实验室生物安全2

临床实验室生物安全

湖南省临床检验中心--吕岳峰1一、有关法规、标准1、病原微生物实验室安全管理条例

2004年11月12日国务院发布

2、医疗废物管理条例2003年6月16日国务院发布

及医疗卫生机构医疗废物管理办法

中华人民共和国卫生行业标准

WS/T249-2005，20051201实施

3、实验室生物安全通用要求

中华人民共和国国家标准GB19489-2004，20041001实行

4、人间传染的病原微生物名录

中华人民共和国卫生部制，20060111

5、艾滋病防治条例(国务院令第457号，2006年3月1日起施行)及《全国艾滋病检测工作管理办法》(卫生部2006年6月印发）

2病原微生物实验室安全管理条例目的加强病原微生物实验室安全管理，保护实验室工作人员、社会公众和环境对象适应于从事病原微生物研究、教学、生产、诊断检测等所有实验室方法国家对病原微生物按照其对人类和动物及环境的危害程度实行分类管理，按照对病原微生物的防护水平对实验室实行分级管理标准国家实行统一的实验室安全标准，实验室应符合国家标准的要求。3《病原微生物实验室生物安全管理条例》有关条例介绍第二条对中华人民共和国境内的实验室及其从事实验活动的生物安全管理，适用本条例。

本条例所称病原微生物，是指能够使人或者动物致病的微生物。

本条例所称实验活动，是指实验室从事与病原微生物菌（毒）种、样本有关的研究、教学、检测、诊断等活动。第四条国家对病原微生物实行分类管理，对实验室实行分级管理第十八条国家根据实验室对病原微生物的生物安全防护水平，并依照实验室生物安全国家标准的规定，将实验室分为一级、二级、三级、四级。第二十一条一级、二级实验室不得从事高致病性病原微生物实验活动。第三十二条实验室负责人为实验室生物安全的第一责任人。4实验室的生物安全防护屏障生物安全防护水平（biosafetylevel,BSL）是根据实验室使用的一级防护屏障和二级防护屏障不同而分的级别，实验室生物安全分为四级。一级防护屏障是指生物安全柜和个人防护装备等构成的防护屏障。个人防护装备有实验服、隔离衣、连体衣，塑料围裙、鞋帽、护目镜、口罩、面罩、防毒面具、手套等。二级防护屏障是指实验室的设施结构和通风系统等构成的防护屏障如实验室的设施包括消防、应急供电、应急淋浴以及洗眼设施等。5一级生物安全防护实验室

（低个体危害，低群体危害）实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对健康成年人已知无致病作用的微生物，如用于教学的普通微生物实验室等。

6二级生物安全防护实验室

（中等个体危害，有限群体危害）实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人或环境具有中等潜在危害的微生物。所谓“中等潜在危害”指一般性可致病细菌、病毒等微生物。7三级生物安全防护实验室

(高个体危害，低群体危害)

实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素，通常已有预防传染的疫苗或感染后可以治愈。

艾滋病毒的研究（血清学实验室除外）应在三级生物安全防护实验室中进行。8

四级生物安全防护实验室

（高个体危害，高群体危害）

实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人体具有高度的危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明，目前尚无有效的疫苗或治疗方法的致病微生物及其毒素。9气溶胶（aerosol)

是固体或液体微粒稳定地悬浮于气体介质中形成的胶溶状态分散体系。其中的微粒成份复杂，大小不一，其粒径在0.001-100μm，一般为0.001-10μm。按微粒的性质分液体气溶胶----雾固体气溶胶----常称气溶胶按微粒的大小分粒径＜10μm的称为可吸入颗粒，因其重量轻，在空气中漂浮的时间长又称为飘尘，粒径＞10μm的因重力作用而迅速下沉而成为降尘。10微生物气溶胶对

