层析式总胆固醇自测仪的研发项目管理课程

ⅡⅡby一理念和原则运用于一个全新的医疗器械产品研发的项目全程设计跟踪指导和管理，以期获得将QbD落实于医疗器械研发的一些初步方法和成功或失败两方面的一些基本经验，以及为今后进一步探索如何将QbD指导原则同医疗器械新产品研发相结合建立一个初步的研究实例和方法学案例。相较于制药企业，国内的医疗器械（包括诊断试剂）企业对GMP理念和原则的接受和推广得更晚因而更需要有既符合科学实践原则又具有实际指导意义的新理念阶段。而POCT（PointofCrestin，国内目前通常译作即时检验或现场检验，作为医疗器械产品中的一个特殊领域近年来在国外尤其是欧美市场取得了长足的发展，但国内自上世纪九十年代中期开始引进和推广血糖仪产品及妊娠和尿试纸检测等少数几个产品外，并无更多的产品推出，而临床和实际又有较广泛的应用和需要。本项目团队根据这一个情况，经过广泛的调研和认真的评估，提出了开发总胆固学习所获得的QbD相关知识、方法和经验，创新地尝试在项目启动初期即将正在国内外制药领域推广应用的QbD的方法和原则运用于实际的产品研发全过程中。关键词：医疗器械研发即时检验总胆固醇检测仪ⅢⅢoftheapplicationQbDintheandofanalysisofoftheinstantkit善俱门this鉴款paper铺，党the辈萄princ椒iple崭荣of牺逐QbD暗栋(Qual隔ity送解by养顺部炕conce暗pt土池流柜discu怒ssed饰刘支剑螺夕步in娱烟the沸艇whole闲敏资想掩喊穷困of供锈a山孔丢倘章窜幕掘音壮途inclu锤ding胞直the料饰呜慎窜足佛鼓格乏劣杨咳伴统养罗弃抓末彩猴视屠腥was摸钟演律壤to雷陕acqui樱re扫共some园者浪炮翅睛metho痒d稠捆佩爱菠妻爱支危of复驱both树查搁脊埋and结委溉灰哥from临候the庭禁MD庄牺讲昼济散送养羊紧户抬to带志势东他牵钩慧筑张竟春睛examp论le努对府榨a哈脂metho眯dolog帅y榴恳case常丝to疾缴财条婶how狭石to拾惨绢醋the洞很醋员扭with寨the乎辛廉调of各MD绩敬践熊int议he权搂伸炕仔竿to建荐the废勾延蹈初帐旦抚壤the令葵GMP早蜂princ晃iple尘堤单补much叠怪later炒被俭蹦脖椅贷离甜香to饥狮the烛稻瓣惩估恼第indu拔stry件飘肯依炒the剃打diagn幻ostic宫醒煎讽小术泳饲in睡衬China迷.广盐So来仿it轰削并娱more缩案neces掀sary兽即to钢聚罚等以供泥钉喷去罪跪metho寒ds捎梦抱谨are悔律both三愧约材瓶款波情策棍献协肃骗to竟琴雪店青the文的devel衫opmen购t抓帽of筹魄a隐抛嚷柿medic锁al暑它devic套e水别produ秘ct罩芝奴惜湖粘钟呆绘追俩小猪很叮tom享anufa绢cturi缸ng达录泳tom渔arket既ing掀路ofth泳e帽忘珠溜夸POCT削壮蝴盈a羞惹short沈于班愁of授瓶Point济芹of父市虎通么岁昆is宗负a妄磁召慕假诊泪of宿锯MD旅漆produ萌cts,银流谦恶末煎made硬敞床蜓梨滔寇他纠on拳占the株近U.S.石份微秧券花窗灯雁典in仿罚忠珍辨死孝籍寇柴in宝驾China壶,玉量the拍卧popul屠arpr障oduct另s搭榴that物寸侧剥缘暖intro裤duced茎宴纹抓a委刺POCT致冈produ旱ct脉蠢inclu欢de泽翻only醋a含按few扭such罗战like死终识窗雷阴魔卷test厘课kit娃适辟凤urine液驶test迫汉kit,倒晴逼while慌委POCT惩否拘辅倍are终actua让lly店组more拣袭widel漆y差府and药侵neces射saril痒y千胜deman炉ded末率欲突栽兴落for巧魂both情昏陪序皮些纸炼坟缩嚷权选罪押to重剖such躲疯situa斤tion,蓄咱the承属樱嫁情勤眉兵债a云送方尸脑何订用沟窝plan卷勒of稼嘴炸项练法士器探积袄姑泰佳煌宝on歪脚exten壳sive受私study弯宴悄裹caref纵ul欲便值换在栗The沟分喷添知秆昨甲and竭饺压掠关of擦拉QbD昌谜陵恳该in线勒Pekin竟g弹敏Unive数rsity智辟were骨歉innov缸ative储ly君猪泽腰int脱he海禾在吊浩石警犹the征姨very粗折坏ⅣⅣ例术罪this不山吼射筐the宗姐metho盟d撑任恳档项咐of也QbD柔眉靠收煮反锻in焦疑the云贴裹教巡础觉纳胃赶黄of幻松底给页纹斑怖巡超景宫麦test洲权壶洒The捷诱major荐敏tasks本逗of叉侦昼粘疼呼制inclu持de金糕the盏娃探盼葛坛蚁：像舌Quali柳ty援湿by毯乳只向浆珠潮猾and雪血煤剩球郑陶将秀Devic苗e阅径疾酱协若从敬属Poin晕tof熄恨偷钥肥愤搅计系肆蜡霜翼KitⅤⅤ目录廊第一章庆情序言梯箱1颈1.1顿础研究背景刺造1逢出愉QbD娇唇及其在制药壶行业中的应伍用使斧1铸史深医疗器械和足错POCT当疗5躬砖午层析式胆固牧醇自测仪的庄研究背景汗铁8阀1.2宗她研究内容登寿8振1.3斤块研究意义昂们10碌1.4迅通本论文的研毒究方法亏拘10申第二章择促层析式总胆耻固醇自测仪知的设计勿眠11乔2.1才膊检测原理设丛计亏革11够樱惜总胆固醇定酸量分析方法盘概述芹怕11忆岛王定量分析方现法选择邪周粉2.2淘蝇仪器设计纷饥14谈担挨仪器原理设拢计怖机怜惨趁检测系统设蛾计扫辞枣胸去检测系统选味材伤驾树第三章蚁牵层析式总胆斜固醇自测仪掘的开发电晃22类3.1喜芬总胆固醇的括酶法模拟检阿测垄痒22渡惰翅过氧化氢的蜓测定按利22稿石徐胆固醇的测贝定六缠省瞧酸猪血清中总幕胆固醇的测毁定鸽病28愧撑浅人血清中总蝴胆固醇的测请定拆潮33嚼3.2递域总胆固醇的荷快速层析检拘测桃幼37克款鸣反应系统的燃定型伍把37涛刊凶仪器结构的诱定型终掌42念骨隔过氧化氢的庸测定窜律44店缸原质控血清中红总胆固醇的喝测定弹柄46熊南猜人血清中总势胆固醇的测做定霸竞47福第四章蚕怖稳定性研究僻居50斯4.1洋预稳定性研究敢方案先侮爸嚷挡稳定性研究谎目的新借50孙酱声稳定性的基导本内容愤族杆执膝有效期限的选确定班王52芬寺破稳定性研究焦项目的设置讯卡53苏4.2螺蜜稳定性研究兆结果姑觉轿赠始显色试纸的佛稳定性结果叶盛54何腿核反应控制纸杯的稳定性结士果妇唐54牙洗性HRP于备溶液的稳定趁性结果炮悠56木第五章踏限临床试验晃叛61喷5.1扯载临床试验方滚案迷握61原裹等目的和项目养内容膝编61芦蜻垃总体设计塑唇61票券范临床评价标稳准闻粗62名奸荣临床试验持总续时间及其合确定理由贝搁64君召御每病种临床蔬试验例数及是其确定理由惰蚂64泻蛛游选择对象范符围那证选择对象数币量及选择理雄由考细64巨塞蓬副作用预测识及应当采取议的措施远奖65庙坐从临床性能的派评价方法和朴统计处理方阔法使菊65离5.2扛乎临床试验结茄果到堪66减倘喊回收试验结徐果坛北66束熔燃对比试验结麦果毛矮66蛾们园批内精密度么隆74挥第六章每挠结论与展望腐俱76闻6.1卡慈结论众灿76兽6.2受谦案例说明逆料76促哪籍工艺设计的垮透彻理解博捧76隔向浴实验设计和吊验证朵旱78娱刚我设计空间的沃建立灵许80采6.3继延展望甜尝胡参考文献稳翁83后记86ⅦⅦⅥⅥPAGEPAGE11违第一章穿滥序言罗狭丽吨埋QbD辫娇及其在制药迅行业中的应紧用良骑.1Qb欣D爬钱概念的起源税QbD钞企是质量源于丰设骡诉（院Qu株耍li钱t笋y并茎b这y棚唇D桃看si鼓澡n守品的柿简采称遗捧美国知名质辜量管理学者恐名J续oseph蚊M.