微生物实验第次实验课

第三次实验实验内容热力对细菌繁殖体和芽胞的杀菌作用：（1套/组）紫外线的杀菌作用：（1个/组）抗生素敏感试验：（1套/组）细菌耐药性变异（示教）细菌的鞭毛变异（示教）高压灭菌器的使用（讲解）细菌分离鉴定程序（讲解）全自动微生物生化分析仪简要操作规程（讲解、参观）物理消毒灭菌法掌握的概念：消毒：指杀死物体上病原微生物的方法。但是不一定能杀死细菌的芽胞和某些非病原菌。灭菌：指杀死物体上所有微生物的方法。包括病原菌和非病原菌，细菌的芽胞和繁殖体。物理消毒灭菌法分类：热力、紫外线、电力辐射、超声波等。热力灭菌法：干热灭菌法与湿热灭菌法。使菌体蛋白氧化变性、碳化或使电解质浓缩，导致细胞死亡。使菌体蛋白变性或凝固，或导致细胞膜功能受损而致细胞质内容物漏出。一、热力对细菌芽胞和繁殖体的杀菌作用材料肉汤培养基：6支（2人/组）菌种：大肠杆菌斜面培养物、枯草杆菌斜面培养物方法接种大肠杆菌接种枯草杆菌第一步：接种细菌方法第二步：分组处理大肠杆菌枯草杆菌大肠杆菌大肠杆菌枯草杆菌枯草杆菌第一组第二组第三组对照（直接放37℃培养）100℃煮沸10min121℃高压灭菌20min冷水冲凉三组均放于37℃孵箱中培养18～24小时，观察结果并分析产生结果的原因。方法第三步：培养高压灭菌器的使用原理：蒸汽被限制在密闭的容器中，随着压力的升高，蒸汽的温度也相应升高。在103.4kpa蒸汽压下，温度达到121.3℃，维持15-20min，可杀死包括细菌芽胞在内的所有微生物。锅盖内锅外锅结果菌膜(表面生长)均匀浑浊生长沉淀生长对照:两管均有细菌生长;100℃煮沸10min:枯草杆菌有生长,形成菌膜;大肠杆菌无生长。高压灭菌:两管均无细菌生长.结果普通条件培养下细菌生长状况枯草杆菌大肠杆菌100℃灭菌后细菌生长状况枯草杆菌大肠杆菌三、紫外线的杀菌作用紫外线的特点：穿透力较弱，可被普通的玻璃、纸张、尘埃、水蒸气等阻挡，只用于手术室、传染病房、实验室或不耐热物品的表面消毒。波长在200～300nm的紫外线具有杀菌作用，以265～266nm的紫外线杀菌作用最强。主要是使同一股DNA上相邻的嘧啶通过共价键结合成二聚体，影响DNA正常碱基配对，干扰DNA的复制与转录，引起细菌的突变或死亡；还能使空气中的氧转化为臭氧而具有杀菌作用。原理普通琼脂丛平板（1储个/2人饶）菌种：金且黄色葡萄斤球菌液体梳培养基接种环紫外灯材料方法1、取叼2～3驴环菌液纱于平板做中央；2、接种根环涂均匀裳；3、放紫轰外线灯箱葵，用平板删盖盖住1若/2平皿友，照射3为0min驾；4、取出袄后放37汁℃培养2冷4h观察烫结果。紫外线公照射一访侧无细屠菌生长稼。结果照射一秋侧未照射笔一侧四、抗迷生素敏吊感实验纸片法大原理一定大小绞的浸沾了翁一定的稀乘释度的抗魔生素的滤逆纸片，贴恼附于已涂县满被测细止菌的琼脂产平板上，婆孵育后因袋药物的抑贯菌作用及色渗透性，边纸片周围租可出现透跨明的抑菌代圈。根据零抑菌圈的耀有无和大哭小，从而魄测知被测烫细菌对抗麦生素是否脱敏感。菌种：桃大肠杆狂菌和葡皱萄球菌劈燕肉汤培沫养物普通琼瘦脂平板砖（1个扎/人）接种环活、镊子抗生素纸病片：青霉浑素、链霉顾素、复方蛾新诺明、抛环丙沙星材料方法青链复环1、用雷接种环惑将菌液念均匀的获涂抹于吐平板表虑面（方缠法同紫伪外线）餐；2、在发平板底杜部用蜡怒笔分成柄4区；3、镊子坏烧灼灭菌宗、冷却，序夹取纸片绪放于各区书；4、作好起标记放3咐7℃培养兵24h测刚量抑菌圈算的大小，钢判断结果齿。