最常用、最易掌握的方法。常用染色剂：3%-5%苦味酸溶液，可染成黄色。0.5%中性红或品红溶液,可染成红色。2%硝酸银溶液，可染成咖啡色（涂染后在可见光下暴露十分钟）。煤焦油酒精溶液，可染成黑色。染色方法染色法适用于被毛白色的实验动物如大鼠、小鼠等。请按照实验动物学大小鼠染色标记顺序进行编号。十、实验动物健康观察规程十、实验动物健康观察规程目的：规范实验动物健康观察方法，及时发现异常情况。仪器与材料：开口器、体温表。规程：.观察动物的外表与行为。精神有无萎靡不振、敏感性增高、运动失调。被毛有无粗乱、被毛如油污涂布、皮肤有无创伤、丘疹、水泡、溃疡、脱水皱缩。头部、颈部、背部有无肿块、四肢关节有无肿胀。尾部有无肿胀、溃疡、坏疽、无毛瘢痕。鼻孔有无渗出物阻塞、喷嚏、呼吸困难。眼部有无渗出物、结膜炎。口部有无流涎、张口困难。排出粪便的含水量、颜色、排粪次数、粪便数量、粪便中有无未消化谷粒、黏液、血液、寄生虫虫体。排尿的次数、每次尿量及颜色等。2.0大、小鼠抓住尾巴拎起时应四肢伸展，有无转圈动作。.触诊检查。通过触摸背部、臀部、腿部肌肉，判定动物的营养状况。仔细检查皮肤的弹性，有无缺毛瘢痕和外寄生虫。检查耳部有中耳炎。肛门皮肤及被毛有无被稀粪污染。眼部有无角膜炎、晶状体浑浊、瞳孔形状变化和色素沉着等。用开口器打开口腔，观察黏膜有无出血、糜烂、溃疡、假膜、炎症；轻轻压迫喉头与气管能否引起咳嗽；触诊腹腔有无疼痛反射、较大肿块；量体温。.采食和饮水观察。在大群实验动物中发现患病动物的最好时机就是投放饲料的瞬间，健康动物常踊跃抢食，而患病动物往往独立于一侧，厌食甚至拒食。饮水时健康动物一般适度饮水，但腹泻动物通常饮水量大增；食欲与饮欲俱增应怀疑是否为糖尿病。发现拒食动物立即剔除，作进一步的检查。4观察记录。对动物进行观察检查后，认真填写以下记录表，作出相应评价。卜一、大小鼠饲养标准操作规程目的：为规范大小鼠的日常饲养操作，制订本规程。适用范围：适用于饲养工作人员的所有工作活动。职责.第一负责人负责监督、管理；.工作人员严格遵守操作规程。规程：.准备工作进入洁净走廊后,在洁净储物间按有关SOP配制当天使用的各种消毒剂,备用；在洁净储物间把当天使用的笼具、饮水瓶、饲料等物品，运输到洁净走廊，备用。.饲养操作工作人员进入饲养间关门，然后巡视房间的所有设施和动物，并做好温湿度、工作日记等记录，如出现问题及时汇报并进行处理。给饲料饲料用食铲给食,严禁用手拿；给料量以下次添料时，略有剩余为宜。落在饲养架或地上的饲料一律扔弃。给料频率：2—3天一次。给水每周更换二次水,一般选在周一、五更换饮水。给水时,要确认不漏水。笼盒更换更换周期视动物的数量而定；一般每周更换笼盒一次,每星期二、四更换笼盒，每次更换量为总笼盒的一半。更换笼盒时在操作车上进行，顺序是：由上而下，从左到右依次进行。操作步骤：把事先灭菌好的笼盒放在操作车上，然后把要换的笼盒也放在车上，工作人员使用消毒液浸泡过的镊子（两把镊子轮换使用）夹住动物尾部放入新笼盒里，用原来的笼盖盖上。在第一次放入换好的笼盒之前，用消毒剂将笼架内的四壁擦干净，然后才能放入鼠盒。动物笼盖每半个月更换清洗消毒一次。所有的工作完成后,将换下的笼盒从污物走廊一缓冲间一经外走廊搬至洗消间。清洁消毒，按“屏障设施卫生与消毒标准操作规程”。十二、实验动物患病隔离或濒死动物的处理规程目的：规范患病隔离或濒死动物的管理。适用范围：适用于实验动物异常情况处理。