革兰阴性菌的学习教案

革兰阴性菌的学习教案第1页/共35页奈瑟菌属（Neisseria）

布兰汉菌属（Branhamella）第2页/共35页概述“伯杰鉴定细菌学手册”第9版将奈瑟菌属和布兰汉菌属归于群4，将奈瑟菌属、莫拉菌属、金氏菌属和不动杆菌属都归于奈瑟菌科奈瑟菌属中的淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae）、脑膜炎奈瑟菌（N.meningitidis）以及莫拉菌属中的卡他莫拉菌（M.catarrhalis）是主要的致病菌。目前对卡他莫拉菌是归属尚未定论第3页/共35页一、分类脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌对人致病寄生在人体内鼻咽腔的腐生菌解乳糖奈瑟菌、干燥奈瑟菌、微黄奈瑟菌、粘液奈瑟菌、浅黄奈瑟菌、灰色奈瑟菌、延长奈瑟菌、去氮奈瑟菌和多糖奈瑟菌一、奈瑟菌属第4页/共35页1．形态革兰阴性双球菌直径0.6~1.5μm

形似双肾或咖啡豆样，凹面相对无动力，无芽胞，某些菌种形成荚膜第5页/共35页2．培养特性需在培养基中添加羊血、兔血或血清，对脂肪酸敏感，在培养基中需加入可溶性淀粉。需氧生长，初次分离需5%~7%CO2和高湿度最适生长温度为35~37℃，低于30℃不生长第6页/共35页血琼脂平板或巧克力琼脂平板上呈光滑、湿润、透明或半透明、直径1~2mm的不溶血、圆形、灰兰色菌落卵黄琼脂平板上为无色、光滑、半透明、边缘整齐、湿润奶油状菌落在液体培养基中呈轻度或中度混浊生长，无菌膜脑膜炎奈瑟菌于孵育24h后在培养基上发生自溶第7页/共35页3．生化特性氧化酶阳性，触酶阳性（除延长奈瑟菌外）分解葡萄糖和麦芽糖，产酸不产气对糖分解能力、硝酸盐还原能力和DNA合成酶不同，常作为菌种间的鉴别依据奈瑟菌属DNA中G+Cmol%为46~54第8页/共35页抗原构造、抵抗力依据荚膜多糖的抗原成分可分为：A、B、C、……等13个血清群，我国A群占95.8%，其余为B、C等群。第9页/共35页4．抵抗力对寒冷、干燥和热的抵抗力弱，对化学消毒剂敏感对青霉素敏感但近年来由质粒介导的β内酰胺酶所致的耐药在淋病奈瑟菌中产生较多第10页/共35页1.致病物质荚膜：抵抗吞噬的作用，利于细菌在体内的存活和繁殖菌毛：粘附于黏膜上皮细胞，利于定植内毒素：可引起发热、微循环障碍，严重者可致内毒素休克、血栓、DIC等第11页/共35页所致疾病流行性脑脊髓膜炎（人类是唯一的易感宿主)

冬末春初，多为学龄儿童、青少年感染后多为隐性感染，早期，有上呼吸道症状，少数可发展为菌血症或败血症，进而累及脑、脊髓膜，形成化脓性脑膜炎可出现严重的临床症状如发热、头痛、脑膜刺激症阳性、甚至休克和DIC等；菌血症和细菌的损伤作用使约半数患者出现皮下瘀斑第12页/共35页

主要侵犯蛛网膜脑膜炎奈瑟菌鼻咽腔繁殖繁殖入血菌/败血症中枢神经系统暴发型脑膜炎微循环衰竭、内毒素休克、DIC第13页/共35页免疫性6月～2岁年龄组婴儿免疫力最低，是易感人群病后可获得体液免疫第14页/共35页四、微生物检验第15页/共35页脑膜炎奈瑟菌标本采集

无菌方法抽取脑脊液、关节液、血液、瘀点穿刺液等标本采集后立即送往实验室用血平板进行床边接种后置35℃孵育血液标本接种在血液培养瓶中置35℃孵育标本运送时需要35℃保温第16页/共35页脑膜炎奈瑟菌检验程序CO2环境形态学鉴定生化鉴定血清学鉴定第17页/共35页标本直接检查直接涂片检查脑脊液直接或经离心后取沉淀涂片皮肤瘀点渗出液涂片革兰染色后显微镜下见白细胞内外的革兰阴性双球菌，可报告“检出革兰阴性双球菌，疑似脑膜炎奈瑟菌”。有助于流行性脑脊髓膜炎早期诊断第18页/共35页抗原检查通常用胶乳凝集试验和其他凝集试验包括A、C、Y、W125血清型的多价抗体和血清型B抗体检测结果应结合涂片和培养结果，抗原检测阳性结果可作出快速、推测性诊断第19页/共35页分离培养鉴定

