鱼类生理学实验2

（优选）鱼类生理学实验现在是1页\一共有48页\编辑于星期日实验一

鱼类生理学实验常用仪器

实验基本操作技术

现在是2页\一共有48页\编辑于星期日一、鱼类生理学实验的地位本课程共20学时，属专业基础课程成绩计算：报告90%，考勤10%二、鱼类生理学实验方法现在是3页\一共有48页\编辑于星期日三、鱼类生理学实验目的1.掌握基本实验方法；2.掌握主要仪器的操作方法；3.掌握生理实验基本技能；4.独立分析实验结果、写出规范的实验报告。现在是4页\一共有48页\编辑于星期日四、鱼类生理学实验要求1.实验前：教师和学生均做好实验准备工作。2.实验中：教师简要讲解实验原理、关键步骤、实验要求等。学生领取器材，归还时复核，损坏登记，丢失赔偿。3.实验后：归还实验用品，动物尸体按指定位置放置，轮流打扫清洁卫生；转录、整理实验结果，及时上交实验报告。现在是5页\一共有48页\编辑于星期日五、常用生理仪器的使用（一）刺激系统1.刺激器2.刺激电极（1）普通电极（2）保护电极（3）Zn-Cu弓（二）引导、换能系统1.压力换能器2.张力换能器现在是6页\一共有48页\编辑于星期日（三）放大系统（信号调节）放大器：可将生物电信号放大数千倍（四）显示、记录系统1.记纹鼓2.生理记录仪常用有二道、四道及八道仪等3.计算机生物信号采集处理系统现在是7页\一共有48页\编辑于星期日六、鱼类生理实验基本操作技术（一）手术器械1.刀：手术刀（指压式、执笔式、反挑式）2.剪：外科剪、眼科剪3.镊：外科镊、眼科镊4.钳：止血钳5.其他：探针、玻璃分针、蛙板、锌铜弓、蛙心夹等（二）实验动物选择健康动物现在是8页\一共有48页\编辑于星期日七、鱼类麻醉剂麻醉剂能够降低鱼体新陈代谢，减少对鱼体的伤害，提高存活率。（一）麻醉剂的作用原理麻醉剂首先抑制脑的皮质（触觉丧失期），再作用于基底神经节与小脑（兴奋期），最后作用于脊髓（麻醉期）。过大剂量或过长的接触可深及髓质，使呼吸与血管舒缩中枢麻痹，最终导致死亡。现在是9页\一共有48页\编辑于星期日（二）鱼类麻醉过程的行为特征表1麻醉程度分期及鱼类的行为表现注：“±”-正常；“＋”-略失；“－”-丧失。行为表现分期视觉触觉重压肌张力平衡感鳃盖频率备注第Ⅰ期（轻度镇静期）±±＋＋＋正常第Ⅱ期（深度镇静期）－－＋＋＋略减少用于一般运输第Ⅲ期（平衡失调期）－－＋＋－增加第Ⅳ期（麻醉期）－－＋－－增加或减少最佳操作时期第Ⅴ期（深度麻醉期）－－－－－慢立即进行复苏第Ⅵ期（延髓麻醉期）－－－－－停止无法恢复，死亡现在是10页\一共有48页\编辑于星期日表2复苏过程分期及鱼类的行为表现复苏过程行为表现第Ⅰ期身体静止，呼吸恢复，鳃盖开始振动第Ⅱ期部分平衡及运动恢复第Ⅲ期平衡完全恢复，对外界反应恢复第Ⅳ行为完全恢复正常现在是11页\一共有48页\编辑于星期日1.MS-222（间氨基苯甲酸乙酯甲烷磺酸盐）MS-222易处理、效力迅速、安全性高，被美国国家食品及药物管理局（FDA）批准为渔用麻醉剂。MS-222可采取浸泡、喷雾和注射等方法使用。MS-222主要在脾脏、肝脏中积聚，过高浓度会引起死亡。MS-222适宜活鱼运输，将鱼放在清水中仅1min就能苏醒，但FDA要求经MS-222麻醉的鱼，食用必须经过21d的休药期才可销售；另外，由于其价格昂贵限制了它的应用。现在是12页\一共有48页\编辑于星期日2.丁香酚（2-甲氧-4丙烯基酚）全麻剂，是一种植物香料，丁香酚及其代谢物能够快速从血液和组织中排出，不会诱发机体产生有毒和突变物质，在医学上作为牙科镇痛剂被广泛应用。丁香酚无残留期，是合法的水产麻醉剂，能同时满足安全性、高效性和低成本的要求，已广泛应用于亲鱼采卵、活鱼运输以及手术中，对鲤鱼、真鲷、鳗鱼等有强烈的麻醉作用。与MS-222相比，丁香酚毒性更小，无残留，但它的入麻时间与复苏时间比MS-222更长。现在是13页\一共有48页\编辑于星期日3.C02C02是唯一被允许用来运输食用鱼的化学麻醉剂。用C02麻醉鱼，没有药物消退期，食用鱼可直接上市销售，但其麻醉时间和复苏时间相对较长，麻醉水溶液使用的浓度范围很窄，且只对部分鱼有麻醉作用，因而应用范围受到限制。如用C02辅助运输鲤成鱼，须分别用高分压（27.33KPa）和低分压（13.17KPa）的C02气流交替刺激鲤成鱼，经15～30min后鱼即进入昏眠状态，运输时间可维持1h左右，且死亡率很低。现在是14页\一共有48页\编辑于星期日也可用C02和02（50：50）的混合气体辅助运输活鱼。直接往装有鲫鱼和鲤鱼的水体中注入气体，使鱼在水中的行为逐渐迟钝。约25min后，鱼便沉到水底“睡眠”，此时可将鱼从水中捞出进行运输，持续时间可超过30h。当鱼运到目的地后，再将它们放入水中并注入02，5min后即可苏醒。现在是15页\一共有48页\编辑于星期日实验二计算机生物信号采集处理系统