职责：.第一负责人负责监督、管理；.工作人员严格遵守操作规程。规程：.试验结束后，实验动物的尸体要经废弃物传递窗口传出，统一收集到冰柜中存放，严禁随便乱放、乱扔。.实验后存活的动物要按规定处死，不准私自带离实验室另作它用。.感染疾病的动物应视疾病的类型严格进行处理，病情严重实施安乐死，防治疾病的发展和蔓延。.实验室有剩余的实验动物，不得随意处理，应告诉组长进行统一安排。.定期将冰柜中的动物尸体进行回收焚烧。十三、实验动物淘汰、异常及死亡处理标准操作规程目的：规范饲养动物的废弃、异常处理及尸体的处理程序。适用范围：适用于实验动物异常情况处理。职责：.第一负责人负责监督、管理；.工作人员严格遵守操作规程。规程：.淘汰原则大小鼠生病作淘汰处理。畸形、生长发育缓慢作为淘汰处理。.淘汰及异常动物处理废弃（淘汰）及异常动物处理的大小鼠全部进行剖检，记入剖检记录中。在发现异常动物时，应立即把异常动物搬出饲养室，送实验科剖检，记录剖检情况。发现和通常情况不同的异常动物时，立刻报告机构负责人，接受处理意见。.死亡处理发现动物死亡，饲养人员应及时通知负责人，调查死亡原因。解剖动物，填写死亡及解剖时间，死亡动物所属项目名称、组别、编号，解剖所见。如属于自发性、正常性死亡，则详细记录有关情况；如属于操作不当死亡，则加强饲养人员的培训和教育；如怀疑染病死亡，立即报告机构负责人，进行细菌、病毒、病理学的详细检查。十四、实验动物尸体、废物处置标准规程目的：对动物尸体、垫料、排泄物等进行无害化处理，保护环境。适用范围：动物饲养室排出的废物、废水、废气等。职责：.洗消室人员负责收集动物尸体及废物，放入冰箱冷冻保存。.环境安全管理员负责联系卫生处理厂焚烧动物尸体及废物。规程：.饲养过程中产生废物的处理动物尸体用专用塑料袋打结密封，保存在-18℃冰箱中。填写存放人姓名、动物种类、数量、死亡原因等。动物排泄物及垫料垫料回收到饲料袋中，扎紧袋口，保存在专门的区域。.动物实验废弃物的处理各实验室及地面上要准备好医疗垃圾桶、废弃注射针用容器、动物尸体袋，由实验者自己分门别类存放。带血液、组织的医疗垃圾密封存放在冰箱。.动物尸体处置动物尸体处置与有资质的单位（天津合佳威立雅环境服务有限公司）签订危险废物处置协议《废物处理合同》，进行无害化处置。注意事项.贮存动物尸体的冰柜，不得放置其它物品。动物尸体冷冻贮存室应单独设置，易于通风和清洁消毒，以避免交叉污染。.不得随意丢弃实验动物尸体，严禁食用和出售。十五、实验动物废弃物处置规程目的：规范动物房废弃物的管理适用范围：动物饲养室排出的废弃物。职责：实验室清洁人员。规程：.大小鼠更换后的垫料等废弃物必须每日进行清出。.废弃物分别放入专用垃圾袋封严。.每天工作结束后，清洁人员将垃圾袋通过废弃物传递窗口递出屏障环境区，再由专人按不同的废弃物搬到指定地点。饲养笼传出后进入洗刷室。处死的动物放入指定的冰柜中。.清洁人员负责废弃物放置区域的清洁，每次清楚废弃物后将传递窗台面、地面、墙面等用注射用水洗过毛巾擦净后，用75%乙醇或1%。新洁尔灭消毒十六、实验室标准操作规程目的：严格控制动物实验环境不受病源微生物的危害，保护动物的福利，维持环境的生物洁净度。适用范围：适用于所有在屏障设施内工作的人员。职责：.设施负责人负责监督、管理；.工作人员严格按规程行事。规程：.辅助人员进入洁净走廊后，穿上洁净走廊的拖鞋，到洁净储物间配制当天使用的各种消毒剂，备用。.