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文档简介
基因工程的工具1、化学“剪刀”:2、化学“浆糊”:3、分子“运输车”:2021/10/101作用:特点:切割DNA分子强专一性1、化学“剪刀”——
限制性核酸内切酶(简称:限制酶)2021/10/102CTTCATGAATTCCCTAAGAAGTACTTAAGGGATTGGCATCTTAAAATTCCGTAGCTTCATGAATTCCCTAAGAAGTACTTAAGGGATTGGCATCTTAAAATTCCGTAG
例:EcoRI:
识别序列是GAATTC,切割位点是G和A之间2021/10/103参见课本P57第3段
2、分子“运输车”——作用:将外源基因送入受体细胞运载体(常见:质粒)(拟核)质粒我问你答:1、质粒是从什么生物中发现的?2、质粒的成分是什么?它是什么形状的?3、质粒进入其他生物细胞后,是否会被该生物消灭?它如何继续存在?细菌DNA环状不会自主复制,或整合到该生物的染色体上。2021/10/104抗生素抗性基因2、分子“运输车”——运载体(常见:质粒)(拟核)质粒如,抗青霉素基因用于筛选含目的基因的受体细胞2021/10/1051、本质:质粒2、形状:3、特点:DNA小环状①能“友好”地“借居”②能自主复制①独立存在4、在受体细胞内如何存在:②插入到受体细胞的染色体中③含有作为标记的基因2021/10/106CTTCAT
CGTAAGAAGTAGCATT质粒的一段
GAATTCCTTAAGEcoRI:
G`AATTC切开的质粒与目的基因为什么可以实现完美对接?
重组质粒/重组DNA质粒是怎样运载目的基因的?
因为他们是由同一种限制酶剪开的,有相同的粘性末端(即,一段单链DNA)。2021/10/1073.化学“浆糊”—作用:连接目的基因和质粒
(磷酸与脱氧核糖之间的化学键)DNA连接酶
2021/10/108基因工程的工具总结:
限制性核酸内切酶(简称:限制酶)1化学“剪刀”:2、分子“运输车”:3、化学“浆糊”:DNA连接酶
运载体(常见:质粒)作用:切割目的基因和质粒作用:连接目的基因和质粒作用:将外源基因送入受体细胞(磷酸与脱氧核糖之间的化学键)(磷酸与脱氧核糖之间的化学键)2021/10/109目的基因4、筛选含目的基因的受体细胞3、重组DNA导入受体细胞(接纳目的基因的细胞)三、基因工程的基本步骤:1、获取目的基因(人们所需要的基因)2、目的基因与运载体重组,(获得重组DNA或重组质粒)此酶与剪切目的基因的限制酶是同一种获取方法见P59第1段(如,细菌)“基因表达”:DNA→RNA→蛋白质(性状)2021/10/1010?目的基因4、筛选含目的基因的受体细胞3、重组DNA导入受体细胞三、基因工程的基本步骤:1、获取目的基因2、目的基因与运载体重组,(获得重组DNA或重组质粒)重组质粒DNA连接酶
?酶
???质粒导入筛选“基因表达”:DNA→RNA→蛋白质(性状)2021/10/10112021/10/1012筛选究竟是如何进行的?2021/10/1013抗四环素基因(标记基因)目的基因(如,人的生长激素基因)假如受体细胞是酵母菌,如何鉴别重组质粒是否已经进入了酵母菌?在培养液中加入四环素,如果。。。。。。如果能活下来,说明质粒已进入酵母菌,目的基因也随之进入了酵母菌;反之,……2021/10/1014假如目的基因是抗虫基因,受体细胞是棉花细胞,如何鉴别重组质粒是否进入了棉花细胞?看棉花植株是否具有抗虫性状。筛选依据:①或②①具有标记基因所控制的性状;②具有目的基因所控制的性状。如果能抗虫,说明目的基因已进入棉花细胞;反之,…2021/10/1015课堂练习:1、质粒是广泛分布在细菌中的()A.线状双链DNAB.线状单链DNA
C.环
状双链DNA
D.环状单链DNAC2021/10/10162、基因工程中构建重组DNA需要的工具是()A.蛋白酶B.限制酶C.DNA连接酶D.限制酶和DNA连接酶
D2021/10/10173、基因工程一般包括四个步骤,其正确顺序是()①目的基因与运载体重组②获取目的基因③筛选含目的基因的受体细胞④重组DNA分子导入受体细胞①②③④B.③①②④C.③②①④D.②①④③D2021/10/1018
下列黏性末端是用同种限制酶切割而成的是()
A.①②B.①③
C.①④D.②③B即时练习:2021/10/1019质粒是基因工程中常用的运载工具,某质粒上有两种抗药基因可作为标记基因,a、b、c为三个可能出现的目的基因插入点,如图所示。如果用一种限制酶将目的基因和质粒处理后,再合成重组质粒。将重组质粒导入某高等植物受体细胞后,用含有药物的培养基筛选受体细胞,预计结果如表所示
(1)如果出现①结果,说明目的基因可能接在
。(2)如果出现②结果,说明目的基因接在
。(3)如果出现③结果,说明目的基因接在
。C点a点b点2021/10/1020小结基因工程基本步骤操作工具目的基因与运载体重组筛选含有目的基因的受体细胞重组DNA导入受体细胞获取目的基因
限制性核酸内切酶(简称:限制酶)1、化学“剪刀”:2、分子运输车:质粒3、化学“浆糊”:DNA连接酶作用:切割目的基因和质粒作用:连接目的基因和质粒(磷酸二酯键)(磷酸二酯键)2021/10/1021课本P92第一段单个细胞或单一组织细胞经分裂分化后仍具有形成完整生物体的潜能。1.细胞的全能性:2021/10/1022胡萝卜的根韧皮部细胞离体组织或细胞再分化
过程:脱分化愈伤组织芽、根等(完整植株)3、条件:①无菌②控制温度、PH、光照③培养基含:糖类、无机盐、维生素、植物激素等(生长素、细胞分裂素)2.植物组织培养的过程:无固定形态、没有分化的一团细胞这种繁殖后代的生殖方式的属于——无性生殖2021/10/1023切取接种愈伤组织的形成分化形成小芽或根试管苗的形成移栽2021/10/10243、植物组织培养的理论基础:植物细胞具有全能性。2021/10/10254、植物组织培养的实践应用①培育无病毒植株2021/10/10264、植物组织培养的实践应用②植物快速繁殖2021/10/10274、植物组织培养技术的实践应用②植物快速繁殖①培育无病毒植株⑤制作人工种子(人工种皮+胚状体)③提取原料(药物、食品添加剂、香料、色素、杀虫剂)④用于转基因植物的培养
在外源基因成功转入植物细胞之后的培育,需要此技术。2021/10/1028下图是有关生物细胞生活史的概括。请据图分析回答问题:(1)①②所示的变化,在生物学上称为______③所示的变化,称为___,(2)F→G→H过程的技术,在植物学上叫_____,其理论基础是__________(3)所示过程分别叫________、______。
细胞分裂细胞分化
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