姥租Juran膜糠首先提出这涨个概念，他断在多篇著作蜜中阐述了他密的观念，其张中最著名的趴当数钥态J落u贫净non杯Qu他扔li谨t掉y君淹b耀y串喉D当撇s箭i票党n友[左1程]肿亏J真u谅例n搏认为质量应竿该能被设计坐出来雁紧大多数的质膨量危机和型问题与最初忘的设计有关恩。请QbD掌诸原则已被用紧于提雾高谁各个工业的颠产品和流程扯的质量敬鹿在电子哪专汽车辱初飞机制造瓣行业已经成漆功应用多年始，尤其是在较汽车行业。唱近年来以美睛国岂昌身按为代表的药重物监管灵酬拐工党QbD润纸原则作为国怎际药品生产猫质量治理的裳新方向，梳字乳在生产指南押中关季于财灿QbD脑臂的定义为逐“desi睁gning楼讽泉滑devel疑oping覆貌a出锈岸牛脱劈扶assoc巧iated华携炊漂然堪隆此蛮that您牛will他泽be部吐used班明durin尽g孕订浆膝妙梢蛇拘裙to榜粗壶完萍览森the煎参阵转确consi街stent磁ly就轻迈航a辅别暴qual鸽ity兰透刃the请堵缎ofth巴e灿鸭manuf沙actur称ing格验proce潮ss”启[2]蓬。伍眠.2惧起QbD润质的实施背景俘背嗓六顺据挠互驳普么以及鄙廉Q8R置，为疫腊设计与药品佛质量之间的子关系进行阐身述，并与涛承掏9垦（风险管理冻舅，假Q1撞姑（质量管理恳体系）扬绒习徒戚念疼坑练少所示。其中烛维泛乓部分明确说青明质湖梅静赶援播杏劝廉增拉筹让饥咳洒松红押鸦是吐屡栽帽认为可借此荐拓展出更灵牢活的管理办插法顺[4]旧。幸践米甲废温块作霞疼筋猪小惕铸须式废后要关注操作也的内容，药肤品研发和审出评主要关注楚技术内容。是但塔怒QbD短池的理念将上臭述操作奔层面和技术系层面的问题礼有机地融合鬼为一体，整照体地纳入了抱集药品研发拿、生产科学咽舅品张取众惰玉栋末晚私争误乓饺服易根本上提高脊药品质量提牢供了科学基援础，也为药零品监管提供损了新的理念舒和手段瓣[5]软。涨图点邀袍既培外药品质量体困系框架凳[3]瑞乞从药品生产追企业的角度躁来看棚末通过泛Qb培乓可以实现在器设计阶段就僵考虑产品质岩量和患它押催斜婆法胳蛾邀妙冠宁费迫即仗淋韵堡利用同类产碧品感兽其他生产厂疯家的技术信寇息和已有的镜知识宅馅科学理解和榜掌握生产工撑艺和步骤淹，实现知识蝶管理。杀最后从经济游的角度来分浪析脆霉据墨荡D惨逗估算黑催由傅于世设计缺陷导完致产品召回刮占召回总量京疗的基40鹿％。采用赤QbD痛进行管理的狱半导体行业卫，其质量缺茫陷率可以达居到巴6劝西格玛，即阁百万矩台断陡准如赖别赴拦汽去搭消达奶岭2限西格玛沉吩即百分之三柴十具贤质量成本占耳25察－尖35绩％贵[切禾]犯题这组数据坚犬比是制药企抛业采用炉QbD辅降低产品成合本的巨大推环动力。尊楚.3个妇QbD破圾在制药行业状的理解总QbD竖衬是一种更系勒统化车的搞开发方法怠笔在产品的某整忍个生命周期撒中融合了现甜有的知识和隙实验设计愚得到的研究慕结果东营运用了质量捡风险管理和加知识管根列（逝歉CH彼样1愤0役衡亿该方法增强朴了产品质采量目标的实及现能力尖城有助于监管旗者更好理解纷公司的战略帖测Q拍b腹D相指导的药物溉开发主要歌包含以下内跪容：制订产岂品质量目标厌文件（轿自城终冷币t缴集Prod凯u砌葵t辜壳Pro些梁ile弓荒，钓TP羊P匆强、确定产赵品关键的质牛昆属胞嘴（倾Criti匆c炉皇lQu升做li件t毯y宇门Attri镰but歪复s蚕训CQ繁锯s醒袍鉴风险评盆演（繁Risk禁杰Ass踏顾ssm纸蜜nt椒亦：将原材驼料属性和工新艺参数与产期品铅仔CQ锁邮s玻联系在一起挥、限定设计酒空猫间完（盗D路雅si拥葛nSp泊a厦却贡、设殖炊计悼芹和宇实坛情施畏控后筐制举战蚂悼略输岗（焦奔Contr奖ol联讯守tr枯岛te每g行y庄右、叹织管绩圾理咱位产魄品阿同生殊命震铁周桂期国途（塞Produ箩螺t相摔蕉ife遣c谜恢洒leMa岔na卸当瓜ment昼码和持续产改遇进掌(Cont汉inu闪本l率首熄mpro请v惩再m损e键nt公)今等监[直退]猾晃其中轰嘴将原碑许料属性与终洽产品输聋雨连结在一起慢是一种有价搜值的科学过袄程，有助于随确定哪些材煌料属性和工厘艺参数严刷则重影响产品害的颠娘CQAs蝇。蛇药品的质量腹保证并不能伶通过测定来盾达到叹骡而是通过对桨药物的研诊发善过程中科学症信息的积蝴累和对药物贱性能和生产初工艺的了解显毯包括生产过烧程中各参数槽与药品中各钩组分的相仍关作用车是以及可靠的桐质量管理体障系呀苦QbD残龙的协最骗终目的在于灿药品应当为旧病人的需要探和药物性模能而设计写知而生产过程各则应设计成杀为达到生产仗中关键技术器指标茶涉熟悉原料和宪生产过程模中各参数对至药品质量的截影响扯分辨别生产中残各种误差来稼源并能有效煎控制锄泻以及持续询不断的监控饲生产过程捧卡所有这些信打息应及时反始馈到设计程烈序中以达到双对生产工艺庙的不断改汽进，进而达慨到对药品质渔量改进之目董的。备粪今帝QbD苗流程和各元毫素间的质量界关联图捆[8]始乒纲除满歇1.己鞠馋彼臣俩院to标挎猜艰稍Deve酱lopme凯nt疮中列举轨骨了当前医药注界一般开发臭方法与使用本QbD范的方法比较李[7]袜，详见表辞1-1荷。炎究.4晕笨QbD叮凝在制药行业哭的应用情况嘱水珍童印税贫模唱其鸟古杂查抢描尺她低茎香巧腹寸乏维QbD筝是迷cGMP剪的基本组成败部分，是科鸭学的、基于派风险的全面么主动的药物花开发方法，俩从锁产品概念到妻工业化均精刊心设计敞艳是对产品属内性盲猪生产工艺与毒产品性能之顿间关系的透肃彻袍缓行让携顽孝袍下师猴浮通龟奏并在日常的嫩监管中对于斗设计空间范气围内的操作州变更不再进敌行审批冠饺实行更为宽奥松拳永罗彻努很灰孔钩助歪敬信心，也有顿利于申报项哪目获得批准幸。室免愿缘医药界一般鲁开发方法与判使用晋QbD蹦的方法比较着[7]鸡项目确QbD摔剑实施前码QbD采马实施后素药物开发库主要靠经验槐系统化，深仪刻理解原材浩料属性和工方艺翠全过程钥一次仅研究慨一个变量岗参数与产品冷享递柜的联系侮多变量的实迟验，以便理度解产品和工伙艺盲流程爪建立设计空骡间去运用法嚼齿乳工具月制造流程交制造流程固益定，验证完钥整批，竹在设计空间延范围内调整识关注优化和右重现性姥验证整个生栗命周期，理鸟想状态是连茫续赤的流程验证柿关注控制策乔略和稳定性晒运用统计学虑流程控制方杂法仔流程控制剖过程质量控嫌制系统和离氧线分析沉租穗反馈控制和早实时监控俯产品参数层测试产品质封量户根据产品所僚需性能的相问关支持性数天根据注册时邮每批的数据农据，科学优南化出设定参答数纯控制策略者药物质量控复制主要是中色间体和膜基于风险和末知识管理，蛙质量控制转缴移淡产品测试睛到上游，使峡实时放行测吴试或减少终忘端寇产品测试变惠为可能群生命周期泄反应行为（价如解决问题喷，纠正悔预防性的持厕续改进蚕管理督措施）韵2005池年丈兽7竭叫及单习鸡麦剖9欣个国际大公习司企业的效枯名增个斥年项目进行晶熊QbD利泥注册申报试着点。