辅助人员在洁净储物间的把当天使用的笼具、饮水瓶、饲料等物品用运输车运到洁净走廊，备用。.饲养员在二更出来的缓冲间，在手消毒器前要注意手套的彻底消毒，经风淋后进入清洁走廊，穿上洁净走廊的拖鞋，每一动物房外门口的位置放置一瓶75%的酒精喷壶，进入动物房前，用酒精喷手、喷门把后，把已准备好的物品放入动物房。.饲养员进入动物房后，关紧通向洁净走廊的门,换上动物房内的专用拖鞋，然后巡视房间内的所有设施和动物，按每周的工作计划安排工作，并做好温度、湿度、工作日记等记录，对当天完成的工作在工作安排表上打勾并签名确认，如出现问题及时汇报并进行处理。.饲养人员应该在当天工作完成前把第二天需要换的水瓶、大概的饲料添加量及其他需要的物品记录在纸上带出交给辅助人员准备。把有关的记录数据写在纸上带出来交给第一负责人。.饲养人员的拖鞋在工作完成后，用酒精喷雾消毒后，放回动物房靠洁净走廊门口，然后把物品带出次清洁走廊，在物品出口处签名，次清洁走廊的清洁消毒工作由最后出来的人员完成。注意事项.严禁动物房内的逆向走动，以及动物房之间的互相串联。.在有辅助人员的情况下，饲养人只负责自己管辖的房间，房间外的工作由辅助人员完成。.在周六日或其他节假日轮值没有辅助人员的时候，轮值人员进动物房前，须先到储物间准备当天要用的物品，尽量减少动物房、清洁走廊、储物间之间的来回走动。十七、大鼠眼眶采血标准操作规程目的：本标准描述实验人员进行大鼠眼眶采血的操作规程。规程.按大鼠乙醚麻醉标准操作规程将大鼠浅麻醉。.采用侧眼向上固定大鼠体位，左手拇食指从背部较紧地握住大鼠的颈部（应防止动物窒息）。.取血时，左手拇指及食指轻轻压迫动物的颈部两侧，使头部静脉血液回流困难，眼球充分外突，眶静脉丛充血。右手持长颈（3〜4cm）硬质毛细玻璃管（内径0.5mm〜1.0mm）,将采血管与鼠成45°角，在泪腺区域内，用采血管由眼内角在眼睑和眼球之间向喉头方向刺入。.刺入深度约为4mm〜5mm,当达到蝶骨感到有阻力时，再稍后退0.1mm〜0.5mm,边退边抽。.然后将采血管保持水平位，稍加旋转并后退吸引，由于血压的关系，血液即自动流入玻璃管中。.得到所需的血量后，即除去加于颈部的压力，同时拔出采血管。为防止术后穿刺孔出血，用消毒纱布压迫眼球30秒。体重200g〜300g大鼠每次可采1ml〜2ml血；间隔3d〜7d采血部位大致修复。十八、小鼠尾静脉注射标准操作规程目的：本标准描述实验人员进行小鼠尾静脉注射的操作规程。规程.先将动物固定在固定器内或扣在烧杯中，使尾巴外露。.尾部用45〜50℃的温水浸泡半分钟或用酒精擦拭使血管扩张，并可使表皮角质软化。.然后将尾部向左或向右拧好，使一侧尾静脉朝上。.左手食指和中指捏住鼠尾上下，使静脉充盈，用无名指从下面托起尾巴.以拇指和小指夹住尾巴的末梢。.右手持注射器（连5号细针头），使针头与静脉平行（小于30〜），从尾下四分之一处进针。.刺入后先缓注少量药液，如无阻力，表示针头已进入静脉，可继续注入。.一般推进速度为0.05ml/秒〜0.10ml/秒，一次注射量为O.05ml/lOg体重〜O.25ml/lOg体重。.注射完毕后把尾巴向注射侧弯曲以止血。注意事项在小鼠尾部有四根血管十分明显：背腹各有一根动脉，两侧各有一根静脉，尾静脉注射应选取两侧的血管。十九、大小鼠剖检标准操作规程目的：本标准描述实验人员进行大小鼠脏器采集的操作规程。适用范围：适用于大小鼠尸检操作。