迪安诊断TSPOT产品资料

迪安诊断TSPOT产品资料第1页/共31页中国独立医学实验室领导者T-spot.TB项目介绍济南迪安医学检验中心马凤美第2页/共31页第3页/共31页第4页/共31页

其它检测技术

PPD（TST）实验 影像学检查病理学诊断实验室常规检测

细菌学诊断 免疫学诊断 分子生物学诊断

原检测手段第5页/共31页假阴性：免疫力低下或HIV人群，新生儿、老弱人群，药物影响假阳性：BCG接种人群，其它分支杆菌感染，交叉污染肺外的结核感染无法明确诊断抗痨治疗疗效无法评价无法排筛结核感染，造成生物制剂或移植手术治疗后病患免疫力下降，引发结核，形成医疗事故现有检测的不足之处：第6页/共31页WHO关于血清学检测声明2011年7月20日，世界卫生组织（WHO）正式声明，要求禁止将血清学检测方法（抗原，抗体，蛋白芯片等）用于肺结核和肺外结核的诊断。WHOwarnsagainsttheuseofinaccuratecommercialserologicaltestsforpulmonaryandextra-pulmonaryTB.Asubstandardtestwithunreliableresults•TBcanbewronglydiagnosed•AserologicaltestfordiagnosingactiveTBdiseaseisbadpractice•Problemsofmisdiagnosis•Theinaccurateserologicaltestsarecostly•Sellingsubstandardtestswithunreliableresults第7页/共31页T-SPOT.TB结核感染T细胞检测全球最精确的快速结核感染检测第8页/共31页•••γ-干扰素释放实验 （IGRAs，interferon-gammareleaseassays）酶联免疫斑点技术 （ELISPOT，Enzyme-LinkedImmunoSpotassay）结核杆菌特异抗原 早期抗原靶6（ESAT-6，earlysecretedantigenictarget6） 培养滤液蛋白10（CFP10，culturefiltrateprotein10）技术背景第9页/共31页TB抗原多肽T细胞活化T细胞γ干扰素γ-干扰素释放实验（IGRAs）

γ干扰素 检测阴性

γ干扰素 检测阳性第10页/共31页γ-干扰素释放实验（IGRAs）

结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多种细胞因子（IFN-γ）。因此，检测效应T淋巴细胞可用于结核病或结核潜伏感染者的诊断。

由于效应T细胞存活时间很短，而且具有特异性，因此可以作为机体是否正处于被感染的指标，无论是否有临床症状。特点：第11页/共31页实验中采用的两个抗原(ESAT-6&CFP10)均来自结核分枝杆菌基因组RD1区域所有的卡介苗均缺失RD1区基因因此，结核感染T细胞斑点试剂盒不会受卡介苗接种影响大多数环境分枝杆菌也缺失RD1区基因（仅结核分枝杆菌复合群存在RD1区）技术背景ESAT-6与CFP10抗原第12页/共31页病人需就医两次结果报告时间48-72小时灵敏度有限，尤其是免疫低下者 特异性高与卡介苗有交叉反应与非结核分支杆菌有交叉反应主观性判断单次血液测试第二日报结果敏感度95.6%，免疫低下者仍有效特异性97.1%不受卡介苗接种影响与非结核分支杆菌无交叉反应每例样本均有阴阳对照第13页/共31页••••美国（CDC和儿科学会）；加拿大（加拿大结核病委员会）；巴西（卫生部）英国（国家卫生和临床协会）；法国（国家卫生局）；西班牙（西班牙肺病和胸部手术协会）；德国（德国抗结核病中央委员会）；意大利；瑞士（瑞士肺科协会）；荷兰（实用结核病控制委员会）；丹麦（丹麦肺部医学会）；挪威（挪威公共卫生协会）；芬兰（国家卫生和福利协会）；爱尔兰（国家结核病咨询委员会）；葡萄牙；捷克共和国；斯洛伐克；波兰；保加利亚；克罗地亚澳大利亚（国家结核病咨询委员会、传染病协会和澳大利亚风湿病协会）；沙特阿拉伯；南朝鲜；日本（日本结核病预防协会）

WHO和ECDCγ-干扰素释放实验（IGRAs)在欧美国家得到全面 推广，并被写入诊疗指南第14页/共31页例1：英国结核诊疗指南•TheNationalInstituteforHealthandClinicalExcellence(NICE)releasednewclinicalguidelinesfortheuseofinnovativeTBbloodtestscalledinterferon-gammareleaseassays(IGRAs)fordiagnosinglatenttuberculosisinfection(LTBI)on24thMarch2011.•英国国家健康与临床卓越研究所（NICE）发布 了新的临床指南，指出用创新TB全血实验，即