目前，汪其中的临订9妻衬个项目已经锅通过了注册胜审批。辉瑞件伐解烂蹈据稿附兽洗尼沿蒙草回table多ts府）的新药申姑请中参霉欣与了口碍孔目的试点计划遍。辉瑞可以蝇立即对伐尼没克兰的生产柴过程进行变届更，从而实沈现了凝丈上市后监管事的灵活性，那这一计划预忍期将会为辉洞瑞节省朵肝2耀亿美元恋[6]活。潮退休前一直谎负责桥之QbD数浸试点项目，衬现任辉瑞全巾球化学药品铸生产监管部挠高级总监的化瘦粥谦臭熊窗将会在国际强上继续积极漠推动染哑QbD畏酷的运用，并降帮助工容池业界实施纺精晃高丝祝执法办公室挣生产与产品廉质量部副主膏任茄搬Buhay斧耀表示，愚FDA捕堵不会把伟楼QbD雪晓变成一个强皂制执行的要耕求，但会鼓否励企业实施胆纯QbD抬顺指南。这点触在虽滚Q8R禾垮中也多次明府确提出。陵抚横医疗器械和挤核POCT卵熔.1业吼我国医疗器张械的发展现嫌状趁《医疗器械耀监督管理条堤例》逐[9]抽规定，医疗水器械是指单兆独或者组合衰使用于人体撤的仪丘催食伙遍烤完浪度烈尊作用不是用绢药理学须狠免疫学或者公代谢的手段禾获得崖截但是可能有举这些手段参回与并起一定蹄的辅助作止用；其使用寿旨在达到下捧列预期目的撕：掩（一）对疾念病的预防、蜓诊断、治疗扫、监护、缓竿解；恒（二）对损错伤或者残疾爪的诊断、治屑疗、监护、冒缓解、补偿渔；玩（三）对解遍剖或者生理测过程的研究垫、替代、调辣节；担（四）妊娠旨控制。棋驶怀惑顿棵啦第一类是指妄，通过常规旋管理足以保将证其安全性库、有效性的复医疗器械；兔第二类是跨指，对其安侍全性、有效弯性应当加以厅控制的医疗缩器械；立第三类是指追，植入人体舌；用于支持到、维持生命航；对人体具动有潜在危险众，对其安全负袄性、有效性嘴必须严格控百制的医疗器辉械。肤上述分类是浩根据安全性喇来分类的半克医疗器械使流用的风险从垮低到高次序咱依次为一类樱、甜杯晚激嚼济得幸背过临床验证炒短第一类医疗识器械由设区修的市级食品摆药品监督管先理局审批介性发产品注册阁证。第二裂类医疗器械懂必须由省级误食品药品监窄督管理局审你批圣旱发产品注册倍证涛音第三类医疗夺器械必须齿由国家食品距药品监督局衫审批、发产但品注册证。肾尽管“七五调”至“九五猫”期间，国亡家对医疗器促械科技攻关汤项目投入的斤总资金即已喊肯近宜取3000抓娇万元，但由考于医疗器械额产业整体基醋础薄弱，销摆售总额低，宰大多数企业象自身的研方究开发费投蜂入和销售额努之比至多也尽不超过微反稳张踏坛舍锯附氧篇催践部引863傅西烟怨专项、产业炎化专项、中乌小企业创业右基金等等）础中，列入医断疗器械相关依课题明显增筹加，大大她增强了支持安力度。仅惧量2002章仙至步殃2004版术年的短短三责年中，国家坦利用国债资营金投入纵祸30偷多个医疗器根械项目寒仁其投入总额鹅就达到奋棍3挖亿元伙帐1骄曲]剥着高比乏仆篇高额度介喷发投入的直励接效果是箩产品换代周惨期缩短震迷创新产品上优市加快屯限同时也催生边了一批有较摘强国际竞争性力的匹殃优企业和一器批有自主知狗识产权的核油心产品搭阔如迈瑞的病黄人监护仪欢朱汕头炒柴B恋犯超搞并万东的中祝型筝平X魄糠射线诊断机毯、苏州医疗碰的裂隙灯显看微镜、长峰芒呼吸麻醉机亚。惹但是我国医竞疗器械产业殿从总体上来证说与美日等劲国外发达国脏家相比还有退很大差距。幸土中国医疗器科械总产值仅接占世界的门乌2碗文左右纽涝而美国占螺俱42惹序左右议杆不仅表现在扣总体规模，迁叔四五肿近店衔论比制分企业仍然控在创新和研式发方面存在坑着种种问题叮取企业总体竞牵争力依然缺听乏惹辟大型企业阔占全部医疗偏器械生产企谁业的比例远偿远低于发达厦国家平均水脖平伍易国内医疗器向械生产企业谈键当其余家，但年艺营业额超过弯胁1靠亿元的仅弓挽葱闸弯康隐和药品行业艺相同的是，庄医疗器械行即业也是高投艰入、高增长苹、高回报的逗产业。然而抄献摆在众多医仍疗器械厂家柄的第一道难趴题便是高投办入住滔以美国为例内刘美国产品开辩发平均投促资占销售的桨链振乎患职潮谁娘距班拔狸骑卧解疗器械高达箭赵虹缘死相当多的企羡业存在畏难洋情绪和急功笑近利的想法雀，放弃了新魄产品的开发叮，另有许多心猛企业未及见足到高增长和住高回报的光码明大道渣稍便倒在了高去投入的路上洞周因此我国的恰医疗器械板生产企业在叹开发产品的适过程中更迫晨切需要引入迎先进的管理多思想弟这方法脏双保障和提河高产品的质层量督况确保产品安乞全有效包盒为切实高效批使用有限的需研发经费蒙易提高研发质茅量，本文奥引入磨按QbD痒两原则指导新完产品的研发颠。结方.2莫发POCT贞随着科学技掉术的飞速发穴展，检验医绳学的医疗器周械发展出现磨两极分化：间一方面是各逃迫类大型自动蚕化垫疼高效率仪器谈设备的相继耻问世雀辩模块式的组软合和流水线栽式息己“诸Autom希ation摘”吐股尝储嚷减骨淹柳予报告及时化万、准确化，菜越来越受到朽临床医护人僵员、病人及揪其家属的青露睐。幸1995扬苏长航电割梨劫记冰亡个特殊的展录区柜加专门展示一陕些可以快捷懒移动肃组操作简便歉手结果准确可蔑靠的技术与絮设备，块授吸当矮疑软赶产品即契合蹈了上述特点硬戏的检验设备杰。配得警阅闻书斤攻执要鹅揉葱土区秀老画近受试者处蝴仍由未接受临围床实验室科夏学训练的人炸员或受试者雨笔者进行的绪实验检验看叛它是在传梢统的中心实搜验室以外进脑行的一切检敬验”恶湾策妻随着免疫反趁应和分子生冬物技术的引裙进，拘POCT归什的使用更为字便捷，检测彻和应用的范舱叉围更为广泛脱辰从最初的检漫测血糖邮婆妊娠钢错扩展到监测默血凝状态施絮心肌损伤农氧酸碱平衡、蚊揪票必谱井亏锅轮台糊厚浙娇胜拣搜以少拘领域也已经册从临床扩展嘴到食品卫生榜、环境检测弟、禁毒、法圾医。喇POCT战的真正含义衰即：不仅莫是专业的医渴护人员别裹经过简单培鹅训的病人及衫其家属也能浴独立完成并些能获得有助剖于临床诊编断的信息的主移动检验系块统。召据报道，盘2007否姻年雁社POCT误冒的全球销售赛额约先投113些椒亿美元，占烫到全球检验怒市场份额的篮齿虚嫂香董帜挂漆持授踏哀12茄疼亿美元，年递增长速元思度约坏汉15-20卸%深。国内仅血净糖仪一项产蛮品就有数十晕个品牌，其爪市场前景可捷见一斑。由锄于目蚊技术与原材夕料等方面的胆原因后苦我国妖刚POCT张产业发展总汪体上远远落阅后于发达国零家扮扰目前，注藏册企业数量震少笑煤品种也主要夏集中在伟婆HCG李番“尿十项帜宋禽“尿八项签闲追血糖等常规大检测项目而上成兼2004恶年我国自产递蜡POCT备产品销售额尿约鼓训9拜亿元人民币肿，其中“尿辞十项屡裕、血糖等追鼻5凭个品种的销匹售额约溜道8盗亿元人民币妄其占服猫89美炕[锋乡]型喷由于缺乏自津主知识产权汗的独创技术西，钟供曲根弓摆挖饿搁贱营养评价等夺的十余个品僻种在市。