职责：第一负责人负责监督、管理；规程：.用镊子夹住眼球根部将其摘出，检查结膜、视网膜。.沿环枕关节横断颈部，使头颈分离，再去掉头盖骨，用镊子提起脑膜，用剪刀剪开，检查颅腔液体数量、颜色、透明度等情况。用镊子钝性剥离大脑与周围的连结，然后将大脑从颅腔内取出。.取出垂体，检查有无肿大、充血。.动物取背卧位，使其四肢摊开，剥去下颌部和颈部皮肤，取出淋巴结和唾液腺。.沿腹部正中线切开剑突至肛门之间的腹前壁，再沿最低位肋骨分别向左右两侧切开侧腹壁至脊柱两旁，完全暴露腹腔器官。观察有无积液、血液和炎性渗出物。.用镊子夹住胸骨剑状突，剪断横膈膜与胸骨的连接，然后提起胸骨，在靠近胸椎基部，剪断左右胸壁的肋骨，将整个胸壁取下。.分离出淡黄色的一对胸腺。.分离出心脏。.用镊子夹住气管向上提起，剪断心脏与胸膜的连结韧带，将肺脏取出。.将下颌骨的两下颌支内侧与舌连结的肌肉剪断，将咽、喉、气管、食道与周围组织分离一并取出。.在腹腔左侧可见到红色的脾脏，一手用镊子将脾脏提起，一手持剪刀剪断韧带，采出脾脏。.胰脏靠近胃大弯和十二指肠，可将胰脏连同周围的脂肪组织一同取出，浸入10%甲醛溶液中，数秒后胰脏变硬成灰白色，脂肪不变色，此时可剔除脂肪。.用镊子提起胃贲门部，切断靠近贲门的食道，一边牵拉，一边切断周围韧带，使胃同周围组织分离，然后按着十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠的顺序，切断这些肠管的肠系膜根部，将胃肠从腹腔内采出，动作要轻，以免拉断肠管。.一手提起动物让其直立，使肝脏自然下垂，切断肝脏周围的血管和韧带，使其自然滑落。.用镊子剥离肾上腺周围的脂肪，将肾上腺取出。.用镊子剥离肾脏周围的脂肪，将肾脏采出。.采出膀胱和生殖器。.骨盆腔脏器采出先切离直肠与盆腔上壁的结缔组织，雌性动物还要切离子宫与卵巢，再由骨盆腔下壁切离膀胱颈、阴道及生殖腺，最后将肛门、阴门作圆形切离，即可取出骨盆腔脏器。注意事项以上各体腔的打开和脏器的采出，是进行尸体系统剖检的程序，但程序的规定和选择，应服从于检查的目的，视具体情况，可适当地改变或取舍某些剖检步骤。二十、实验动物房紫外灯使用操作规程目的：建立屏障环境紫外灯照射消毒操作标准。适用范围：屏障环境的实验室、走廊及传递窗的使用人员规程：.每天检验结束后开启紫外灯分别照射，每天班前关闭。.实验室及传递窗：使用前照射30分钟，然后关闭。.填写紫外灯使用记录。.根据记录计算紫外灯使用时间，若达到2000小时，及时通知后勤部门安排更新。卜一、空气进出动物实验屏障环境流程规范目的：保障屏障系统安全运行，防止微生物污染范围：适用于动物实验屏障环境洁净区通风系统责任人：饲养管理人员及设施维护人员内容：.空气进入动物房的运行路线室外空预初效一粗效过滤器一中效过滤器一送风管回f高效过滤*-动物房一室内排风口一粗效过滤器--排风管道至室外.空气的运行与管理室外的空气经预初效、粗效过滤器被吸入空调机组的加热段（冬天）或制冷段（夏天）。每两周更换一次预初效，每两月更换一次粗效过滤器的过滤材料，以减少进风的阻力。空气经中效过滤器进入通风管道，穿过位于动物室顶层上的高效过滤器，进入动物房，每半年更换一次中效过滤器，每1-1.5年更换高效过滤器一次。动物室空气经排风口、粗效过滤器、排风管道、排风机后排放于屋顶。为了保证排气畅通，根据初效堵塞情况，每一到两周更换一次排风口粗效过滤材料。