多功能酶标仪基本操作规程

多功能酶标仪基本操作规程一、可见与紫外光原始吸光值的直接测定方法1、首先打开连接酶标仪的电插板上的全部开关。打开酶标仪主机背面电源线上端的开关。2、再打开电脑开关。（注意，一定要先开仪器，后开电脑，以免仪器连接出现问题。）3、在电脑主屏幕上选择［Magellan6］。4、仪器自检后，酶标板托架自动伸出（注意仪器前部不要放置物品，以免档住托架的伸出）。将酶标板按数字正确的方向（A1位于左上角）放在托架上。5、点击仪器下部最右侧的［moveplatein］图标，酶标板将自动进入仪器中。（注意：千万不要用手将酶标板推入仪器，造成仪器损坏）。6、在屏幕上选Startmeasurement。点击绿色箭头。7、在SelectaFile窗口左上角选ObtainRawDate然后点击绿色箭头。8、在plate栏中的platedefinition下拉条中，对板的类型进行选择。酶标的吸光度测定，一般情况下选xxxxxxxFlatTransparent（x孑L，平底，透明板）。（注意测定紫外吸收时要使用可以透过紫外光的透明板）如果板要加盖子，就要再选中Platewithcovero9、在Measurements栏内双击Absorbance，出现Absorbance的对话框。10、在Absorbance的对话框中：⑴在Wavelength栏中Measurement项输入测定波长值；Reference项，在需要扣除背景波长时选中并输入背景波长值。一般情况不选.⑵在Multiplereadperwell栏中对于吸光值的测定可不选⑶在Read栏中：Numberofflashes项一般选10；Settletime（使平静时间）项对于96或384孔板一般选0;对于其他孔数的板可考虑输入适当的值；孔数越少的板，Settletime设置时间要较长,以防止在测定过程中板移动距离大，对液面平稳的影响。⑷在Label栏中Name后输入你为此块板自定义的英文名；也可不设置。11、在Partofplate栏中，用鼠标左键拉框，选择要测定的样品孔（使待测定的样品孔变为黄色），（注意：待测孔只可横向或纵向连续选择，不可以被间断）。如果选择错误需要更改，不要做任何删除，只要再直接重新选择即可。点击本栏中的Detail对所选的样品孔进行确认后，点击OK，（如果选孔有错误，选择Cancel返回上页再重复以上操作。）12、点击OK后，箭头变绿，点击绿色箭头，在Measurement的workspace处输入（日、月、年-自定义文件名wsp）再点击Start，仪器开始自动测定。13、测定结束后，点击File选择print,直接打印测定参数与结果，或在最上方Edit选择CopytoExcel，然后打开下方出现的Excel表（显示为板式数据）并打印结果。14、关机，退出当前界面，点击左下角ExitMegellan回到主屏幕。关电脑，关仪器电源和插板电源。二、荧光值的直接测定方法1、首先打开连接酶标仪的电插板上的全部开关。打开酶标仪主机背面电源线上端的开关。2、再打开电脑开关。（注意，一定要先开仪器，后开电脑，以免仪器连接出现问题。）3、在电脑主屏幕上选择［Magellan6］。4、仪器自检后，酶标板托架自动伸出（注意仪器前部不要放置物品，以免档住托架的伸出）。将酶标板按数字正确的方向（A1位于左上角）放在托架上。5、点击仪器下部最右侧的［moveplatein］图标，酶标板将自动进入仪器中。（注意：千万不要用手将酶标板推入仪器，造成仪器损坏）。6、在屏幕上选Startmeasurement。点击绿色箭头。7、在SelectaFile窗口左上角选ObtainRawDate然后点击绿色箭头。8、在plate栏中的platedefinition下拉条中，对板的类型进行选择。荧光酶标的测定，一般情况下选xxxxxxxFlatblack（x孔，平底，黑板。6孔板测定时没有黑板可选,可选择6孔,平底，透明板）。（注意在选择底部测定时模式时要选择底部透明的黑板）如果板要加盖子，就要再选中Platewithcovero9、在Measurements栏内双击FluorescenceIntensity，出现FluorescenceIntensity的对话框。