γ-干扰素释放实验，来诊断潜伏性结核感染第15页/共31页例2：英国皮肤病学诊疗指南•2009年英国皮肤病学中TNF-α治疗前结核筛查指南：第16页/共31页例3：瑞士抗TNF-α治疗前筛查潜伏感染指南Expertsinrheumatology,gastroenterologyandpneumologyagreedthat:1.Adefiniteriskoftuberculosisexistswithanti-TNFagents,andallpatientsshouldbescreenedfortuberculosisandlatenttuberculosisinfectionpriortoanyanti-TNF-atherapy.2.Thescreeningshouldbebasedonhistory,chestx-rayandanIGRAtest.瑞士关于抗TNF-α治疗前筛查结核潜伏感染的指南中建议:1.要求所有接受抗TNF-α治疗患者在治疗前都应该进行结核病检测和潜伏感染的筛查2.筛查应该基于既往史，X摄片和γ干扰素释放实验（T-SPOT.TB方法）第17页/共31页用BDCPT管或Ficoll提取液收集外周血单个核细胞 过夜孵育，洗板，加入酶标二抗结核特异抗原（ESAT-6/CFP10）刺激结核特异的效应T淋巴细胞使其分泌γ-干扰素加入底物工作液，用肉眼或放大镜计算斑点数效应T淋巴细胞分泌的γ-干扰素与膜板预包被的抗γ-干扰素抗体结合并固定在细胞周围1个斑点=1个效应T细胞实验过程第18页/共31页阴性结果阳性结果阳性对照（PHA）实验结果

空白对照

特异性94.1%

抗原A ESAT-6

抗原B CFP10灵敏度95.3%第19页/共31页第20页/共31页第21页/共31页第22页/共31页临床应用及科室第23页/共31页

临床应用1、结核病辅助诊断/疗效评价•••“菌阴”结核病患者的辅助诊断肺外结核的鉴别诊断抗痨治疗的疗效评价2、免疫力低下/受抑制患者的结核诊断/感染筛查••使用生物制剂/免疫抑制剂患者的结核感染筛查HIV感染者/肾透析患者/器官移植患者3、儿童结核病的辅助诊断4、结核密切接触者/高危人群的结核感染筛查•结核病患者的家属/医务工作者/监狱囚犯5、接触追踪第24页/共31页肺内/外结核辅助诊断2周以上不明原因发热病人的结核感染排筛诊断阴性结果95%以上可排除结核感染结核/感染/呼吸科第25页/共31页生物制剂/免疫抑制剂使用前的结核筛查肺结核与肺间质病的鉴别诊断“结脑”和“狼脑”的鉴别诊断写入由全国风湿病学权威署名的英夫利西单抗治疗前结核预防与管理专家建议风湿免疫科第26页/共31页腹水待查肠结核的鉴别诊断发热待查生物制剂治疗前结核筛查（克罗恩病，炎症性肠病）消化科第27页/共31页移植，HIV感染者并发结核神经内科，结核性脑膜炎的辅助诊断肾内科，肾结核的鉴别诊断，血透患者的结核筛查内分泌科，糖尿病患者的结核筛查血液科，血液病治疗前的结核筛查（血液病合并活动性结核）生殖中心，盆腔结核造成不孕不育，试管婴儿手术前的结核排筛骨科，骨结核诊断其他科室第28页/共31页合并结核的相关疾病艾滋：据报道，艾滋病患者合并结核病感染者为15.9%～50%。HIV的流行已成为全球结核病发病率及死亡率第三次回升的主要原因，而结核病也是艾滋病患者最常见的机会感染和致死病因。风湿病：日前判断风湿病患者是否存在LTBI，除通过详细询问病史、行x线胸片检查外．主要依靠PPD试验的结果。而大部分患者在接受肿瘤坏死因子(TNF-α)拮抗剂治疗之前往往已接受免疫抑制治疗，包括甲氨蝶呤(MTX)、糖皮质激素等，这导致PPD试验假阴性率升高。糖尿病：我国9240万成年人有糖尿病，1.482亿成年人处于糖尿病前期。糖尿病是活动性结核的一个中度甚至高强度的危险因素。可能是因为持续的高血糖损害了针对结核杆菌的机体免疫。血液病：血液病合并活动性结核发生率约为该发病率的15.5倍。因自身免疫功能低下,大部分患者长期用免疫抑制剂，PPD试验阴性占多数，同时合并其他感染，使误诊率较高。抗TNF治疗：广泛应用于免疫介导的炎性疾病(immune—mediatedinflammatorydiseases，IMID)，如类风湿关节炎(RA)、强直性脊柱炎(AS)、银屑病关节炎、克罗恩病等。其它疾病：肿瘤、晚期肾病、器官移植、肝硬化、肺隐球菌病、肺结