GCMS方法检测全血中种农药残留

GC/MS方法检测全血中15种农药残留主要内容研究背景1应用范围2材料与方法33实验结果44结果讨论与分析35CompanyLogo研究背景

大量研究表明，农药在大量使用后会在环境中存在一定的残留，农药的化学性质和使用量不同，残留的量也不同。在国内外研究中，关于农药在生物样本中的残留主要集中在有机氯、有机磷、拟除虫菊酯类和除草剂四大类。在我国急性和慢性中毒时有发生，为确定突发化学中毒事件的性质，需要我国人群除草剂残留量的背景值作为定性的参考依据。因此，作为国家科技支撑计划课题(2006BAI06B02)的一部分，为下一步建立常用除草剂人群残留量的参比值和全国范围的具有代表性的生物样品库提供技术支持和可靠数据。该方法较目前常用方法灵敏度有很大提高，适用于血液中农药含量较低的样品检测。CompanyLogo应用范围

人血液中15种常用农药的样品提取方法和GC/MS定性、定量检测方法。有机磷农药 甲拌磷、二嗪农、阿特拉津、乐果、甲基对硫磷、马拉硫磷有机氯农药氯丹、a-硫丹、b-硫丹拟除虫菊酯类农药联苯菊酯、甲氰菊酯、三氟氯氰菊酯除草剂2,4-D丁酯、扑草净、丁草胺CompanyLogo试剂甲醇、二氯甲烷15种农药标准品（甲拌磷、二嗪农、阿特拉津、乐果、2,4-D丁酯、扑草净、马拉硫磷、甲基对硫磷、丁草胺、氯丹、α-硫丹、β-硫丹、联苯菊酯、甲氰菊酯、三氟氯氰菊酯）保护剂古洛糖酸内酯（sigma试剂公司99.75%）CompanyLogo仪器Angilent6890-5973气相色谱-质谱联用仪色谱柱DB-35MS（30m×0.25mm×0.25μm）浓缩仪（氮气吹干）涡旋振荡器（转速可调节）超声仪离心机CompanyLogo标准保护剂溶液的配置准确称取100mg古洛糖酸内酯，用甲醇定容稀释至50ml容量瓶中，轻轻震荡混匀，即配制成浓度为2mg/ml的保护剂溶液；-4℃低温保存。CompanyLogo标准液的配置化合物名称 第一水平第二水平第三水平第四水平第五水平扑草净48204080马拉硫磷48204080丁草胺48204080联苯菊酯48204080α-硫丹2040100200400β-硫丹2040100200400乐果4080200400800根据各化合物的灵敏度不同，使用保护剂溶液配置标准溶液和标准系列，各化合物浓度水平(μg/L)如下：CompanyLogo标准液的配置化合物名称 第一水平第二水平第三水平第四水平第五水平甲拌磷102050100200二嗪农102050100200阿特拉津1020501002002,4-D丁酯102050100200甲基对硫磷102050100200氯丹102050100200甲氰菊酯102050100200三氟氯氰菊酯102050100200根据各化合物的灵敏度不同，使用保护剂溶液配置标准溶液和标准系列，各化合物浓度水平(μg/L)如下：CompanyLogo

涡旋震荡、超声提取冷冻破乳、离心分层氮吹浓缩、微量定容

移除浓缩液，供仪器检测

样品预处理方法CompanyLogo样品预处理（1）涡旋震荡、超声提取将加有1.5ml全血的螺口具塞15ml试管中，缓慢加入6ml二氯甲烷。在涡旋振荡器上涡旋振荡5min（即使发生乳化现象，仍要继续震荡），转速以液面不接触到试管塞为准。放入清洗超声仪中超声辅助提取20min。CompanyLogo样品预处理（2）冷冻破乳、离心分层将超声后的试管放入-20℃以下的冰箱中冷冻20-30min。冷冻后取出放置至完全融化后，用高速离心机以3000rpm离心15min，至完全分为三层。将上层液体倒入废液池内，用一只未使用过的空白吸管将中间层固体（沉淀蛋白）轻轻挤压到试管一侧，然后将下层提取液全部转移至另一支洁净普通玻璃试管中。注：转移过程中一定要缓慢，以免将其他杂质一同倒入试管中。CompanyLogo样品处理（3）氮吹浓缩、微量定容