10、在FluorescenceIntensity的对话框中：⑴在Wavelength栏中:Excitation项输入激发波长值；Emission项输入发射波长值⑵在Mode栏：根据被测物质的性质进行适当选择。Top为顶部测定，适合于透明均匀的液体的荧光测定Bottom为底部测定，适合于贴壁细胞类的荧光测定⑶在Integration栏：Logtime（滞后时间）除在做时间分辨荧光测定时需要选择，一般荧光测定时不选。Integrationtime（整体测定时间）一般在20〜40ps范围内选择⑷在Multiplereadperwell栏：对于透明均匀的液体的荧光测定可不选。对于贴壁细胞类的荧光测定要选择。选择形式，参看栏目中的图形。⑸在Read栏中：Numberofflashes项一般可选3~5次；Settletime（使平静时间）项对于96或384孔板一般选0；对于其他孔数的板可考虑输入适当的值；孔数越少的板，Settletime设置时间要较长；以防止在测定过程中板移动距离大，对液面平稳的影响。⑹在Gain（增益）栏：根据实验要求的不同进行选择Manualgain（人工增益）项：要做多块板之间的数据比较时选择该项;固定一个合适的增益值，选择范围在1〜225之间.Optimal（自动最佳）项:仪器根据实时测定时该板上的最强荧光值,自动给出合适的增益.一般在作单板内的数据比较时选择该项Calculatedformwell项:以一个孔内的阳性物荧光值为比较时，选择该项.在Label栏中Name后可输入你为此块板自定义的英文名；也可不设置。11、在Partofplate栏中，用鼠标左键拉框，选择要测定的样品孔（使待测定的样品孔变为黄色），（注意：待测孔只可横向或纵向连续选择，不可以被间断）。如果选择错误需要更改，不要做任何删除，只要再直接重新选择即可。点击本栏中的Detail对所选的样品孔进行确认后，点击OK，（如果选孔有错误，选择Cancel返回上页再重复以上操作。）12、点击OK后，箭头变绿，点击绿色箭头，在Measurement的workspace处输入（日、月、年-自定义文件名wsp）再点击Start，仪器开始自动测定。13、测定结束后，点击File选择print，直接打印测定参数与结果，或在最上方Edit选择CopytoExcel，然后打开下方出现的Excel表（显示为板式数据）并打印结果。14、关机，退出当前界面，点击左下角处ExitMegellan退回到电脑主屏幕。15、关电脑，关仪器电源和电插板电源。三、可见、紫外、荧光测定的标准曲线法1、开机：首先打开电插板上的全部开关。打开酶标仪主机背面电源线上端的开关。打开电脑开关。（注意，一定要先开仪器，后开电脑，以免仪器连接出现问题。）2、在电脑主屏幕上选择［Magellan6］。3、放酶标板：仪器自检后，酶标板托架自动伸出（注意仪器前部不要放置物品，以免档住托架的伸出）。将酶标板按数字正确的方向（A1位于左上角）放在托架上。点击仪器下部最右侧的［moveplatein］图标，酶标板将自动进入仪器中。（注意：千万不要用手将酶标板推入仪器，造成仪器损坏）。4、创建方法：4.1在屏幕上选。Create/editamethod点击绿色箭头，4.2选New然后点击绿色箭头。4.3选板型：在plate栏中的platedefinition下拉条中，可见、紫外吸光度的酶标测定，一般情况下选xxxxxxxFlatTransparent（x孑L,平底，透明板）。（注意测定紫外吸收时要使用可以透过紫外光的透明板）如果板要加盖子，还要选中Platewithcovero荧光的酶标测定，一般情况下选xxxxxxxFlatblack（x孔，平底，黑板。6孔板测定时没有黑板可选,可选择6孔,平底，透明板）。（注意在选择底部测定模式时要选择底部透明的黑板）如果板要加盖子，就要再选中Platewithcover。5、测定方法和参数的选择：在Measurements栏内⑴选择可见、紫外吸光度的酶标测定：双击Absorbance出现Absorbance的对话框。在Absorbance的对话框中：①在Wavelength栏中Measurement项输入测定波长值；Reference项，在需要扣除背景波长时选中并输入背景波长值。一般情况不选.