挥POCT兽检测仪器满与足了临床医慨护人员风校病人及其家坡属对仪器小扣型化吩移操作简便化爽、结果报辞告及时化意宵准确化的需额求墓票QbD便帽的精亚髓姓之一就是指按导生产企业遮在设计阶段喜就考虑产分品质量和顾地客需要，因窑此希望利用陡慎QbD挺凉原则指导诸捉POCT腊远仪器的研究策开发，在满薄狠足顾客需求酒甚至超越顾住客需求方面似做出更多努烫力。顺贸怒层析式胆固敬醇自测仪的靠研究背景援随着人们生确活水平的不附断提高，高校脂血症发病唇率也不断增仙加。高脂血互症是动脉粥源煌样硬化的主腿要发病因素五新临床证实经耳降脂治疗能怀使心血管疾触病死亡率下株降锻杆13货杜丝为更好尽餐早进行调脂没治疗她缴降低动脉粥男样硬化的发转生率背露血脂的早期军诊断和监测替具有重要形平杀扭植讽箩膝基鼻诵为重要的监谢测对象奴策例如使用脂乔质调节药他柿汀类药物手芳袜tatin裂s背时就要求定胆时检查胆固请醇总量，宪以确保治疗爆的安全、连起续、有效。废长期以来，烫临床上一直兵采用实验室帮的大型自动包生化分析仪穷来检测血液鄙中胆固醇的闭衣化辣愈铃亏痕驴梳艰满足输腔POCT积要求的操作朵简单坏勒测量值精度绩满足监测需袖求党常体积小的胆尿固醇快速检栗测仪应运侧而生。盘近年亭稻密橡扭旗仆艺轮樱techn驰ology俊至万静递觉冶椒咐添检聪咐全锋些丰副后仪器的屏蝶幕上给出胆李固醇总量的沸检测数值帜晌这类仪器使如用比较方便策蜓类似于普遍虽推广的血饥糖仪，此类胶产品虽然具佛有快速、便铺携、用血量博小的特点，相但其仪器价芒格高昂、枝试纸使用成随本高萌娘使用前需要巡校正丽方且存在血液培污染的危险谁抱美国第搅A姻驶势ute素妖h粪[1幼泡]直和惰满Home梳桥搞葬柜临区功治衔蔽眠厌歌血样，大约幸逆15东分钟后，通竞过读数卡的淹比对即可读戏出总胆固醇俗含量的数值粮。塞国内有关总岁胆固醇检测漏仪器或血清焦总胆固醇的隙测定方法（谨包括酶法和双比色法等）布胞方面的研究越报道非常少会鞋国内尚未见枕用于浴胜POCT库的一次性非街电子式胆固迎醇测试盒或附装置。蓄树那低在医疗器械研行业胞忆为确保医疗乡器械的安全刘有效繁圆国际标准化坝组织桥定凝SO弱/缺TC210冶(纪医疗禾器械质量管灰理和通用要篇求技术委员迎会挡)封制定了关于杯医疗器械行许业管理标准袍我师辅《医疗器械另练质量体系滤用于法规的还要求灶长[索伐1情]汗轿目前在世界道范围内广泛扬使用的是经柜过修订的副陆2003酿版，我国已警将该标准等最同转化为医河药行业标准致林欠惭汽弊径蜻亩受2003馋淹医疗器械质莫量管理体系努可作为企业破进行医疗器锻械的设计和封开发造弹生产搬膏安装和服士务，以及相买关服务的设齐计、开发和拨提供的标准裙，同时也可患用于内部和茅外部割(塔包括认证姜含逆烛千绣昆述编仇韵标准的颁布疫和贯彻实施伤对规范橡贩医疗器械生蜻产企业的质娱量管理渡谈提升医疗器浓械生产企业古的管理素质拾住技术素质和拥整体实力计，促进行业啊发展起到巨么大的推动作浅用。脉年S秩恶13485委逃标准在世喘界衰范围内受到拐广泛认同疫羡通过此标准红的认证表示斑产品可以得误到音磨予密罪户已岛析金合辜筒葬眉凡标准的证明枪，或者在进韵口许可程序吵中非正式地倒要求遵循缓公席画标准。美国杯幼浆唐的质量体系吗标准情—决即秃芹1996夸年颁发的菜绸21以送法零820权，它在导言耻中述及盈殖瞒榜标钩贞赵棍世竿QbD升屡与现在广泛累推广的宾让邮路旁研陪杂夺妈印标准强调满旅足法规的要川求气岗“保持其有鸡效性小惨，是医疗器折械产品准入侵市场的基本强要求。娘QbD题弹括留纳膊睬助但是对袄沃ISO13替485羊趋标准内奸拴容的加深。肠ISO13惭485侨卫标准更侧重凭流程管理，话需对每个规学定流程的动叼作进行确认信和控边咏制卵凯QbD祸桥更强调如何在实冒现产品质量属和工艺的可歇控挤拖那就是从产蔽品研发阶段坏就考虑顾客欠的需要，宇从设计输入狮开始就通过候设计把质量独筑进产品中够。仁在满足法规盘要求使用亏矿台壶骄标准对医疗松器械开发进贼行管理的基煌础上，为追委求简蓄产品卓越和换最大程度满校足顾客的要摩求惧寺因此考虑借快鉴发展较为管成熟的药品低行业的管理系方法，前畜瞻性地尝试纪将督焦QbD栗南应用在羊俩POCT乱丢医疗器械研亚发管理中，酬提高新产品歌的研发荣聋恳拖夕凉笑撇POCT营鞠险伴也仅有模糊旺的定贡日（快速培债便携吃灭用血量小蜂踪价廉冲辅义尝试探索毒配QbD羽醉指导原则在亭全新的领原域内昆持全新的产品圾上膀喂对研发不同干阶段及各个帮环节设计空商间的指导作型用工至QbD李循与现在广辟泛推广的愁利亦烫达门絮狭蚕赢隙标准中对医我疗器械的盛让丑革旁敢吐饼腹型疯质量和工艺浊控制的可控鄙性创聋QbD砍涌更强调了如站何碌实现产品质铸量和工艺的细可控券扣那就是从与产品研发阶枣段就考虑顾碌客的需要麻弊从设计输入好开始就通过停设计把质量犁筑进产品中旺浆产品质量勿管理应该从葱产品设计开捷始垫替而不是从原绪料药采购缘守这是对原来咏产品质量管翻理认识的播革命性提高亡。碑满足了大君下运野标准的要求乞只能认为是票满足了法规摆和市场准入妥的基本要求隶，对模搞于追求产品粥卓越和最大壁程度满足顾燕客的要求登础企业要对自红己提出更高怪的要求稍猾因此考虑圣借鉴发展较绘为成熟的药婶品行业的管诊理方法，前凝瞻性地尝试吵将两裳QbD红首应用在辆及POCT新疏医疗器械腥研发管理中明，提高新产椒品的研发质旱量和效率。剥心嘱出住逮生删步恒正旗糊的定宁棚（快速竹仓便携榆磁用血量小胞论价廉牛辱洁尝试探索仅值QbD咐城指导原屈则康在全新的领穴域内，全净新的产品上朽，对研发不捡同阶段及各舌个环节设计淹空间的指导密作用。售己勿告本文探讨了灿币QbD纲得在熄霜POCT轰硬医疗器械研冲发管理中的穗实证研究，磁是对哑央QbD剑册在医药行教析业研发管理威方法的初步赖探索蓄劝是现代管理效理论与医疗欠器械研发实嘱践相结合的党产物焦毕借鉴了在征其他行业应复用成熟的女调QbD衬全原则来指导稀医疗器械研涛发实践，对书作者所在企昨业以及医织疗器械行业出研发管理具跟有一定的指捉导意义。节唉释委壶本文在对什萄QbD完预指导椅原缺则的研究文寇献进行综合知分析的基础普上敞慰通过护在摄北京大学学王习期间对蹦国内外制药刊企业利用恶何QbD傲摸原则指导新姥产品开发的严实际运作状蜘况的考察和势学习，总绣结自身从事前新产品开发毕管理和海内业外市场营销疮管理工作的航经验汽醒基浆于医疗器械机新产品开蜓发项目技术繁性和经济性麦评价的特点已骡运用染找Do刷返（试验设计摊币缸Ri锄果（风险评估巾烦和跪锣舌屯（过程分析晚技术窜描保项目评价方萍法脸早逻辑分析方膝法等定性或雅定量方法进乐行新产品设烟计开发。广本文既包括圈对悔佩QbD霸圈指导医疗器柏械研发管理毕的研究分析燕，也包括研辞发实践的伶经验总结。PAGEPAGE19过第二章吹轿充府教本文将稍染QbD堆罢的指导衡原故则与医疗器饥械产品的一亦般开发原则缴有机结合迟作并合理运用检到同POCT时外遥狗顺辉QbD幕吼原则指导产泥品的设计开捉发，有利于锁从宏观上幻腐把握产品的茂开发方向及诸开发内容，浆从而使产品枯的每一个模镜块处于合理宇的控制中。杜在止干QbD渠洪指导原则下垃，层析式总则胆固醇自测晶仪的设计包秋括检测原理才设计和仪器治设计两大冻落部分壤当同时每一部经分又可进一教步划分偿鸣在项目启动雹时牛遮以鱼骨图为袋例对产品的稀设计和疗址膀央人员塞酱登辆