将存有提取液的试管在浓缩仪上吹至近干后，用150μl甲醇保护剂溶液溶解，最大转速涡旋振荡2min，移入含有250μl内插管的进样小瓶中，供气相色谱-质谱联用仪检测。在氮吹浓缩的过程中要注意氮气的流速不能太快，以免导致目标化合物的丢失，但也不宜太慢，会浪费时间。浓缩过程中温度控制在50℃，吹干时间控制在10min。CompanyLogo色谱、质谱条件色谱、质谱条件仪器检测方法Text进样量进样方式溶剂延迟离子源温度四级杆温度载气进样口温度色谱程序色谱柱Tet电离电压扫描模式CompanyLogo色谱条件色谱柱：DB-35MS（30m×0.25mm×0.25μm）；载气：高纯氦气，流速1ml/min；进样口温度：280℃；色谱程序：120℃（保持1.00min）20℃/min240℃（保持0.00min）10℃/min280℃（保持4.00min）20℃/min320℃（保持6.00min）共23min。进样量：1μl；进样方式：脉冲不分流进样/不分流进样；CompanyLogo质谱条件电离电压：70eV；溶剂延迟：6.5min；离子源温度：230℃；四极杆温度：150℃；CompanyLogo选择离子参数化合物名称定量离子定性离子甲拌磷260260、231二嗪农179179、304阿特拉津200200、215乐果125125、2292,4-D丁酯276276、162扑草净241241、184甲基对硫磷109109、125CompanyLogo选择离子参数化合物名称定量离子定性离子马拉硫磷173173、127丁草胺176176、160氯丹375375、373α-硫丹241241、265β-硫丹241241、265联苯菊酯181181、166甲氰菊酯181181、265三氟氯氰菊酯181181、208CompanyLogo实验结果1方法的线性关系、检出限、定量下限2方法的准确度、精密度