一、系统组成与工作原理PCLAB-UE由硬件和软件两部分构成，硬件主要完成对各种生物电信号与非电生物信号进行调理、放大，并对信号进行模/数（A/D）转换，使之进入计算机。软件主要对已经数字化了的生物信号进行显示、记录、存储、处理及打印输出，同时对系统各部分进行控制，与操作者进行人机对话。现在是16页\一共有48页\编辑于星期日二、主界面

从上到下依次分为：标题栏、菜单栏、工具栏、状态提示栏及采样窗、控制面板和数据窗等其他多个相应的子窗口组成。现在是17页\一共有48页\编辑于星期日三、使用方法1.设置：标准配置，恢复出厂时的配置2.新建：实验项目→填写信息→实验窗口→开始实验3.采样：记录实验数据4.控制面板参数调节（1）通道功能调节（2）刺激参数调节5.文件存储：F：/文件名：09水养3-呼吸（左2）6.编辑：打开原文件→选择→复制→打开“工具”下的“画图”→处理文件→复制图片→存盘到F：/现在是18页\一共有48页\编辑于星期日实验三影响血液凝固的因素红细胞脆性的测定血红蛋白的测定现在是19页\一共有48页\编辑于星期日影响血液凝固的因素

1实验目的以凝血时间为指标，了解影响凝血的因素，加深对生理止血过程的理解。2实验原理血液凝固是一个酶解激活过程，有多种凝血因子参与。根据凝血过程起动时凝血因子来源不同，可将凝血分为内源性激活途径和外源性激活途径。现在是20页\一共有48页\编辑于星期日表1血液凝固及其影响因素试管号实验处理凝血时间（秒）1空白2液体石蜡2滴3棉花少许4冰水环境5肝素4滴6草酸钾4滴7肺组织浸液4滴5号管加CaCl24滴6号管加CaCl24滴现在是21页\一共有48页\编辑于星期日【注意事项】l.采血过程要尽量快，以减少计时误差，对比实验的采血时间要紧接着进行。2.每支试管口径大小及采血量要相对一致，不可相差太大。3.判断凝血的标准要一致，一般以倾斜试管达45°时试管内血液不见流动为准。现在是22页\一共有48页\编辑于星期日红细胞脆性的测定1.实验目的学习测定红细胞渗透脆性的方法，理解细胞外液渗透张力对维持细胞正常形态与功能的重要性。2.实验原理正常红细胞悬浮于等渗的血浆中，若置于高渗溶液内，则红细胞会因失水而皱缩；反之，置于低渗溶液内，则水进入红细胞，使红细胞膨胀。如环境渗透压继续下降，红细胞会因继续膨胀而破裂，释放血红蛋白，称之为溶血。红细胞膜对低渗溶液有一定的抵抗力，这一特征称为红细胞的渗透脆性。现在是23页\一共有48页\编辑于星期日3.溶液配置表2不同浓度NaCl溶液配制管号123456789101%NaCl（mL）6.05.04.54.03.53.02.52.01.51.0蒸馏水(mL)4.05.05.56.06.57.07.58.08.59.0NaCl浓度（%）0.600.500.450.400.350.300.250.200.150.10现在是24页\一共有48页\编辑于星期日4.结果观察①未溶血试管：液体下层有大量红细胞下沉，上层为无色透明，表明无红细胞破裂。②不完全溶血试管：液体下层有红细胞下沉，上层出现透明淡红色，表明部分红细胞已经破裂，称为不完全溶血。②完全溶血试管：液体完全变成透明红色，管底无红细胞下沉。现在是25页\一共有48页\编辑于星期日【注意事项】1.试管要干净，加抗凝血的量要一致。2.配制NaCI溶液时应力求准确、无误。3.混匀时，轻轻倾倒1～2次，损少机械震动，避免人为溶血。4.静置时间足够，应在光线明亮处判定结果。

