灭菌锅的使用

灭菌锅的使用第1页，共12页，2023年，2月20日，星期一为什么要灭菌?

组织培养

组织培养实验的第一步就是清洗与灭菌。组织培养中工作量最大，也是最基本的步骤。体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌的要求程度很高。细胞养不好与清洗不彻底有很大关系。

一、灭菌锅的使用第2页，共12页，2023年，2月20日，星期一灭菌和消毒的种类1．物理消毒法

(1)射线消毒灭菌主要使用60Co、X射线进行消毒灭菌，可用于小牛血清和塑料制品的灭菌。

(2)紫外线消毒用于消毒空气、操作台面和一些不能用干热、湿热灭菌的培养器皿，如塑料培养皿、培养板等。这是常使用的消毒方法之一。

(3)干热灭菌主要用于玻璃器皿的灭菌。将用于细胞培养的器皿放入干燥箱内，加热至160℃，保温90－120min。用于RNA提取实验的用品则需180℃，保温5－8h。

灭菌手段的选择十分重要，对不同的物品需采用不同的灭菌方法。假如选用的方法不对，即使达到了无菌，灭菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值。第3页，共12页，2023年，2月20日，星期一(4)湿热灭菌此方法也称为高压蒸汽灭菌，是最有效的一种灭菌方法。主要应用范围是布类、橡胶制品(如胶塞)、金属器械、玻璃器皿、某些塑料制品以及加热后不发生沉淀的无机溶液(如Hanks液、PBS、20×SSC等)。(5)滤过除菌用于培养用液和各种不能高压灭菌的溶液的灭菌。采用金属滤器和小型的塑料滤器，配上可以更换的微孔滤膜，极大地方便了操作。第4页，共12页，2023年，2月20日，星期一2．化学消毒法(1)75％酒精：超净台里常备75％酒精棉球(医用级酒精)，用于手和一些金属器械或工作台面的消毒。(2)84消毒液：主要用于无菌室桌椅、墙壁、地面的消毒和清洗，以及空气喷撒消毒，特别是污染细胞的消毒处理。使用浓度请按瓶上说明。第5页，共12页，2023年，2月20日，星期一3．煮沸消毒

急性消毒可用煮沸法，器械等煮沸15min后用。第6页，共12页，2023年，2月20日，星期一第7页，共12页，2023年，2月20日，星期一全自动立式电热压力蒸汽灭菌器第8页，共12页，2023年，2月20日，星期一1．用橡皮管连接在放气管上，然后没到一个装有冷水的容器里。

2．打开盖子加水（蒸馏水）到灭菌室，直到水位指示处，每次灭菌前都应及时补充水，并关紧放气阀和放水阀，防止缺水干烧。3．将待灭菌的物品放在不锈钢网篮中，放入灭菌室并仔细检查，把密封圈嵌入槽内，然后顺时针用力旋紧盖子，直到不能旋动为止。4.打开电源开关，设定灭菌的温度和时间。使用方法及注意事项第9页，共12页，2023年，2月20日，星期一5．按下“工作”键，进入自动控制灭菌过程。6．不要在灭菌过程中或刚灭菌完毕时触摸内胆和盖子，以免烫伤。7.在灭菌过程中或内胆内压力较高，严禁打开盖子，也不要打开排水阀，一定要等到压力显示为0MPa时，才能打开盖子。8.在灭菌过程中，不要把脸和手靠近安全阀，以免热的水蒸气突然从安全阀中喷出，造成伤害。第10页，共12页，2023年，2月20日，星期一9．不要把物品放在安全阀上面阻碍它的打开。10.在使用中，当压力表指示超过0.212MPa时，安全阀还没有自动开启，应立即断开电源，放尽蒸汽，冷却后及时