脑脊液标本接种在巧克力琼脂或羊血琼脂平板咽拭子或鼻咽拭子接种在选择性培养基上如改良的Thayer-Martin(MTM)、GC-Lect、NewYorkCity(NCY)等培养基血液标本经增菌培养基增菌培养后，移种至巧克力琼脂或羊血琼脂平板上置5%~7%CO235℃孵育，每隔24h观察平板第20页/共35页鉴定初步确定为奈瑟菌属直径1~2mm，灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落涂片革兰染色见阴性双球菌氧化酶试验阳性进一步进行葡萄糖和麦芽糖发酵试验阳性、其他糖类发酵阴性可确定为脑膜炎奈瑟菌用分型血清确定血清型别平板上没有发现菌落需继续观察72h后无菌生长可报告为阴性第21页/共35页防治原则综合性预防措施隔离病人、检查带菌者、预防性投药，室内通风流脑疫苗：6个月-2岁接种两次，间隔1月A群脑膜炎球菌多糖抗原。制备疫苗青霉素、磺胺大剂量治疗第22页/共35页二、淋病奈瑟菌

N.gonorrhoeae第23页/共35页G－双球菌，似一对咖啡豆。有菌毛，有荚膜专性需氧，巧克力血琼脂平板2.培养特性1.形态与染色3.抵抗力弱：热、冷、干燥和消毒剂极敏感，1%石炭酸

3

min或1:4000硝酸银2

min即死亡。本菌能自溶。（一）生物学性状第24页/共35页1.致病物质荚膜：利于细菌在体内的存活和繁殖菌毛：粘附作用；抵抗吞噬外膜蛋白Ⅱ：有助于粘附IgA蛋白酶：能破坏黏膜表面sIgA

内毒素：损害人体黏膜的重要因素（二）致病性与免疫性第25页/共35页1.淋病人类是淋病奈瑟菌的唯一宿主，属性传播疾病（exually

transmitted

disease

，STD）主要通过性接触引起泌尿道和生殖系统炎症。2.所致疾病gonorrhea第26页/共35页第27页/共35页2.新生儿淋菌性结膜炎/新生儿脓漏眼新生儿由产道感染有淋病性阴道炎或子宫颈炎的孕妇，胎儿经产道娩出时可被感染。3.淋病奈瑟菌性结膜炎及幼女阴道炎2.所致疾病通过毛巾、浴池间接感染。第28页/共35页1.标本2.直接涂片镜检中性粒细胞内发现G－双球菌有价值。3.分离培养与鉴定泌尿生殖道脓性分泌物，用无菌棉拭沾取，子宫颈口表面分泌物，标本采集后应注意保暖保湿，立即送检接种。巧克力色平板，5-10%二氧化碳（三）微生物学检查法第29页/共35页4.快速诊断SPA协同凝集实验、ELISA检查标本中细菌；核酸杂交及PCR检测淋病奈瑟菌质粒DNA等。第30页/共35页防开展防治性病的知识教育防止不正当的两性关系治新生儿1%硝酸银滴眼。抗生素。参考体外药敏试验。对青霉素、头孢胺噻肟钠、环丙沙星、壮观霉素等多种抗生素敏感，近年报告耐药菌株增多。（四）防治原则第31页/共35页卡他莫拉菌培养及鉴定在血液琼脂或巧克力琼脂平板上生长良好35℃24h孵育后菌落直径1~3mm，灰白色、光滑，用接种环推菌落可将整个菌落在平板表面移动氧化酶和触酶阳性不发酵葡萄糖和其它糖类产酸大多数菌株还原硝酸盐和产生DNase。三丁酸甘油酯水解（丁酸酯酶）试验阳性可与奈瑟菌属鉴别可产生诱导型β内酰胺酶第32页/共35页奈瑟菌属和卡他布兰汉菌的鉴定第33页/共35页思