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酶系统

睁餐腐

资图遮浴下桨产品设计和惨开发的鱼骨士图济毁隐拳耕栋是总胆固醇定通量分析方法魄概述午执.1查影酶法测定总路胆固醇缎人体中细2/3者胆固醇以酯麦的形式存在却，角1/3鱼以游离的形糟式存在，所呈以测定胆固荷醇的第膜帮一步是汽排胆固醇酯在誓胆固醇酯化倍酶刘(CE忆肢的作用下释元放出游离的镰胆固醇超诵这样才能测吊出甲总的胆固醇惠含量。游离逢的胆固醇在限胆固醇氧化犯酶（车CO拜）的作用下且生成过氧化站氢，生搂蕉成的过氧化候氢在过氧化捞氢酶滑(HRP)挣的作用下跟丹显色剂反应以生成有色物趴质，根据有米色物券祥质在特定波缘长的吸光度昨，计算血清钉中总胆固醇芽的浓度柄[23]爹，其反应过驶程用反应式扮见图需似跌凤愈币展抵巷牵降激致汽维熄轨旧销钟啊凳伍蚕晓咐见训确静ester岁纪骨希跃撑ester浪ase兔诸午咳定搏疫揭勒倦遗固桌+嫩轨fatty库狗奴Oxyge邮n渐晃酸矛然愚oxida骄se陡滑铃贤剑猴脖泡袖桌+允奴你恶石福恶斜侧键贷章械Colou煎r机低绵呜短+瓦辫较图教龙况房酶法测定总究胆固醇原理篇妄.2粒恼高效液相色愈谱法测定总巡胆固醇池血清样品用优氢氧化钾醇码溶液皂化，吴将其中的胆哲固醇提取到炕正己烷中并狭衍生为苯甲且烧酸酯强瑞以高效液相困色谱仪测定洗胆固醇的峰己面积侨朴由于不同浓勒度的标准或胃样品的内标贺量相等军允故胆固醇色息谱峰面积与择内标峰面积臂的比随胆固移醇浓度的增揭高而增高皆跑将样品的非峰面积比与及标准的峰面搁积比比较即旦得到样品胆体固醇浓度。恳由于使用了梅有效的色谱构分饱草顶欲惨推蚊博图肃泪旷陶局防伏倍绕躬.3膨桨化学显色法军测定总胆固五醇帮1企）益是尽末沈肠用以丙醇沉岩淀血清蛋白管质苍久提取上清死液捧中的胆固醇箭皂再用氧化铝骑吸附胆红素属企磷剥脂、甘油等技干扰物，离宽心后于上清抖液中加入高斑铁殊-糊硫酸试剂，锯反应产物显已紫红色，其色易切项丝胆固醇酯与蹄游离胆固醇纷在高铁反应侦显色程度一劈致，所以可因以免去胆固咳醇酯水解反盆孙且骂猎杨蔬枯叨2蹲）邻苯二甲舍醛显色法淘胆固醇及其冤酯在硫酸作程用下与邻苯首二甲醛产生并紫红色物质宪耐此物质在冠姥550nm都明波长匪处有最大吸燥收，可用比耐色法作总胆普固醇的定量述测定。胆固筒醇含量在菜笼400mg捞/dL确例内，与字丽值呈良好线缓性关系。缠眯喘朋愁瞎膜颠碰溶血者才使屈结果偏高竞芳本法在秧适20镜℃～统37讯℃条件下显前色落件显色后俱悟5卷分忠钟开始至半民小时以上建颜色基本稳羽定。温度过副低，显色剂鹿强度减弱；允加混合酸后届振摇过激能居使产热过高犹，朽液对谁缓吓盼定量分析方片法选择断血清胆固醇隙(CH显O惰疾)闯测疗定方法种类孝繁多领费化学方法大输都用有机溶逐剂提取血清算中的邻CH炕O曾皆兆用特殊试剂千显研色渗秋然后比色测铜定脱扛主要显色反山应有醒脊扭ie然b组糖rman鬼n着临绕u容r害泻h浇止r喇d(货配-纪再反应及高铁友-胡硫酸反应等冈两类。这些沙方法须用腐榴蚀性的浓酸歉试剂，特异梨性差，干扰畜因绕坛素多油夺准确测定修月赖于从血清笨中提取胆固驴醇己闪并对抽提液迈进行纯化东斜因此操作步瞎骤多，不斜适于常规应持用母贪美国疾病控宁制中心假(CDC讨驱脂类测定标眯准化实验室寺所审定的榆倚A计基蕉K歼鼻法，由于捎抽提液中基认本上不存在却梦访-霸B落爪反应的干扰饼物钉划结果准确宁甲为目前唱国世际上通用的情参考方法叫。此法虽然光不很复杂，鞠但也不易准姜确掌握。现谣在还有少数胜实验室应用插雹我炉试剂沾模宪统懂荒寺闯好高效液相色传谱法测定总尊胆固醇是中论华医学会检旱验学会血脂养测定推荐方盐法仓——锦血跪界凡开骂废书仙很麻尘POCT循的开发。刮酶法测定总雄胆固醇是中易华医学会检丈验学会血脂务测定推荐方错法司——缠血清总胆固等醇测跃伞谢陪备框塞硬上堤有利用迫请POCT岛产品的设计押和开发。因管此，总胆固寇醇自测仪采酬用酶法进行钉设计和开发弃。粉剂悔千宣萝仪器原理设部计柄总胆固醇自勿测仪应当可甜以把全血处宰理后得到血合浆。血浆中搏胆固醇酯经吧过胆固醇酯匆膛崭反应后游离肿出胆固醇升酒游离胆固醇另在胆固醇氧酸化酶作用下坛产生过氧化名氢造高过氧化氢薪应西烟与显色系统温产生显色反利应寿袋而且产生一拌定高度的显缠色色带泽回显色高度双——答总胆固醇壶浓听吧之间应有一扣定的数量关臣系及扭从而检测出够总胆固醇的消浓度萝仁而引且臂能达到一定徐准确射李晋道街检测系统设泡计姓总胆固醇自恒测仪应当至监少包括三个似部分：血液戏过滤系统、酿反应系统、溉载体容器。积瓜这三个部分描即独立又紧绒密结合昏块每个部分的康功能必须完衬全实现谨嫁才能保证总冬胆固醇自朴举盼涌.1责灯过滤系统设叔计淋过滤系统的征主要功能是邻将从血液中库分离出血浆遗，去除血细券胞等物质对龄检测的潜摧滨熄深第警圈四葬铅槐散所示是血榴缘液体积较小蹈时的结构，命一般适合滋观20桂μ沉L炼溉以下；图孙项讽歇所示是血液味体积较大时奏的结构，政筑一般适合味苏炒辛程宋絮最馋怒绩赶津换以按图钟涝倦婆用激光快速刘成型或惩田CNC桨匹手板制作少黑量的血液过肉滤板，以提衔高实验效率访和棍宪尽量保证过窃滤系统的一既致性。化图雪爬公柱过滤系统深备A稻图陈残蝴徒过滤系统融削B盘图具贝液知过滤系统航败C证追.2垫乓反应系统设呢计莫反应系统的姑功能主要是扭使血浆与酶磨进行反应产茎生过氧化氢鱼肯同时使过氧辽化氢被捕则蹄检互涨示事咱纱嘱奖陡鸡尽鬼以厚忽3雪部分。宅桐样品接收区乳和反应控制期区可能含有叼酶语亡显色区含有翅显色剂巨乡当血浆的体云积不足以虹极吸满所有洞试纸时织期还需要增加剑一个溶液区槽或者以外加紧的方式补充竖溶液确瓜结合以上功丰能的描述坚和现有的诊从断材料占劳产品选择用筝层析的方式拔实现众柳反应系统的县形式才如顽图蝇椅2催悟7舞所示。窄改.3吐肠载体容器设附计周载体容器的狠功能是容纳昌过滤系统和叛反应系统勒津为它们提供移支撑载体迎卫同时需要进锡行结构设鸦计，解决两纷个系统的结某合问题。载恒体容器的实巾现形式如图剂饰尊烫所示。尺图驳愉尝杜反应系统示蜓意图这图才透龙溉载体容器示炭意图猾益涨检测系统选侍材坟蠢熄乖蛮兔饭杠钞的选择匆鼓近年纸诊断交的技术得到铲了广泛的应扔用倚羞利用这些技晃术所开发砍的检层析诊断产侧品辆闻丧号覆州艰信谜隆的材料、生增产设备和生为产工艺技术旋，体外诊断掠（身IVD巴）生产商能侄生产出符合览严格性能阅窜叛休木但展狭帝斗.1绘柜过滤系统选岂材差过滤系统用免于过滤血液魂中的细胞等妇干扰物质，绑使检测反应颠顺利进行。导一般滴入过挠象雾衣吐岂枯侵磁栗度疲赤伟笋阔为保证得到厕足够血浆的躺同时使血浆总中含有尽可陕能少的血细罪胞，过滤系库统的表面可描耻脉累跳豆夕雾棵监舒第一层薄膜越相当于粗略紫过滤陷洪减少进入第熄二层薄膜的童红细胞和白寿细胞浓度握佣第二层薄供膜再次充分冻过滤细胞椅熄减少进入样巩品接收区的崇干扰物质赏市第一层薄膜情可以采用玻沃璃纤娱竭慈源奔凝爽暂插勺滤纸可以选奶择殿好W耽h括新tm序庄n鲜他吹欢A咏惹T亦艺C怠戒俭S料I围扩或斯者戴冰P近宾ll石魂公司的产品歪尤第二层薄膜归孔径在泻匠毛昼张卧虫躬昂升却喷逃.2搜振样品吸收区乳选材久样品吸收区再可以使用纤淡维层析纸、深玻璃纤维素驴、合成膜等三合适的材料任。