现在是26页\一共有48页\编辑于星期日血红蛋白的测定1实验目的掌握比色法测定动物血红蛋白含量的方法。2实验原理血红蛋白的颜色与氧结合量有关，当用一定的氧化剂将其氧化时，可使其转变为稳定、棕色的高铁血红蛋白，而且颜色与血红蛋白的浓度成正比。因此，可与标准色板进行对比，求出血红蛋白的浓度，即每升血液中含血红蛋白的克数（g.L-1）。现在是27页\一共有48页\编辑于星期日3实验对象：动物种类不限4方法与步骤：使用沙里氏血红蛋白计测定。比色法是用HCl使血红蛋白酸化形成粽色的高铁血红蛋白，然后和标准比色板进行比色。（1）血红蛋白计由标准比色箱和测定管组成。测定管两侧有刻度，一侧为血红蛋白量的绝对值，以每100mL血液中所含血红蛋白的克数表示；另一侧为相对值，以％（即相当于正常平均值的百分数）来表示。现在是28页\一共有48页\编辑于星期日血红蛋白测定①先检查血红蛋白吸管和测定管是否清洁，如不清洁则依次用自来水→蒸馏水→无水乙醇清洗。②将0.1N盐酸加入测定管中至刻度“2”处。③用血红蛋白吸管吸取血液至刻度20μL处，用脱脂棉擦净外壁血液后，立即将血液缓缓吹入测定管的盐酸中，并利用上层盐酸将吸管反复洗涤多次（避免起泡），使吸管中的血液全部进入盐酸液层中，混匀。④酸化10min后，逐滴加入蒸馏水使液体颜色变浅，边加边混匀并与标准比色板比较，至二者颜色相同为止。⑤读出测定管内液体凹面最低处的刻度，即为每100mL血液中血红蛋白的克数。现在是29页\一共有48页\编辑于星期日【注意事项】1.吹血入测定管时，不宜用力过猛，避免起泡以影响读数。2.稀释时应逐滴加入，防止稀释过量。3.血液与盐酸作用时间不能少于10min，否则血红蛋白不能充分转变为高铁血红蛋白，使结果偏低。4.用血红蛋白吸管吸血时要准确，比色应在自然光下进行。现在是30页\一共有48页\编辑于星期日实验报告的撰写1实验原理2材料与方法2.1主要器材2.2主要药品2.3实验动物2.4实验方法2.4.1Hb测定：按鱼类生理学实验方法进行[1]。2.4.2RBC脆性测定：按鱼类生理学实验方法进行[1]。2.4.3影响血凝因素：按鱼类生理学实验方法进行[1]。现在是31页\一共有48页\编辑于星期日3实验结果3.1Hb含量及RBC脆性测定表1鳙鱼Hb含量及RBC脆性测定分组Hb测定含量（g/L）RBC脆性测定（NaCl%）最小抵抗最大抵抗实验组对照组750.48～0.400.33～0.21现在是32页\一共有48页\编辑于星期日3.2不同因素对血液凝固时间的影响表2血液凝固及其影响因素试管号实验处理凝血时间（秒）1空白2液体石蜡4滴3棉花少许4冰水环境5肝素4滴6草酸钾4滴7肺组织浸液4滴5号管加CaCl24滴6号管加CaCl24滴现在是33页\一共有48页\编辑于星期日4分析与探讨4.1Hb测定结果比对照高（或低、或基本一致），从操作过程方面说明原因：……。4.2RBC脆性测定结果，与对照组相比，最小抵抗高（或低、或基本一致），最大抵抗……，从操作过程方面说明原因：……。4.3凝血时间测定结果表明，××处理能加快（抑制或不凝）血液凝固，为什么？××管加CaCl2后凝固，为什么？（从凝血机制分析）5参考文献[1]杨秀平.动物生理学实验[M].北京：高等教育出版社，2004，85-99.现在是34页\一共有48页\编辑于星期日家兔Hb、RBC脆性测定及影响血凝的因素观察

