蛋白相互作用

蛋白相互作用第1页，共34页，2023年，2月20日，星期四蛋白质的相互作用存在于每个细胞的生命活动过程中，是生命活动的基础。蛋白质间的相互作用可以是稳定的，也可以是瞬间的揭示蛋白质之间相互作用的关系，建立相互作用关系的网络图，已成为蛋白质组学研究的热点,在现代分子生物学中蛋白质相互作用的研究占有非常重要的地位。

蛋白质之间相互作用研究的重要性第2页，共34页，2023年，2月20日，星期四蛋白相互作用的常规方法1Westernblot和Farwestern相互作用分析

Westernblot是免疫印记，而Farwestern是蛋白铺盖技术，两者其实在本质上是相似的，只是westernblot是直接用抗体去probe抗原，常用于蛋白质定性；Farwestern则是用标记的蛋白（放射性或荧光)去probe与之相互作用的蛋白，或再用抗这种蛋白的抗显示这种蛋白的结合位置，用于研究蛋白质的相互作用。第3页，共34页，2023年，2月20日，星期四第4页，共34页，2023年，2月20日，星期四第5页，共34页，2023年，2月20日，星期四蛋白相互作用的常规方法2.免疫共沉淀和亲和层析共分离

免疫共沉淀是证明蛋白质-蛋白质相互作用的最直接最经典和最有效的方法.第6页，共34页，2023年，2月20日，星期四第7页，共34页，2023年，2月20日，星期四第8页，共34页，2023年，2月20日，星期四第9页，共34页，2023年，2月20日，星期四第10页，共34页，2023年，2月20日，星期四第11页，共34页，2023年，2月20日，星期四基本策略

第12页，共34页，2023年，2月20日，星期四第13页，共34页，2023年，2月20日，星期四蛋白相互作用的常规方法3.酵母双杂交技术钓取细胞内可能与目标蛋白A相互作用的蛋白第14页，共34页，2023年，2月20日，星期四酵母双杂交系统GeneBindingDomainActivationDomain第15页，共34页，2023年，2月20日，星期四第16页，共34页，2023年，2月20日，星期四蛋白相互作用的常规方法4.噬菌体展示系统筛选(phagedisplay)第17页，共34页，2023年，2月20日，星期四第18页，共34页，2023年，2月20日，星期四第19页，共34页，2023年，2月20日，星期四第20页，共34页，2023年，2月20日，星期四蛋白相互作用的常规方法5.荧光共振能量转移技术6.SPR（表面等离子体共振）7.生物信息学方法研究蛋白质相互作用

第21页，共34页，2023年，2月20日，星期四1.FRET

荧光共振能量转移技术第22页，共34页，2023年，2月20日，星期四蛋白相互作用的常规方法5.荧光共振能量转移技术6.SPR（表面等离子体共振）7.生物信息学方法研究蛋白质相互作用

第23页，共34页，2023年，2月20日，星期四2.SPR（表面等离子体共振）SPR对附着在金属薄膜表面的介质折射率非常敏感,当表面介质的属性改变或者附着量改变时，共振角将不同。因此，SPR谱（共振角的变化vs时间）能够反映与金属膜表面接触的体系的变化。第24页，共34页，2023年，2月20日，星期四蛋白相互作用的常规方法5.荧光共振能量转移技术6.SPR（表面等离子体共振）7.生物信息学方法研究蛋白质相互作用

第25页，共34页，2023年，2月20日，星期四AnexampleofW79Malesterilefertile第26页，共34页，2023年，2月20日，星期四水稻噬菌体展示文库建立第27页，共34页，2023年，2月20日，星期四原核表达并纯化W79蛋白

第28页，共34页，2023年，2月20日，星期四

FirstroundSecondroundThirdround第29页，共34页，2023年，2月20日，星期四UnknownproteinHeatshockproteinSmallGTPbandingprotein第30页，共34页，2023年，2月20日，星期四Rab7原核表达及纯化第31页，共34页，2023年，2月20日，星期四第32页，共34页，2023年，2月20日