实验室管理人员、每天检查两次动物饲养室与清洁走廊、清洁走廊与门厅或洗涤间之间的静压差，要求静压差大于20Pa。发现异常立即查找原因，排除故障，或及时通知设施维修人员检修，保证系统正常运行，并做详细记录。二十二、空调机组操作规程目的：保障屏障系统安全运行，防止微生物污染，杜绝事故发生范围：适用于动物实验屏障环境空调系统的操作责任人：设施维护人员内容：.开机前的检查检查水系统所有管路是否连接正确。水侧的压力表，温度计是否安装正确。检查所有的动力电缆、控制线路是否全部连接到位，仔细检查电器线路确信接线无误，用兆欧表测量，确信无机组外壳短路，检查接地线是否已正确安装到位。检查所有接线端子是否已完全紧固。检查水系统内是否已充满水，所充水是否经防腐、去离子处理。检查水系统的安装是否正确，补水系统是否良好，水系统中应开启的阀门是否已开启，应关闭的阀门是否已关闭，给机组水系统充水并排出系统中的空气。点动水泵，检查水泵转向，若反向，则应调换三相电源中的两相。试运转水泵，观察水泵是否工作正常，水压是否稳定，若不稳定，应开启放气阀，反复排除系统管内的空气。接通机组电源，在不开机状态下，压缩机的曲轴箱加热器将自动接通。首次开机前，应接通机组电源使压缩机的油加热器工作4小时以上，严禁未经对压缩机进行预热，而强行开机运转，这样容易引起压缩机内润滑油剧烈起泡，从而降低压缩机的润滑效果。确认机组运行状态（制冷或制热）和机组回水温度设定值（工厂设定值：制冷12℃,制热40℃）。.试运转接通电源向机组供电，检查电源电压，按下机组远程控制器上的“启动”键，1小时预热后水泵、冷凝器风机及压缩机将顺序启动，观察此时水泵、压缩机是否同时运转。观察机组是否有无异常声响，记录机组运行参数（如电压、运转电流、进出水温及压缩机吸、排气压力等）试运转应不少于4小时。机组试运转后应拆下机组进水口处水过滤器、过滤网，仔细清洗后，方能使机组投入正常运转。.正常运行机组正常运行时压缩机的吸气和排气压力为：制冷 吸气压力 0.35-0.55Mpa（视水温而定）排气压力 1.3-2.2Mpa（视水温而定）制热 吸气压力 0.18-0.42Mpa（视水温而定）排气压力 1.6-2.2Mpa（视水温而定）若机组自动停机，再行开机时，应查明故障原因排除故障后，再行启动。机组进出水温差一般为5℃左右。积雪于机组时，则不可启动机组运行。机组在热泵制热运行时，环境温度低于10℃，机组自动除霜，然后系统重新转入热泵制热运行。机组进行制冷/制热转换，应在控制显示器的主界面下进入系统设置菜单，选择键进行调整设定参数和机组运行方式并最终确认。机组停机时应注意的事项机组在人为停机再行启动，机组的各压缩机将延时3min按顺序逐台启动，切勿强行启动压缩机。在使用季节，短时停机，不需切断电源。对单冷型冷水机组在非使用季节长期停机时，应放净机组内水系统中的冷媒水，关闭全部电源。机组试运行一个月后，应将所有电气接线端子紧固一次。机组日常经常检查机组的进出水温度以及压缩机、风机、水泵的工作情况。经常检查供电电源情况，电气件的接线是否牢固，电气配件是否工作正常；检查空气侧换热器的干净程度，并定期清洗。.维护与保养水过滤器应定期清洗，保证系统内水质清洁。机组周围应保持清洁干燥，通风良好。定期清洗（1-2个月）空气侧换热器。经常检查水系统的补水和排气装置工作是否正常。经常检查机组的电源和电气系统的接线是否牢固，电气元件是否有动作异常。