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文档简介
药物分离与纯化技术课程电泳技术--电泳的分离方法电泳的分离方法—电泳技术大纲纸电泳2.凝胶电泳3.醋酸纤维素薄膜电泳4.等电聚焦电泳5.等速电泳6.双向凝胶电泳7.免疫电泳电泳的分离方法—电泳技术
指用滤纸作为支持载体的电泳方法。
是最早使用的区带电泳。纸电泳操作:将滤纸条水平地架设在两个装有缓冲溶液的容器之间,样品点于滤纸中央。当滤纸条被缓冲液润湿后,再盖上绝缘密封罩,即可由电泳电源输入直流电压(100V~1000V)进行电泳。1.纸电泳平卧式电泳槽纸电泳电泳的分离方法—电泳技术2.凝胶电泳
由区带电泳中派生出一种用凝胶物质作支持物进行电泳的方式,被称为凝胶电泳。普通的凝胶电泳在板上进行,以凝胶作为介质。电泳的分离方法—电泳技术2.凝胶电泳
电泳中常用的凝胶:
葡聚糖、交联聚丙烯酰胺和琼脂糖。它具有机械强度好、弹性大、透明、化学稳定性高、无电渗作用、设备简单、样品量小(1~100μg)、分辨率高等优点。琼脂糖凝胶电泳电泳的分离方法—电泳技术3.醋酸纤维素薄膜电泳
电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、染色、脱色与透明即可得到满意的分离效果。
此电泳的特点是分离速度快、电泳时间短、样品用量少。特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。电泳的分离方法—电泳技术4.等电聚焦电泳
是一种利用有pH值梯度的介质,分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。适用于中、大分子量如蛋白质、肽类、同工酶等生物组分的分离分析。电泳的分离方法—电泳技术5.等速电泳采用两种不同浓度的电解质组成,一种为前导电解质,充满整个毛细管柱;另一种为尾随电解质,置于一端的电泳槽中。
前导电解质的迁移率高于任何样品组分,后者则低于任何样品组分,被分离的组分按其不同的迁移率夹在中间,在强电场的作用下,各被分离组分在前导电解质与尾随电解质之间的空隙中移动,实现分离。电泳的分离方法—电泳技术6.双向凝胶电泳(二维电泳)第一向采用等电聚焦,根据复杂的蛋白质成分中各个蛋白质的PI的不同,将蛋白质进行分离。
第二向采用了十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳,按蛋白质分子量的大小使其在垂直方向进行分离。其结果呈现为斑点状。双向电泳电泳的分离方法—电泳技术7.免疫电泳:琼脂平板电泳和双相免疫扩散两种方法的结合。将抗原样品在琼脂平板上先进行电泳,使其中的各种成分因电泳迁移率的不同而彼此分开,然后加入抗体,做双相免疫扩散,把已分离的各抗原成分与抗体,
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