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文档简介

《微生物检验技术》微课----稀释法药敏试验原理及操作方法稀释法药敏试验定量

原理以水解酪蛋白（M-H）液体培养基将药品进行不同浓度的稀释，然后接种待检菌，定量测定抗菌药物抑制或杀死待检菌的最低抑菌浓度（MIC）或最低杀菌浓度（MBC）。稀释液M-H培养基稀释物接种菌液1:200稀释材料同法做对照菌药敏试验010203加稀释液排列10-15支试管，从第2管起每管加入M-H液体培养基1ml。

倍比稀释

吸取抗菌药物原液（1000μg/ml）5.12ml、M-H液体培养基4.88ml

于第1管中混匀，取出1ml加入第2管混匀，从第2管取1ml加入第3

管混匀，依次倍比稀释至第15管。待检菌加入加入待检菌悬液每管0.05ml混匀。置35℃培养12~18h后观察结果。方法步骤抗菌药物的溶解和稀释抗菌药物母液的稀释步骤培养菌液稀释混匀挑选18~24小时的菌落置M-H肉汤增菌4~6小时制备0.5麦氏比浊管1:200稀释，使之最终浓度105CFU/ml。将稀释好的菌液分别加入不同浓度抗菌溶液中微量液体稀释法

在微量聚乙烯微板孔中加入各种不同浓度的抗生素100μl，从低浓度往高浓度加样，不需要更换吸管。微量液体稀释法

用微量加样器接种100μl菌液到96孔中，盖上盖板。同时作阳性、阴性对照。微量液体稀释法手工看浊度或仪器自动判读。按照CLSI标准报告细菌对某抗菌药物为敏感、耐药和中介。

孔底部清晰不出现细菌沉淀的最低抗菌药物浓度即为该抗菌药物对细菌的最小抑菌浓度(MIC)，CLSI标准判断其敏感和耐药。

再用0.01ml容量接种环取肉眼观察无菌生长的液体接种于血琼脂平板作次代培养，经35℃过夜培养后

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