经常检查机组制冷系统的工作压力是否正常，检查机内管路接头和充气阀门是否有油污，确保机组制冷系统无泄露。机组在一个运行期后，若长期停机应将机组管路中的水放掉，并切断电源，套好保护罩。再行开机前应全面检查，并通电使压缩机曲轴箱加热器加热4小时以上，确认一切正常后方能开机运转。机组运转时，不得直接进行“制冷/制热”转换。遇无法解决的故障，请与施工单位联系。二十三、设施外环境管理规程目的：保障屏障系统外环境清洁范围：适用于动物实验屏障外环境的卫生、消毒操作责任人：清洁人员.预防措施墙：四周材钢板墙严密无缝隙、无洞口。门：所有与外界接触的门，严密无空隙。无物料进出时，应严密关闭，设0.4m高的防鼠板。每日清洁人员将屏障环境外的门用消毒液擦拭一遍，保证门面清洁。另外，每周保证屏障环境外进行一次大扫除，保证周围环境清洁。二十四、实验动物屏障环境卫生与消毒管理规范目的：保障屏障系统安全运行，维持系统洁净度，防止微生物污染范围：适用于动物实验屏障环境的卫生、消毒操作责任人：饲养管理人员，实验人员内容：.应保持屏障系统内地面、墙壁、顶棚、室内一切设施洁净无尘，无饲料、垫料碎屑。.每天擦拭地面一次，每周擦拭墙壁两次，每两周擦拭顶棚一次。.空气消毒：每天工作结束，开启紫外线灯30min，换垫料后立即对动物房的空气进行喷雾消毒。.换垫料后用灭菌消毒液擦拭饲养架、和动物房的各种器具、设施。清洗水盆，所用清扫用具以消毒液清洗后放置指定位置。.饲育区内各类饲育用具、物品要摆放整齐，并保持清洁，与饲育动物无关的物品不得带入或者存放在饲育区内。.每天工作结束，将动物房的垃圾袋扎好，经传递窗送出。.每日工作结束人员退出后，开启走廊、更衣室紫外线灯照射30分钟；每次实验结束后，所用实验室须经紫外线照射30分钟；每次购入饲料、垫料及其他大批物品传递进入屏障系统后，清洁物品储藏室须经紫外线照射30分钟。.每日脱下的隔离衣均挂在指定位置，经紫外线照射30分钟重复使用，每周全部更换洗消一次；使用后的手套放入指定容器，洗消后备用。.专用消毒液:过氧乙酸（0.5%-1%喷雾），百毒杀或消毒灵（0.2%—05%空气喷雾，0.1%擦拭），新洁尔灭（0.1%表面擦拭、浸泡），次氯酸钠（1%空气喷雾、浸泡），定期交叉使用。二十五、常用化学消毒剂的配制和使用操作规程目的：保障常用消毒剂的配制和使用操作规程范围：适用于动物实验屏障环境的卫生、消毒操作责任人：清洁人员内容：1过氧乙酸分为甲、乙两液，各500ml，配制时按1：1混合，24小时后稀释应用。性能不稳定，特别在稀浓度情况下更易分解，自来水稀释要当天用完。使用方法消毒方法使用浓度（％）消毒时间（min）消毒物品浸泡法0.04-0.210mL：5000mL1-2手擦拭0.510mL：2000mL10-30笼具、鼠盒等擦拭或拖抹0.1-0.510mL：2000mL10-60门窗、桌椅、地面等喷雾法1-210mL：500mL30室内空气及物品表面等熏蒸八、、八、、3-510mL：200mL90SPF动物房、层流架等喷雾法：最常用的一种方法。配成适当浓度（1-2%），通过喷枪使雾状小滴覆盖于消毒物品的表面，直接接触而达到消毒，喷雾后，它挥发的蒸汽也能有效地杀死微生物。浸泡法：即用不同浓度过氧乙酸浸泡消毒物品，该方法最关键是配得有效浓度即要了解容器的体积，不允许大概数。加热熏蒸法：将过氧乙酸放于较深的搪瓷盘内，用电炉加热，使其熏