1实验相关信息及目的2材料2.1动物2.2主要药品：2.3主要仪器：3实验方法：简述或按生理实验指导书a～b页介绍方法进行[1]。

4结果4.1家兔Hb、RBC脆性测定：见表1。分组实验组对照组Hb（g/L）RBC脆性（NaCL%）最小抵抗最大抵抗80-1500.6～

0.550.4～0.35表1家兔Hb、RBC脆性测定4.2家兔血凝时间的测定：见表2。表2不同因素对家兔血凝时间的影响5讨论5.1家兔Hb测定结果与对照比较，其值偏高，原因：5.2家兔RBC脆性测定结果与对照比较，其值，原因：5.3家兔血凝时间测定结果表明，时间长短，原因：参考文献[1]陈杰.家畜生理学（第四版）[M].北京：中国家业出版社，2004，23-34.血凝时间（S）实验管号处理因素草+Ca++肝素+Ca++对照棉花肝素冰水石蜡草肺组织[2]王力.论文题目[J].中国兽医杂志，2006（25）9：12-23.现在是35页\一共有48页\编辑于星期日实验四蛙心收缩的记录和心肌特性证明

【实验目的】学习蟾蜍心脏活动描记的方法，观察心肌收缩的特点。【实验原理】心肌的有效不应期特别长，几乎占据了整个收缩期和舒张早期。在此期内任何刺激均不能引起心肌收缩。因此心肌不会产生强直收缩，心脏总是有节律的舒缩。在心脏舒张早期之后，给心肌一次有效刺激，会引起心脏一次期前收缩，紧接着出现一次较长的间歇——代偿间歇。现在是36页\一共有48页\编辑于星期日【实验对象】蛙或蟾蜍【实验药品】任氏液【实验方法与步骤】

1.实验准备（1）在体蛙心制备：取蛙一只，破坏脑、脊髓，仰卧固定于蛙板上。左手持镊子提起胸骨后端的皮肤剪一小口，然后向左、右两侧锁骨外侧剪开皮肤、肌肉，剪断左右锁骨，使创口呈一倒三角形，充分暴露心脏部位，并用眼科剪剪开心包膜，彻底暴露心脏。现在是37页\一共有48页\编辑于星期日（2）观察心脏的结构识别蛙心脏。自心脏腹面可观察到心室、心房、动脉球和主动脉。用玻璃分针向前翻转蛙心，暴露心脏背面可观察到静脉窦和心房。（3）连接实验装置将蛙心夹上的细线与张力换能器相连，让心脏搏动信号传入计算机生物信号采集处理系统。将铜丝与心室接触良好并固定稳妥后，与刺激器的输出连接。现在是38页\一共有48页\编辑于星期日2.实验项目（1）描记正常曲线，观察曲线的收缩相和舒张相。（2）用中等强度的单个阈上刺激在收缩期刺激心室，有何变化？为什么？（3）用中等强度的单个阈上刺激在舒张中后期刺激心室，有何变化？为什么？（4）心肌“全或无”反应：用丝线在静脉窦与心房之间作一结扎，心脏停止跳动。然后给予阈下及不同强度的阈上刺激，观察蛙心收缩强度的变化。现在是39页\一共有48页\编辑于星期日【结果及分析】1.心缩期单个阈上刺激，心脏有何变化，为什么？2.心舒期单个阈上刺激，心脏有何变化，为什么？3.第一结扎后，心房、心室活动有何变化，为什么？4.阈下刺激心缩曲线幅度有何变化，为什么？5.不同强度的阈上刺激，心缩曲线幅度有何变化，为什么？现在是40页\一共有48页\编辑于星期日【注意事项】1.破坏蛙的大脑和脊髓要彻底。2.经常给心脏滴加任氏液，以保持心脏适宜的环境。3.张力传感器与蛙心夹之间的丝线应保持适宜的紧张度。4