②在Multiplereadperwell栏中对于吸光值的测定可不选在Read栏中：Numberofflashes项一般选10；Settletime（使平静时间）项对于96或384孔板一般选0；对于其他孔数的板可考虑输入适当的值；孔数越少的板，Settletime设置时间要较长,以防止在测定过程中板移动距离大，对液面平稳的影响。在Label栏中Name声输入你为此块板自定义的英文名；也可不设置。⑵选择荧光的酶标测定：双击FluorescenceIntensity，出现FluorescenceIntensity的对话框。在FluorescenceIntensity的对话框中：在Wavelength栏中:Excitation项输入激发波长值；Emission项输入发射波长值在Mode栏：根据被测物质的性质进行适当选择。Top为顶部测定，适合于透明均匀的液体的荧光测定Bottom为底部测定，适合于贴壁细胞类的荧光测定在Integration栏：Logtime（滞后时间）除在做时间分辨荧光测定时需要选择，一般荧光测定时不选。Integrationtime（整体测定时间）一般在20〜40ps范围内选择在Multiplereadperwell栏：对于透明均匀的液体的荧光测定可不选。对于贴壁细胞类的荧光测定要选择。选择形式，参看栏目中的图形。在Read栏中：Numberofflashes项一般可选3~5次；Settletime（使平静时间）项对于96或384孔板一般选0；对于其他孔数的板可考虑输入适当的值；孔数越少的板，Settletime设置时间要较长；以防止在测定过程中板移动距离大，对液面平稳的影响。在Gain（增益）栏：根据实验要求的不同进行选择Manualgain（人工增益）项：要做多块板之间的数据比较时选择该项;固定一个合适的增益值选择范围在1〜225之间.Optimal（自动最佳）项:仪器根据实时测定时该板上的最强荧光值,自动给出合适的增益.一般在作单板内的数据比较时选择该项Calculatedformwell项:以一个孔内的阳性物荧光值为比较时，选择该项.在Label栏中Name后可输入你为此块板自定义的英文名；也可不设置。6、酶标板的样本布局①在WellAssign对话框中各个符号所表示的意义：SM（Sample）样品BL（Blank）空白ST（Standard）标准PC（Positivecontrol）阳性对照

NC(Negativecontrol)阴性对照LPC(LowPositivecontrol)弱阳性对照HPC(HighPositivecontrol)强阳性对照BF(Polarizationreferencebuffer)偏振参照缓冲液RF(Polarizationreference)偏振参照CL(Calibrator)校正因子②在Partofplate栏中，首先用鼠标左键拉框，选择要测定的不同物质预备放置的孔（使待放置的孔变为黄色），确认Expgroup号（同一类型的实验或一个系列的标曲为一组）和Fixnumbe-复孔数，然后单击以上相应的表达符号，鼠标右键选Fillselection使该孔加上相应的标记。（例：某些孔准备放置标准品，在选孔后，单击WellAssign对话框中ST，标右键选Fillselection这些孔就被加上了ST的标记）孔中的符号表示：STx-y1../zST：标准X:第n个实验组（Expgroup号）Y:第n个实验组的第几个标准（ID-num）Z:重复数，1/z:重复数的第一个（Fixnumbe）准孔浓度的输入7、标在platelayout栏中点击Conc，随后，在跳出的对话框中依次输入相应的标准系列浓度值和单位。STx-y1../z准孔浓度的输入8、标准曲线类型的确认在concentration栏中点击standardcurve，点击analysistype，在该项下选择曲线的类型Pointtopoint（点对点）（最少需要两个邻近基本点）LinearRegression（线性回归）Non-linearregression（非线性回归）CubicSpline（样条函数）Polynomial（多项式）AkimaFourParameters（四参数）FourParameters-Marquardt（四参数Marquardt算法）FiveParameters-Marquardt（五参数Marquardt算法）Lo