样品接收杯蒙区的表面积喘范围为青爆5护－忧50mm雀2逐，厚度范围概为绣转金斥致级姑1怜－湾30怠μ代L嗓追的溶液。样北奴品接收区臣让载体上的其谊他定量部分挥一起控制进维入试纸系统箭反应的血浆耕量豆瑞进而控制反洗应中的胆蝇固醇量。面咸.3茶奉反应控制区惭和显色系统杂选材所反应控制区渔众显色系统的犯材质没有严签格要求催临应该根据纸挠条的吸水速招率和饱和吸础附量来选且择合适的材畅质，用反应廊时间来选择馋纸条的长度率。喊试纸的选材页如下表所列稠：施表怠膊窃站试纸系统选岛材表祥A描要求劫中狼弊核龙炕网格膜朽厂家躺材质砌型号钢孔径抚两疾活厚度奶萝新限贫恐烧胳泛无秘塑料网将尼龙庄－毯弊储勒坏妥废－疫粒亮慌聚酯填聚乙烯网厂家材质型号网厂家材质型号孔径厚度格 膜 －18013547灭菌法r射或相容R200150B要求纤维厂家材质滤纸的G型号孔径0.5－9厚度－重量渗透速率耐温（℃）－玻璃 2.7－－快－滤膜 1.0440－5002.7470120500C要求微厂家材质聚醚砜PS型号－孔径厚度重量（g/蛋白吸附力耐温（℃）优点孔素膜－0.45，膜0.65，1.2－－－－－尼龙－合膜－膜厂家材质聚酯膜厂家材质聚酯膜膜Cy型号e孔径1.01.0厚度2219重量（g/139121蛋白吸附力低低耐温（℃）150140优点不吸湿皮重低微孔膜膜1.0－低140热封（230－275）半透明皮重低膜表面光滑、平整乙烯0.65125－485水流速1.27－22－低140水流速D要求厂家材质型号－20chr厚度0.1－20.17重量）－－流速－28.3水吸附－特点－样品吸收1chr0.18－43.3表面滑分辨率用纸分离2chr0.18－38.3表面滑分辨率荐0.18－60硬化辨率好高强性能推用样品吸厂家材质样品吸厂家材质纸型号51B厚度0.17重量）87流速70水吸附－特点－收纸纸51A0.188775－－E要求0.1cm厂家材质料型号－厚度0.15－0.75重量－流速n）－特点－吸水3MM0.34－43.3中等湿强，适合普3chr0.36－43.3通常用于分离无机500.2514060－0.3218575－F要求0.1cm反应厂家材质型号－厚度0.15－0.75重量）－流速－水吸附）－特点－控制纸3MM0.3418543.3313chr0.36－43.3电泳纸PAGEPAGE30械反应控害制纸仆厂家棋材质榴型号底厚度示给便训重量垫还烧印）飞流速也饿影基汇庭水吸附麦桥月丢）尽特点惰增饮填凭敞萍滤纸何50趁0.25暴140济60哭－银－召瞒丝腥滤纸崭狂0.32盐185禽75台－剧－启G童要求盘诱吉停颂温记0.1cm造茅御简棉委显色纸武厂家卵材质肤型号污厚度捞玉拨叨重量耗漠添吴竭流速优使档端愚冻水吸附锻切钩乞赖客伟特点器辆屡起揭覆纸杠3MM添0.34府－嚷43.3州31准－领铃确纸兽31ET宫劣0.50颗192揭75难40论流速直拨别融吹民厚而表碑抓柔朵佣肾主要棕妨用叙交于肠稼大轮介分漠豆子电泳郊漆胃调委鹿纸堡51A执0.34残－奋75尼23港用坏仙于医凤电层锐泳旁鲜分幅缺离虽竹兔借侨幕526胶0.70宏325伞烈60珍－积第三章益稿婚哪壤总胆固醇自袋测仪的设计亮基本确定后多多实验开发正选式启动踪亩总胆固醇自密测仪项目是鸣一个进行泰欲POCT肿血相检测领题域的新尝试辛区新成立的项自目小组对血钳相检测经验决不足示铁因菌此，项目开讨发从溶液体呈系模拟检测挎切入，检测割对象依次设采定为过氧化岩氢哨——唇胆固醇灰—饥础胆固醇酯茂——趟动物血清恐——煤人血清的过护程蛋梅溶液体系模肥拟检测参考盒目前已非常彻成诸腹炉抱溉岗电束使和苯酚作用炮显色体系。迁泰当溶液体系上模拟检测达掀到要求的准荐确度和精密喷度后森舞开发可以转含入层唇析煮检测阶段吹塌以下是溶勒液体系模拟救检测和层析抓检测中车间4窝个阶段的举骗例。复童仔蹄霉兆怎化过氧化氢的价测定虹残绞醋仪器写除捐艺劳罩碍逃校篇灿例舍葬妈圆锅。始耕李孔试剂债试剂应严A猴煮0.05m句ol/L负缓pH7.0吴羡乞任让弃两2L系61.5种m忍L摇踏1mol混/干L忆令K泳2泽HPO召4仇穿溶液与使借38.5丛m势L盯牛1蠢mol悠/永L贪缸K速竖2紧P技必4按昼溶液混合成努用蒸馏水稀蝶释至班遗梳浮表忠泻鞋蠢试剂渴培A宋每成分表针成分扫用量说溶液余翻A献尿各组分浓度敞4擦－氨基－安遇替比林恋28.45筐mg领1.4mm元ol/L圈苯酚牺65.88季mg挑7mmol叼/L馋试剂六瞧B殖咐显色剂断100挡m笋L业皱苯酚脑悉4虑伟氨基义牛安成替比林溶液云配制如下表皂怪称量后溶于设问KPB哨穷溶液手军由于溶液朗A晚毯中含有苯酚芳仆苯酚易氧化届成粉红色的躬醌类化合物窑朋对测定有一并定的干扰篇课所以甩拜A怒淡应现用现配。路溶液杆苏C饼食HRP帽咱溶液对量取上述溶胶液世缺A5深蒸m声贩，加光练HRP六嘉300U不（岭300U/既岁175U/歇m尼菊=千蚂1.71渗m获表醋，彼HRP颜刃酶活浓厦僚颠/称mL饼肠。妻溶液认笑D扎酬丸问切壤冶市售的果仅无2邀毕2骆是茶耕30驰梁（题V/脑词鸭的水溶液促咽其摩尔浓度眯为且锅8.8m宗ol/梨横番晕本实验将叮竖30%健的始寇哭鞋辫懂叔稀释惊惧1000育锄郑蠢则0.03%捧劲腐场亿处狭赠咳狼/蔬足矿逢它掌居mL棵宫。绘将过氧化氢啊溶液稀释成县急域叶离府司哑艘松友为婚膛昌出差僚翁傻神馆尤干兵侦立顶许盗实验方法醋取溶液惜能C帅既4.0mL化驶于毙敬5mL耽头离心管中，取37办℃保温篮兴3min底；加入戏日40杰μ文L岂样本，吼37酿℃反应笼10min监，作为测定缓液，在席线500nm匙谅处测定吸光圈度。红表悲汇照傍显色反应操季作表驰加入物辞空白管（校采零）佳测定管陈溶液罚罪C丘4.0mL末4.0mL井样本都蒸馏水脱40μL强溶液款秒D瘦甚40μL遗扭内芦结果振窃狼数据表梦见表测绪英撕腊君童标准曲线图众见图陕里剖桨受.5封灵讨论斤回归方程为库拦Y=0.1上772x欢－狗0.002螺3映，线性相关芳系数狡勒r=伶辱0.999诱2珠，且重现性唤良好。醉表兄李倡郑试验数据表轿样品序号表职若乖奇竖爸艘躺空白模0姻0么1谎丝0.077佣2柱0.022送0.142来3稼0.033熄0.207敬4宣0.044重0.265拿5畅0.055唉0.326野6介0.066嘱0.378帐7平0.077渔0.432桐8弟0.088弓墨9偷0.099痕0.577范10波0.109氧0.638扑劈0.120热0.679厨过氧化氢含轨量测定标准驱工作曲线过氧化氢浓度（μ过氧化氢浓度（μmol/ml）

0.011

0.0330.022

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0.0770.066

0.0990.088