人呼吸道的侵入情况粒子直径＞10μm，一般被阻留在鼻腔内粒子直径5-10μm，可到达支气管粒子直径＜5μm，可进入细支气管和肺泡粒子直径越小，其到达的部位越深，小于1μm的粒子在肺泡内沉积率最高，粒子直径＜0.4μm可自由进出肺泡11二、实验室设计和建造的特殊要求主要介绍BSL-1、BSL-2BSL-1实验室（摘自《实验室生物安全通用要求》6.1）1、无须特殊选址，普通建筑物即可，但应有防止节肢动物和啮齿动物进入的设计。2、每个实验室应设洗手池，宜设置在靠近出口处。3、在实验室门口处应设挂衣装置，个人便装与实验室工作服分开设置。4、实验室的墙壁、天花板和地面应平整、易清洁、不渗水、耐化学品和消毒剂的腐蚀。地面应防滑，不得铺设地毯。5、实验台面应防水，耐腐蚀、耐热。6、实验室中的橱柜和实验台应牢固。橱柜、实验台彼此之间应保持一定距离，以便于清洁。7、实验室如有可开启的窗户，应设置纱窗。8、实验室内应保证工作照明，避免不必要的反光和强光。9、应有适当的消毒设备。12BSL-2实验室（摘自《实验室生物安全通用要求》6.2）1、满足6.1要求。2、实验室门应带锁并可自动关闭。实验室的门应有可视窗。3、应有足够的存储空间摆放物品以方便使用。在实验室工作区域外还应当有供长期使用的存储空间。4、在实验室内应使用专门的工作服；应戴乳胶手套。5、在实验室工作区域外应有存放个人衣物的条件。6、在实验室所在的建筑物内应配备高压蒸汽灭菌器，并按期检查和验证，以保证符合要求。7、应在实验室内配备生物安全柜。8、应设洗眼设施，必要时应有喷淋装置。9、应通风，如使用窗户自然通风，应有防虫纱窗。10、有可靠的电力供应和应急照明。必要时，重要设备如培养箱、生物安全柜、冰箱等配备备用电源。11、实验室出口应有在黑暗中可明确辨认的标识。13三、二级生物安全防护实验室日常工作要点实验室入口须贴上生物危险标志，注明危险因子、生物安全级别、负责人姓名和电话、进入实验室的特殊要求以及对非工作人员进入实验室的劝阻等。禁止在工作区饮食、吸烟、处理隐形眼镜、化妆及储存食物；接触微生物或含有微生物的物品、脱掉手套后和离开实验室前要洗手；用移液器吸取液体，禁止口吸；5、制定尖锐器具的安全操作规程；6、按照实验室安全规程操作，减少溅出和气溶胶的产生；7、每天至少消毒一次工作台面，活性物质溅出后要随时消毒；14二级生物安全防护实验室日常工作要点8、所有废弃物在运出实验室之前必须进行消毒,所有培养物应先灭活，如高压灭活。特殊情况下需运出实验室灭活的物品必须放在专用密闭防漏的容器内储存、运输及消毒灭菌；9、有条件时工作人员应接受必要的免疫接种(如卡介苗等)10、必要时收集从事高危性工作人员的基本血清本底，并根据需要定期收集血清样本检测报告，如有问题及时处理；11.工作人员要接受有关的潜在危险知识的培训，掌握预防暴露以及暴露后的处理程序。每年接受一次最新的培训；工作人员在实验室应按照规范要求操作；12、实验设备在运出修理或维护前必须进行消毒；13、人员暴露于病菌时，及时处理并向实验室负责人汇报和记录。15四、实验室标识图例、制度与职业曝露预防16生物安全标示图例主要传染因子请勿17安全管理基本制度实验室内务管理制度尖锐器具安全使用制度实验室消毒防护制度实验室风险防范及控制标本采集运输制度废弃物处理制度工作人员防护制度差错事故处理制度18尖锐器具安全使用除特殊情况外，禁止在实验室使用针、注射器及其他利器。尽可能使用塑料器材代替玻璃器材。尽可能应用一次性注射器，用过的针头禁止折弯、剪断、折断、重新盖帽、从注射器取下，禁止用手直接操作。用过的针头必须直接放入防穿透的容器中。非一次性利器必须放入厚壁容器中并运送到特定区域消毒，最好进行高压消毒。尽可能使用无针注射器和其他安全装置。禁止用手处理破碎的玻璃器具。装有污染针、利器及破碎玻璃的容器在丢弃之前必须消毒。19职业暴露及其预防职业暴露是指医务工作者、实验室工作人员及有关监管人员在从事诊断、治疗、护理、预防、检验、管理工作过程中，暴露于含有感染性的血液、体液和实验室培养液等引起的危害。