CompanyLogo离子选择扫描模式图谱CompanyLogo结果讨论笼与分析样品提取净化条件的优化

保护剂的应用仪器条件的优化提取方法的确定超声提取方法的确定冷冻破乳方法的应用

确定提取溶剂体积保护剂的效果评价及用量的确定

色谱柱的选择进样方法的选择

定量定性离子的选择和分组分段扫描模式的确定

运行时窝间的确团定Comp身any钳Logo结果讨需论与分粘析提取方法的确定综合考虑液液提取固相萃取Com蹈pan现yL子ogo提取方法筒的确定固相萃取Agil堂ent区C18：2,4令-D丁酯和愈联苯菊尺酯回收械率较低Oas绩is世HLB饭C1奶8固相萃取餐小柱氨基柱苯基柱氧化铝柱Comp厚any配Logo提取方僵法的确泰定液液提取正己烷乙酸乙券酯正己烷-乙酸乙炕酯正己烷-乙腈二氯甲窗烷：提脑取回收晨率效果协较好，梯且只需蠢要一次铜提取，塌就能满螺足回收陷率要求言，只是烟毒性较窄大，操雪作时需耕谨慎。Com丙pan洋yL凯ogo保护剂绳的使用在采用GC和GC-M房诚S对不同样前品进行农穿药残留检诸测分析时披，经常会逢发现有些劈燕待分析物盈灵敏度较屠低，或是伍峰型很差谜，拖尾严余重，积分各结果偏差菠较大。这些现孕象可能预是由待够分析物拥在进样害口的高矮温环境我中降解行产生，吧或是待荐分析物游在进样泡系统的饼活性位块点滞留耻引起的拜向毛细栗管移动馅减慢导兴致的。Com返pan但yL组ogo保护剂衫的作用根据相关客参考文献贵，对保护傍剂用于补呈偿基质效径应进行了尿研究，认处为古洛糖贵酸内酯(Gul素onic故aci元dγ-强lac风tone油)具有良好女的补偿作匀用。适量的方古洛糖扶酸内酯件对农药盖有较好社的保护品作用，弃能够有绵效地补征偿因系碧统中存钓在的活均性位点洞引起的吹基质干黄扰效应孩，明显伙改善峰煎型，提调高灵敏滋度和定债量的准鲁确性。Comp枝any增Logo保护剂门使用量仗的确定Com赖pan接yL奖ogo超声提取柏方法的确蚊定在采用液泄液提取时艘，加入有岁机溶剂后姻，在涡旋洗混匀过程岩中会发生锡严重的乳智化现象，束涡旋振荡课提取回收恶率普遍较涉低，溶剂纲回收体积集也只能达岔到加入量贴的1/2，通过兼实验发牧现，涡套旋震荡份发生乳徒化后，称再采用肥超声辅痕助提取浮可以明航显提高终回收率恐，但仍谱无法达渔到检测枯要求，烈主要是扔溶剂回润收率低图的问题宅仍然没饭有改善左。要注意半的是，绳在采取捏超声措谎施时，嚼提取容就器要使侄用具塞社玻璃试林管，最浪好是螺荒口耐有邮机溶剂忍的玻璃患试管，成因为玻降璃试管趴可以有义效传递禁超声能革量，而躺且在超教声过程播中，产侍生的热剃量会导扣致容积旺蒸汽压诉增大，株以至会只冲出普担通试管摊塞。Com富pan择yL忘ogo冷冻破盾乳方法继的应用在采用漏溶剂液曾液提取暴过程中奖，由于腊乳化现妈象的产圆生，会哪影响溶沙剂的回史收量，赞例如加括入6ml有机溶流剂，高虑速离心拔后只能态取出3ml，甚至扣更少。宇这会直碗接影响赞目标化笼合物的惕提取效色率。根据相努关文献秋和本次评实验验如证结果淹，采用佳低温冷灯冻的方趟法，可限以有效钢破除乳衬化现象胡，提高适离心后踏提取溶拆剂的回话收量，员从而可衡以有效惑提高回俯收率。通过多学次实验棚结果认劳为，在将温度低蔬于20℃持续冷州冻大于20mi央n时，溶顽剂回收促效果较攀好。在括本次实谜验中加建入6ml提取溶狐剂回收声量≥5ml。因此蝴也提高泥了目标道化合物盲的回收检率。Com垂pan楼yL亩ogo色谱柱的梨选择根据大多扣文献农药陷检测大多堤使用HP-5或DB-5的毛细势管柱，剪但本次俗实验欲什测定的损化合物也机极性当范围较型宽，而加且其中乒含有极弱性较大苗、检测桶过程中切较不稳执定的有洋机磷类隙农药，辆在检测深过程中摆这些化采合物会给有轻度果拖尾现属象。另外，易样品中榴还含有漏大量的妄脂肪酸曲、油酸那、胆固茧醇等非集极性化厚合物，阶采用非杀极性柱烘或是极贫性较大祝的毛细迈管柱，蚕分离效遇果都不采理想。因此本冒次实验盒采用中竭等极性某的DB-六35的毛细俘管柱，凑是综合往考虑各蔬方面因耀素的决狸定的。骡结果证煎明分离腾效果比柳较理想狐。Com旱pan那yL埋ogo进样方式修的选择进样方式不分流进王样脉冲不融分流进涨样为提高咬灵敏度托，增加谅化合物绳的进样适量，采济用脉冲换不分流错进样，绍会得到走较好效夫果。Comp便any你Logo质谱扫描碑离子选择巩的原则（一）续尽量选叶择主要旗离子碎着片；（二）定肢量定性离杂子不能低肯于2个；（三）尽诸量避开基立质成分中帐相同保留张时间段上及也存在的莲干扰离子做；（四）尽行量回避柱缸流失离子钟碎片。Comp大any蔽Logo运行时蒜间的确炼定对血液称样品进卫行农药候残留测亩定时，珍一定要迷注意，串除了目掩标化合嘱物以外哥其他化储合物的裹保留时散间，例肉如胆固指醇的保抗留时间伐明显晚彩于待测鸡化合物靠，如果膊第一次搞进样没殖有运行享完全，耍将会在螺以后的挂进样中酱出现鬼日峰，而夹且是保剑留时间蔬不定，罢会影响狸定量。Comp彩any碎Logo方法总结优点灵敏度拐较高、录定量下柄限较低唐、操作节简单、榆成本低应用范零围较宽桌，包含辣常用的坟四大类15种常用农泪药，有利任于中毒