0.1200.10900牺0央醒剪编膊筋骗冰去妹航颠泉料湿扶唯吸光度（刷OD愿)率图张半临姓过氧化氢含毯量测定标准窝工作曲线坡昼嫌胆固醇的测悲定宜遭起铜仪器著紫外分光光喝度计、吵1mL绪衡移液管、讯5mL另览移液管、痒5mL捞上离心管、然200直μ左L级蝶微量注射器阁、舅100mL谊净烧杯、庄100mL浅闹容量瓶、庸500mL伸部广口瓶。阀拿价衰试剂也试剂霸梢A旱湾0.05m愁ol/L们絮PH7.0泄共荐拉敲典半2L筹61.5跟m追L罢场1mol贵/金L庆唯K伐2滥HPO凭4除窗溶液与店考38.5纷m涉L庄脖1知mol扶/蜜L谦安K挤卷2销P朝幼4已问溶液纵世合症惜用蒸馏水稀悔释至巨绪设欧试剂苗纳B惜仓胆固醇溶解止介质搞含忘精175mg哀/mL晶旺浑偶议X已－忧100逢、炭50%即异丙醇的磷臂酸钾缓冲液械作为胆固醇阅溶解介质较挣晓理想。拐试剂锻弦C哨油胆固醇溶液凝称取胆固醇卖细粉，加入姐球4mL茄拉胆固醇溶解示介质，超声刺至胆固醇溶校解。静表描叠庙最胆固醇溶液期配制表心溶液编号雪陆砌直傅豆觉货顽1箱200愈8订2比225俱9歇3株250捉10作4舰275正11足5品300鄙12吼6吐325纤13残试剂奶亭D付阁胆固醇氧化膛酶液（筹C也咸白，酶活浓度袄：却10U/蓬mL妄精密称取壤版48mg我铃闸绑骑比活粘堪哥造灵伐100mL束烧必势亲KPB争淋溶解并稀蜘荡释至刻度。栋溶液斥摊E缝基过氧化氢酶艘溶液油表王心裕接过氧化氢酶兽溶液配制表哲名称老终浓度灾称取量捕4炕－氨基－安屠替比林垦1.4mm翻ol/L碌85.35跑mg印苯酚慕7mmol掀/L国197.6侨4mg脏辣根过氧化步物酶（纤HRP碌）寿6U/mL上10.2淹mg鼓驴摆僚接贿跟2mg/m恩L晨600m贝g呈用咱贺KPB尾严稀释至总体扰积病瓦300mL咱蝇.3梦删实验方法叛演猪授跨两人分别进航行以下实验斤：途按表叼辨多矮伙五映要HRP佩足玻斑尖膀蹈心管中加入向绞HRP集惹溶液、态KPB奉，混合均匀终。在样品离零心管、样品唱空白离心管缝中加入相祝捡应的胆固醇杂溶液，合盖怒，振荡均匀乌，室温反应唇摄10min鹅，在波长圣侍500nm加排处测量吸光扎度。肆表懂残糠跳反应操作表搁名称剖KPB阿胆固醇溶液浅CO滋倦溶液务HRP钩色溶液娃样品荡/秧40μL亡1.0mL按3.0mL镜空白低1.0mL妥40μL既/惕3.0mL损依.4式主结果佳1挺）弹茅计算方法能厕宝父颠政耳亮歪距份乳稍简纽烈齿逼点控顷微洽艺受屋救甩尊涂旅搏涌肃标榆们仗豪拜半讲搭2）结果撕打锦喊数据表仰表冻涛狗湖胆固醇检测颗数据表谎挑雁命理论拦（漠mg/dL薄）链霜舰搬贝帐绿义授钓回剖检测修粮励拒检测透未（辅泥）牌平均检测行率历石遍领200将0.312括0.053爹0屡206.9砖5浇103%睬108%搬0.337倒0.057示4巧224.2蚕5捏112%煤225桶0.350议0.059锻7拣233.2浮5通104%点103%蜓0.344欣0.058辞7勒229.0淋9闷102%加250销0.397僵0.068兆0毙265.7棋7泛106%困97%般0.331交0.056原4渴220.1附0税88%斧275焰0.428谣0.073置5香287.2浆3敏104%弯101%盯0.400池0.068跃6贤267.8谎5每97%笨300淋0.438偶0.075打3吵294.1迁5婚98%欠98%韵0.441棍0.075流8灶296.2竖3烟99%丙325直0.486非0.083膊8榆327.3哪7叹101%潜98%大0.464必0.079活9蚕312.1阵4虑96%嫌村亿扰检测结果对驻比图服蛋见图烤匪亚痛阶.5练鸭讨论梯平均检测率啄波动范围为咐教链惕黎蔬宾校萌录屈欠较理想。车图时太欺咸胆固醇检测耗结果对比图树类锦猪血清总胆浊固醇测定范文校屿仪器造紫外分光光洪度计、率1mL淡伞移液管、拜10mL肚愤试管、葡200缠μ拴L扒戒微量注射器自、办200mL块熔烧杯、置100mL驼贱容量瓶、价500mL捷嘱广口瓶。纠告.2苍弹试剂润试剂先侮A繁骡0.05m冒ol/L朝屯PH7.0谋程煌好临锁宅2L茂61.5享m昨L三赛1mol惨/普L千问K劈2被HPO心4嘱移溶液与宗继38.5使m座L纱闪1告mol蕉/瞒L歉忌K奇俊2隔P腥誉4讲缎溶液瓣劣合惠幕用蒸馏水稀寄释至屠漫排攀试剂勺候B程今生理盐水院配制源退0.9少％氯化钠溶山液。朵试剂春总C嫁愿猪血清绒到屠宰场取咸新鲜猪血忌炕加入肝素抗惨凝卫锯取偏投4mL妄漂猪血放入离米心机中可括3布000r念改m版离心宋进倘必试剂皱歉D害签阀江胞隆欣爹基陪称取授你9.6mg菌CO鲜，溶解于冒神10mL零比磷酸钾缓冲散液中，腰CO午角浓度为裂挂愚献伸槽试剂券笑E疲征过氧化物酶冻溶液勾表宾稠端责过氧化氢酶小溶液配制表友名称棚终浓度逃称取量塞4蛙－氨基－安教替比林鸽1.4m承mol/L穴56.9m背g蚀苯酚速7mmol条/L邮131.7阴6mg夸辣根过氧化糖物酶（剑HRP鸟）缓6U/mL报6.8m椒g戏播皆娇汪财展2mg/m衫L咽400m刮g姨用吉拳KPB童稀稀释至总体矛积电痰200mL衬试剂垄固F铃孔胆固醇酯酶接溶液琴版粘揉失间施佩称取已叨2.35m缺gCE艘，加械之20mL宜常磷酸钾缓冲研液溶解，得加子20U/m怎L泳倚的停穴CE愤吹溶液。逃蔑.3循妇实验方法坐甲乙两人分炕别进行以下回实验，每人你做两组平行米实验：作按下表在各伞样品管中加左入压毙HRP航温溶液、志CO小鸦柳需茂溶液，在各林样品空白管桌中加团避入原融HRP业遗溶液、继KPB欲，混合均匀昂。在样品离贫心管、样品艇空白离心管注中加入相应内体积的伞冒血清和生理抹盐水，合盖顾，振荡均匀溪，室温反应愤驼10min谣，在波长奇捎500nm碍钟处测量吸光问度。溜表戚选跃芝反应操作表币名称弃KPB出CE够谎溶液暖CO客拆溶液伤猪血清＋生蜡理盐水昌HRP脸健溶液缎样品驼/号0.6mL档0.2mL衔0.2mL栏3.0mL神空白倾1.0mL雹/妨/遇0.2mL盗3.0mL蓬表龟奏叮剑猪血清与生径理盐水配比瓦表陷样品编号恋瓶灿品杨抚烈1稻40剧160候2早60垂140沟3搅80软120工4闹100早100丝5忆120胸80族6猎140端60箩7抚160煌40爷8贿180衣20渔9序200盒0汗锅.4晋幕结果滩1剧）哄农计算方法牛嫩归蹦蝶赠旬精都污穴芳日烘反扫凉勿每狼泽唱2）结果愈A.钢紫数据表盈见表丹永遥男仇斯碗骑检测曲线图月见图励巡溉似C.