蒸，采用剂量3g/m3。2.强力消毒灵使用浓度低，只需0.05-0.1%的浓度，可在2分钟内杀灭所有致病菌和霉形体，用高一些的浓度，可在5-10分钟内将病毒和霉菌杀灭。使用方法用法加药量（每50公斤作用对象作用时间水）25〜50克细菌与霉形体2分钟浸泡法65〜165克鸡瘟、喉气管炎病毒5〜10分钟等250〜500克霉菌、口蹄疫等病毒5〜10分钟喷雾法250克熏蒸法1〜5克/立方米3.白毒杀S®使用方法消毒方法配制浓度疫病感染消毒0.5%,即按1：200倍水稀释（每瓶盖加2公升水）喷雾消毒0.17%,即按1：600倍稀释（每瓶盖加6公升水）饮水消毒0.0625%,即按1：1600倍（每瓶盖加16公升水）环境器械消毒0.17%,即按1：600倍稀释（每瓶盖加6公升水）5号病、皮肤病消毒1%,即按1：100倍稀释（每瓶盖加1公升水）俗名酒精，无色透明液体，易挥发，有酒气及辛辣味，可燃。可杀灭除细菌芽抱以外的各种微生物。70〜75%（70mL无水酒精加水30mL）效果最好，由于所需浓度高，仅作剖腹产、皮肤移植、注射等皮肤消毒。

可与其他消毒药物配成酊剂，常有增效作用。5新洁尔灭使用方法浸泡消毒方法配制浓度0.1%，即10mL原液加水10L30浸泡消毒方法配制浓度0.1%，即10mL原液加水10L30皮肤消毒0.1%，即10mL原液加水10L作用时间（分钟）6等量甲醛和高锰酸钾熏蒸消毒法待消毒的房间应消洗干净，将房内等消毒的物品、用具等敞开,门窗和通气孔尽量密闭。测量房间的长、宽、高，算出体积，按每立方米空间用15〜20mL的甲醛，15〜20g高镒酸钾，用陶瓷器皿或金属器皿盛装药物。7常用消毒剂浓度2%过氧乙酸：200ml原液加至20斤水。0.5%新洁尔灭:50ml原液加至20斤水;2%即200ml原液加至20斤水。1：600百毒杀:17.5ml原液加入20斤水。3%双氧水：300mL双氧水加入20斤水。3%碘伏：300mL碘伏加入20斤水。二十六、动物饮用水管理规程目的：规范动物饮用水的管理，使之标准化范围：适用于动物饮用水的管理责任人：饲养人员内容：.动物实验室应保持有充足的的水源，包括动物饮用水及冲洗清洁用水。.清洁用水必须符合饮用水卫生标准。.屏障环境动物饮用水应为灭菌水，将生活用水饮用水经115℃灭菌30分钟放至室温，保证按时供水，饮水充足，新鲜清洁。.瓶装环境每天换洁净饮用水器。.平日做好动物饮用水管理工作，不使影响实验动物正常清洁质量。二十七、实验动物笼器具的清洗规程目的：规范实验动物笼器具的清洁管理责任人：清洁人员规程：.鼠笼的清洁：将鼠笼放入清洗池用大毛刷洗去垫料、粪便等物，洗至鼠笼无赃物，放入消毒剂浸泡2小时，每次购进动物前放入灭菌斧115℃30分钟灭菌。.饮水瓶的清洁：用中号毛刷仔细刷洗饮水瓶内外壁及瓶塞，清洗干净后放入消毒液浸泡2小时，用饮用水冲洗干净，每次购进动物前放入灭菌斧115℃30分钟灭菌。.笼架的清洗：每日用消毒液擦拭一遍，彻底清除污物，必要时随时清洗。二十八、高压消毒锅安全操作规程目的：保障设备安全运行，消除事故隐患范围：适用于实验动物屏障环境物品的高压消毒操作责任人：高压消毒锅管理人员内容：该设备属于高压高温容器，为确保人身和设备安全，应严格按照下述规则操作：.码放物料：将要灭菌的物品整齐码放在消毒锅内，包裹之间有2厘米空隙，灭菌物品不超过容积的80%为宜。.关门：将杀菌锅门关闭，按下门手柄。.灭菌操作