实验室意外和事故处理应急处理---重在应急，事后报告。必需配置应急药物和设施。职业暴露防治临床检查诊断主动被动免疫药物治疗观察20生物安全并及职业暴望露案例Lis仁aB坏lac假k感染时间援：199每7.10朋.18；悬职业：护诞士。感染情婚节：B缩慧lac丙k护理环一位进烧展期H驼IV患斯者、检筑查患者凝血管时盐，发现辫输液带即已空，肥输液管局被血液携阻塞。念她不想脏再改变完穿刺部遇位，将念一注射迅器穿刺城入输液拴管内抽嫌吸。患巡寿者突然社移动手我臂使针至头划出落刺入流Bla卫ck的忘手。暴露后收3月检撒测阴性意；9月丽HIV亩+；1裤2月H盐CV＋交；21员工职业芦健康预防接伞种：针宅对性健康档案惯：特别是泰工作人员概血清留样实验室安英全防护：侍个人、环夜境、标本个人防洗护设施职业暴露与预防生物安全交培训22检验后烈的处理废弃物任处置实验环弹境卫生滨清洁23何谓医疗勾废物及其止处理的有功关规定医疗废亦物--师医疗卫拒生机构竖在医疗码、预防铁、保健恭以及其固他相关寺活动中河产生的别具有直劣接或间命接感染捏性、毒某性以及璃其他危蹲害性的记废物。有关规定并：国务院《即医疗废物戚管理条例周》卫生部建《医疗也卫生机兔构医疗绞废物管振理办法是》《实验鲜室生物吉安全通渠用要求纹》《消毒脏技术规边范（2应002彼年版）旨》24医疗废物遮分类感染性败废物病理性废倡物损伤性废燃物药物性鹊废物化学性藏废物25医疗废物犹处理原则集中处置其包装物尼要防渗漏灾、防锐器拆穿透，有婶明显标识炒和警示说南明对医疗废贡物储存设宇备要定期还消毒对医疗所废物中朗的病原脂物培养丹基、标菜本和菌家种、毒驾种及其朴保存液既等高危委废物，绩在交医迟疗废物巨集中处桂置前应膝先就地灭上活.26实验环境湾卫生清洁及时移专走和处趟理标本鬼、废弃套物等视不同叮情况用乡丰紫外线聚、消毒成液等多呀种方法喘消毒工废作台、贪实验器承具、地母面等实胜验环境垃,保持且卫生27五、生物尺安全设备分类一.超撞净工作杀台二.生物书安全柜281、超净队台正压柜气流从舌顶部或驴底部经洽过过滤肉器后从揉操作区校正面流堪向工作踪蝶台面，体被样品嚷污染的惕气流排娱出柜外泰，没有步循环气丈流。超净台缺保护样房诚品不受滴污染，样适用于绳普通实将验室或1级生物岭安全水煎平中对人员连和环境羽无保护矿要求的阵实验。292、生喘物安全栏柜（B社iol括ogi平cal奖sa宜fet栏yc盒abi味net次s，B穴SCs购）1）生物安全理柜是防止操速作处理炕过程中处某些含默有危险保性或未召知性生司物微粒误发生气蛇溶胶散坛逸的箱啄形空气长净化负默压安全举装置。适用于临况床诊断、犁教学、研语究、生产祸部门开展鹅有关内源寄性和外源辜性病原的耐工作，对阵可能因暴壁露而吸入炒该病原会舰引发严重缓的、可能拒致死的疾虚病的工作卧，应使用皆Clas扩sII级形或以上级孕别的生物捐安全柜。2）生物安全嗽柜采用三刊面负压，便即：整个乌装置的左各右及后部张墙体均为仓负压风道裙，使工作仓区与外部于环境形成宫气幕及箱存体双层隔钢离，同时虎工作区被茶负压包围垦，保证样血品不发生摊泄漏。30一级生旨物安全咸柜负压柜胆，气流权经操作索人员向伞内进入漆工作台发面，被朵污染的筑气流通盯过HEP灵A过滤器外团排出柜外布，没有循鲁环气流。CLAS蚂SI级BSC苏只保护操恰作人员和夹环境，适腰用于生物郑安全水平娘中对实验样网品无保护瞧要求的实辆验。31二级生储物安全斑柜属于层眼流负压僚柜由起保护惕操作人员估作用向内臣进入柜体蚕的气流和塔经过HEP太A过滤、疑流向工金作台面滴保护实帮验样品物不受交浓叉污染控的垂直后层流气菜流及保鸣护环境异的经过HEPA过滤的外狼排气流构烤成生物安物全柜的II级标准。CLAS贱SII生膏物安全柜蚀适用于1渠、2、3酒级BSL明的实验。篮它们可以盲安全保护样绩品、人素员和环答境。32二级生隔物安全宴柜分类根据结读构以及另气流（魂主要是蜡外排气荡流）分筹配的不热同它又论分A1掘、A径2型、宫B1型刺、B2阔型。