寿分总胆固醇浓蒜度折算表柜见表缝令婆PAGEPAGE39胸表润见油过猪血清胆固桂醇检测率数失据粱编柄 茄组绒 拖加入量栏 域 瓜核向致栋尼禾诱爪专平均闷爽暮框号刷别歇牲尚军如旁槐钩岭顾均瓦监卸窗当捉围A牺40恐 惊0.1农09裤 船0.017删0斤0.017秩0址0.026冈3略B分40狼 宿0.2崭18陶 时0.036止3牛0.036克3过0.056伸2或1斥0.032率4怕C凡40贸 晒0.0手94蒜 搜0.014器4与0.014角4甲0.022等2超D友40剥 比0.1简04丈 乔0.016伟1塘0.016造1艳0.024赵9雅A敌60织 源0.2肠51按 怎0.042形2胶0.042活2烈0.065始2主B挺60以 切0.1化88固 移0.031瑞0价0.031坟0球0.048福0绒2汇0.050千4嘴C哗60填 枝0.1投76撞 乒0.028勇9述0.028轧9粪0.044呀7棒D祝60宪 怠0.1魄73业 恩0.028列4甩0.028巩4中0.043络9粮A厕80闸 顺0.2文28窑 攀0.038胸1朋0.038如1旗0.058显9描B帮80睛 吗0.2头14擦 等0.035朱6愁0.035罢6哪0.055壶1验3超0.060透7卡C辩80旦 哗0.2校57焦 搁0.043蜂2屠0.043办2唇0.066啊9叮D脏80访 格0.2感39贿 央0.040京1馆0.040穗1斯0.062资0驳A艰100查 司0.2袜71榴 磁0.045及7劫0.045之7起0.070桑7寺B仰100轿 沾0.2理78稀 统0.047楚0护0.047退0庭0.072慎6沸4羊0.075告2刻C落100惭 左0.3谈02陈 富0.051奇2青0.051超2哲0.079肥2迈D换100漂 寒0.2勉98射 缝0.050搬5缸0.050蹈5才0.078括1承A却120稿 磁0.3习26演 弄0.055失5章0.055敢5烈0.085哀8近B猎120范 挣0.3隙54装 竟0.060傲4繁0.060冒4割0.093剧5乘5公0.092粉5特C异120渐 确0.3果68液 翁0.062墙9嗓0.062孟9真0.097帅3绘D焦120刮 货0.3纷54奇 抵0.060炊4换0.060注4营0.093解5吩A总140致 宰0.3秘75考 男0.064珍2优0.064赴2苏0.099抬2丸B膝140贿 举0.3缘91嫌 们0.067庭0竹0.067族0尝0.103彻6宁6妥0.109爷2奖C疾140枝 余0.4趣41丹 意0.075日8互0.075男8酷0.117抓3庄D毕140砌 随0.4锁39轨 分0.075券5第0.075想5紫0.116彼8（续上表）姿编写 转组圆 磨加入量返 刷 地剂用踢仇枝启顾稿危平均迟膏固猎号瓜别楼尸条法岭熟弦抽穿鼠跑令搏图嫁骗瑞晴A则160阶 涉0.4寇48错 止0.077圣1属0.077赌1易0.119含2拼B滴160曲 牲0.4测43叶 排0.076增2相0.076雪2捐0.117滨9锄7耕0.128咸7她C碎160哗 貌0.5食18木 胞0.089添5洒0.089疫5伍0.138蜜4糕D仰160剧 壁0.5挎21挠 达0.090庭0各0.090乌0谨0.139限2泼A寿180抹 揪0.6奋01徐 悼0.104松2览0.104浴2腊0.161捧2顶B缓180叛 膨0.5沾65航 戴0.097建8养0.097巾8屋0.151鸟3历8受0.145评1玻C狠180丰 购0.4南89热 鬼0.084厅4许0.084薄4爷0.130傍5揭D盾180柴 嫌0.5富14嫂 际0.088独8造0.088觉8习0.137破3扒A煤200乡 说0.6亦39越 剧0.110催9制0.110仇9辨0.171汤6饿B者200浩 蝶0.6涌35娃 阀0.110渔2筒0.110哭2俭0.170搞5泳9速0.160丰1邮C裤200胡 产0.6指09士 搂0.105然6哗0.105蚁6盏0.163继4尾D芝200唐 弦0.5雹05借 偷0.087炊2烛0.087院2用0.134类9调猪血清胆固拣醇检测曲线200180反应液中胆固醇体积（u反应液中胆固醇体积（ul）14012010080604020

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盛悼森竭平均

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转图终电延冈人血清总胆成固醇检测比耗对图防乔.5隐窝讨论俗本次实验人勤血清样本为变当天测量糊扛以附二帜院猜自动生化仪储检测结果为举基准点即实验室之总胆固醇检各测企普值着捎与炒嘴附二份裙院栏韵自怠纽动什示生通苏化踢封仪堤此检裹袖测的前依相腹滥关午廉系秃见数么举为移阅委疼绕，回归方程爱为宿棉球律醒江蚊假册已同时恒捆经过长期的劲溶液体系模悦拟检测实验却尊项目小组已阳有一定的酶厘反应和显色僻反应基础成，可以着手馒进行总胆固礼醇层析检测禽的开发。努僵其恳环母懒券反应系统的啊定型贷幻凑治试纸组装形恐式苗根据试纸的响属性和实验裙筛选结果，晌试纸选用崇whatm斥an木的色谱纸，苹使用灵敏度撒高、共随俩桶座抽蝴1徒）肚肉桥接法（水豆平法）操作过程：租①往方格槽载孔内各加想5mL碑泻试剂滥CHRP禾酶液；壁②将作为桥节接的滤纸波B筋折弯剩箱一端点上栗5狮μ袭育过杜氧化氢溶液悉尚与显色滤纸糟富重叠接触；酿③另一端与绪试剂悬C吼接触，酶液丽开始向上渗瓶透。训尘孟锤水平显色示涛意图粪2花）诞泡悬挂法（垂汉直法）刺穴蚀A汤法的操作过恋程：条①试管内加添1mL薪光试剂她C虽牧HRP剧酶液；穴②往傻HRP拒酶液内滴加南过氧化氢液刺，摇匀；宋③将显色滤初纸带底部边圾缘与框HRP魄酶液接触，训酶液开始向字上渗透。营智乒透B旨法的操作过我程：凉①试管内加艘1mL慈颂试剂冲C压岸HRP仪酶液；嫁②另取一段播相同宽度的借滤纸上部一很端滴加过氧搜化氢液，上零部与显色带醒滤纸钩住；陆攻意探史铃师金错摄垂直显色示群意图国A棚淋李暮御垂直显色示征意图贵B坝火3血）结果记录蝇责蛮水平法测试向结果涉谢阻辛水平法测试砍结果表显色情况显色情况纸5μL1.13.35.5试纸条上有呈现蓝紫色显色产物的显色反应蓝紫色显色区域随着渗透液的向前移动而移动蓝紫色显色区域总是5μL1.13.3存在于渗透液的前沿。5.5算穗且芳占听聋模垂直法测试驱结果表冶方法视事总焰植煮凳辅路京隐颠显色情况仁图蚁1鼓法嘉5笼μL劲宿哄紫际盏前应/L毕不加至偷2采m柏豆酶液中饺夏最域终蚀浓度：抚2.74钓μmol垂/L阻滤纸条上有半呈现隐约可晃见蓝紫色巨显色带恰3.3mm铃ol/L结加至滴1她m关毫酶液中短或最典终颠浓度：穴16.42趋μmol禁/L奶滤纸条上有刻呈现淡蓝紫黎色显色带选图帽2泉法装5杠μL主2.2mm侮ol/缠都mL酿蓝紫色显色爱区域随着渗运透液的向钢前移动而移甲动咳盛蓝紫色显色到区域总是弱存在于渗透朵液的前沿。苗4.4mm控ol/呢泳mL制蓝紫色显色卖区域随着渗祝透液的摩向前移动而河移动羽藏蓝紫色显色乘区域总是村存在于渗透岭液的前沿。茫两种显色方坚法比较荡奶水平法比垂滥直法更科学搁泛水平法能够寻消除渗透液苹的重力作用陶。定土玉歇冠绑仍吗惠烦贝算瓦逮理妹六姐抗乌户盟还壶耍却右瞒概馋完全进行芝愈故滤纸上出满现了条状的痕蓝紫色显色皱带龙污最终结果只鲁能从显色带供的深浅来判惜别过氧化矮氢的浓度高愉低穷莫不能从显色蓬带的高度上酷判别过氧化殃氢的浓类正（显色带的斑高度眠宝史克油勿PAGEPAGE50右造喊炸显色试纸的处制备怠经过数据库侦检索和实验蚁筛选，苯胺药类俘-MBTH滑以联合对色谱座纸进行显色还剂共价固定墓示的效果理想艘，以下为固棒定过程。惕1糟仇）苯胺类的界固定犁将活化的色顷谱纸剪成赞败28盒姑m医窑7缝碍m胜大小骨梢再将筛网剪挥成同样大小鬼欧把色谱纸和瞒筛网一端强对齐，两者列卷成筒状，跪放入闲瞒50mL蚊采的圆