注意：1、镊嗓子冷却愈后才能吐夹取纸吩片；2、纸片泥间距离不征能太密。含药物事的滤纸师片含菌平板抑菌圈37℃培府养结果复链青环复环青链葡萄球菌大肠杆辉菌绿脓杆菌五、耐慨药性变凭异细菌产生伪抗药性的蜡机制：改变药卸物作用饲机制；产生各种岁钝化酶；R质粒编好码乙酰转转移酶、磷沈酸转移酶难、腺苷转诊移酶；改变细予胞膜通任透性。方法不耐青霉关素耐青霉扣素六、细菌竟的鞭毛变扔异含0.1写%石炭酸桶琼脂培养浊基无此现济象.普通琼锯脂培养吓基迁徙生长七、全呈自动微烈生物生翅化分析赖仪VIT福EK2系统简易价操作规程给介绍主机聪明仪（一）基及本功能1、从分方离菌落中渣对微生物沈进行鉴定载；2、对府分离菌相株进行摧抗生素繁敏感试证验；3、以枪MIC翻比较分夏析为基疾础利用虾高级专台家系统顶来进行升菌株耐移药表型病分析。（二）恳卡片1、鉴定无卡GNB/血GN革兰阴性内杆菌鉴定根卡；GPC停/GP革兰阳途性球菌街鉴定卡严；YST屑酵母稠菌鉴定柜卡；BBL苦需氧芽孢馋杆菌。2、VI邮TEK荡2卡片细姑菌鉴定原摊理是一组胀放在6啦4个3非0l容引积小孔育的标准龟化及微啦量化试俗验。这嘱些小孔歉放有一唉些乾燥泳的反应贼培养基苹，被测肝试的菌驳液是接稿种到这硬些培养饺基上。族每个小财孔代表玻一个生咏化反应票，有些节小孔是岂用作读尤数对照塌。细菌酬的新陈挣代谢令钉孔内底总物在培柜养过程昂产生反便应，从蹦而使荧餐光物产六生变化撑，每1港5分钟动仪器会多以波长简365深nm治的激发兼光照射率每个生侨化接收建二极管浇收集激躲发后产歉生的4麻45泰nm波拆长的光扑讯号。踩这里有舰两种荧忠光指标茂要检测扣:微绣生物的阅新陈代乎谢导致适pH齿值改变锡、酶的龟活性。3、药嚷敏卡AST-警GNxx革兰阴业性杆菌口药敏卡AST衡-Px职xx革兰阳治性球菌踢药敏卡4、药富敏试验废的主要涉原理仪器会意连续分感析64慢-孔试猪卡（微壤孔内）造内的细容菌生长蔽。每孔搅都放有清一种抗阳生素，周并且能易产生微节需氧及触其他有遵利细菌刚生长的沟条件。（三）穗操作规岁程1.分纯惠细菌，1盆8-24碎小时培养敲物（新鲜星菌）2.根据乔细菌选卡矛片，恢复套室温。3.按稳表一建坑议配制删菌悬液4.根数据自身傻需要选扔择药敏痕卡。5.在今SCS吃操作台由完成初蚂步资料择输入。6.船架足放入仪器系，关闭外冻门。7.仪需器自动价完成核岭对，稀渠释，填搅充，切言割，封苦闭及上走卡，卸屈卡。八、细菌完的分离鉴狭定程序标本的采扣集与送检反应注意的借问题：1、注冈意无菌唱操作，呢避免正迫常菌群牛污染；2、根南据致病近菌在体滔内分布移和排出抚部位不血同采取兔标本；3、应划在使用利抗生素跌前采标门本；4、采集第病变明显中部位；5、尽拖快送检吴；6、多斩数菌可苍冷藏送括检，但坡不耐寒悉冷的脑奸膜炎奈耍瑟菌、舅淋病奈虾瑟菌等助要保暖山送检；却粪便标味本置于尚甘油缓兽冲盐水语保存液酷中。检验程窃序脓汁、脑脊液血液胸、腹水粪便、呕吐物等分离培养纯培养涂片染色生化反应血清学鉴定药敏试验动物实验增菌培养涂片染色谢谢观看/欢迎下载BYF藏AITH对IM宁EAN定AVI骆SION商OF阔GOOD坊ONE