A1炭、A2域型均为观70%慕气体通护过HE伴PA过恩滤器再功循环至探工作区宪，30逃%的气吹体通过腹排气口炸过滤排紧除。B桃型生物丑安全柜窑均为连狠接排气鼻系统的酱安全柜踏，其气骄流速度站最小量功至少为信0.5敞m/s伞。B1型70%邻气体通圈过排气鄙口HE穿PA过最滤器排屋除，3侧0%的机气体通涂过供气穷口HE掘PA过疏滤器再趋循环至美工作区睁。B2型为10框0%全辟排型安庆全柜，视无内部树循环气石流，可剧同时提三供生物膝性和化宜学性的锻安全控哄制。33CLA才SS毯II杂I生物倍安全柜笨（手盐套柜）是全封闭巩的、气密晓结构的通场风柜通过与柜睛体联结的电橡胶手套灿进行操作拔；柜内保蓝持至少1告20Pa稍的负压；厌供气通过星HEPA储抽入；外历排的气流割经过双层急HEPA焰过滤或经饿HEPA娃后再经燃史烧处理。CLAS制SII西I型B角SC适用慢于符合B巴SL1、电BSL批2、BS末L3、B誓SL4的刚生物实验额。343、生修物安全芽柜使用缓要点1）位置西最为宽理想的旗是，生救物安全睬柜应位尊于远离扯人员活垄动、物犁品流动裂以及可豪能会扰财乱气流抄的地方犹。2）操亚作者轨实验人爆员受过搏专业训丛练，遵秤循其原嚷理。如操作者控在移动双堡臂进出安顿全柜时，孙需要小心哀维持前面究开口处气凉流的完整秧性，双臂路应该垂直纽奉地缓慢进悄出前面的粮开口，手导和双臂伸章入到生物盗安全柜中等待大培约一分毕钟，以使江安全柜或调整完沿毕并且板让里面蜻的空气拳“扫过溉”手和孟双臂的失表面后勤，才开银始对物斩品进行泥处理。要在开洁始实验徒之前将族所有必锣需的物将品置于绕安全柜损内，以丈尽可能蜡减少双默臂进出谜前面开昌口的次生数，摆勉放的物共品呈一芒字横向素排开。同时应液注意正袍前方和世背部的阁回风隔渔栅上均缩慧不能摆冲放物品歌，以免迷堵塞回友风隔栅扛、影响喝正常风奋路。353）消毒咐可使尖用紫外灯邪、消毒剂阁，按日常紫方法应用厕；注意签生物搬安全柜制在移动橡以及更饼换过滤卵器之前景要采用鱼甲醛蒸嘉气熏蒸剩等方法战清除污嫂染。应谦该由有滥资质的错专业人峡员来清组除生物复安全柜桶的污染猪。4）明其火应尽量避京免使用明到火。否则枯易造成危蜓险。在对兆接种环进樱行灭菌时角，可以使绣用电子灭犬菌器或电碧炉，或使枯用一次性贷塑料接种挣环。5）避免料震动楼避免将离甜心机、振变荡器等仪旬器安装在但柜内，以焦免仪器震码动使积留猎在滤膜上抗的颗粒物膛质抖落，阻导致柜内耳洁净度降瘦低；366）清理实验结拜束后，攻包括仪影器设备罚在内的马生物安块全柜里顾的所有软物品、慈特别是贵培养基苦要移出朽安全柜搁。在每次兴使用前讽后，工经作台面蔽和内壁漠要用消县毒剂进呜行擦拭疲，所用虑的消毒坚剂要能咸够杀死茂安全柜悠里可能江发现的侍任何微仙生物。在每天啊实验结题束时，何应擦拭致生物安橡全柜的仓工作台郑面、四夹周以及呈玻璃的即内外侧沟等部位吹来清除辱表面的剃污染。叼在使用请漂白剂嫌等腐蚀宋性消毒趣剂后，触还必须同用无菌扇水再次纲进行擦圈拭。推荐将安钉全柜一直岂维持运行骗状态。如附果要关闭催的话，则销应在关机致前运行5接min较以净化内避部的气体螺。3738检查内咐容各项狭细则单版列1.1（离20分）思建立安全笑管理责任拨制，单位钳法人是实鲁验室安全垫第一责任击人，并授织权主管领乎导及实验胞室主任具踩体负责，苦有具体的凭职能部门矛主管单位容安全管理浊工作；设串有安全委歇员会，职赖责明确，辰委员会成惨员是由机狐构负责人李、实验室睛管理者、之感染控制殃人员、实过验技术人搭员、医学基顾问等相标关人员组尼成，上述泳各项每发坊现一处不哀合格扣4爹分；391.2（识20分）速单位建立院生物安全茶管理制度们，包括：越①实验室娃人员准入傻制度；②中感染性材华料管理制铜度；③员状工健康管就理制度；备④生物安辈全工作自萌查制度；张⑤实验室脂资料档案皂管理制度蚁；⑥生物疫安全管理胁及实验人枣员的培训悔和考核制膛度；⑦意其外事件处柿理与报告衣制度；⑧父实验室安啦全保卫制萄