临床微生物标本采集规范专家讲座

世界人口死因感染性疾病：25％

抗生素时代，感染仍是人类健康主要“杀手”临床微生物标本采集规范专家讲座第1页高死亡率原因新现传染病：近30年，已经有近30种新病原生物，其中包含HIV、SARS、禽流感和各种新型肝炎病毒等引发各种疾病。再现传染病：以往已被认为得到很好控制传染病，如结核、登革热等流行和传输又重新抬头。临床微生物标本采集规范专家讲座第2页低免疫人群急剧上升：艾滋病、移植医学国际间交通快速便捷使得当今疾病传输无国界概念。气候变暖，人口快速增加，城市化进程加紧，伴随人口密度和人口流动增加，清洁水源不足和卫生设施不完善，以及生态破坏造成人与媒介生物接触机会增多（动物微生物向人类攻击）等。人类还没有足够能力战胜病原体。病原生物抗药性产生速度已超出新型抗生素创造速度（细菌耐药性快速发展)。临床微生物标本采集规范专家讲座第3页

提升感染样本送检率加强细菌耐药监测

关注细菌性疾病病原学诊疗，已成为临床工作者、临床微生物与微生态工作者、药学家和从事感染控制工作者共同关注热门焦点。临床微生物标本采集规范专家讲座第4页成功治疗感染症原因‧成功分离病原菌–标本搜集、运输、保留–标本处理方法–检验医师专业知识‧医师判读病原菌培养结果‧选择适当治疗方法临床微生物标本采集规范专家讲座第5页临床医生要合理用好两种数据1.当地域、本单位病原流行病学资料，指导经验用药。（微生物室、院感科、临床科室）2.药敏试验汇报，纠正经验用药。重视病原学检验,尽可能在应用抗菌药品之前留取标本送检。以提升病原学诊疗率,为选药和调整药品提供依据。临床微生物标本采集规范专家讲座第6页“正确微生物学检验始自正确标本采取。临床医师、护师及检验技师都必须通晓其要领。”

著名临床微生物检验专著ManualofClinicalMicrobiology主编PatrickMurray临床微生物标本采集规范专家讲座第7页标本采集和运输是细菌培养成功最最主要关键但因为标本采集和运输常由护士或医生或病人自己完成，所以也是最不轻易做好事情，而且不知道问题所在之处，造成后果是:临床医生最不能接收问题:阳性率低临床微生物标本采集规范专家讲座第8页国内微生物标本采集当前存在问题：

标本送检率低从全国来看，抗感染治疗前，送检相关标本可能只占应送标本二分之一左右，与抗菌药品应用率之高形成鲜明反差。一些医师在经验性治疗受挫后方送标本，此时已失去阳性培养机会。标本有缺点正确搜集各种临床标本，关注特检标本采样与送检方法和条件，是完成病原学诊疗先决条件。临床微生物标本采集规范专家讲座第9页微生物让人类步步为营， 我们应该追求： “准确病原学诊疗” “针对性病原学治疗”

正确微生物标本采集和运输，是准确病原学诊疗前提！临床微生物标本采集规范专家讲座第10页标本规范化采集主要性正确采集、处理与运输细菌培养标本直接关系到致病菌培养正确性与阳性率高低，是临床细菌检验成功关键。标本质量好坏直接影响诊疗结果正误，不妥标本可造成假阴性、假阳性结果出现，所以标本采集与处理规范化是准确、及时地向临床提供主要临床感染信息基础。好微生物检验标本可提升试验室工作效率及病患照料质量，降低医疗成本。临床微生物标本采集规范专家讲座第11页怎样提升细菌阳性检出率标本采集时机标本采集方法标本质与量标本运输与保留镜检筛选合格标本高质量、各种分离培养基培养环境合理收费制度临床微生物标本采集规范专家讲座第12页微生物样本采样基本标准

1.及时采集微生物标本作病原学检验

2.在抗菌药品使用前采集标本

3.采样时严格执行无菌操作

4.采样后马上送检甚至床旁接种尤其是厌氧培养

5.棉拭子标本宜用运输培养基

6.混有正常菌群污染标本，不可置肉汤培养

7.标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂

8.送检标本应注明起源和检验目标临床微生物标本采集规范专家讲座第13页标本搜集部位

非无菌部位无菌部位眼血液耳脊髓液呼吸道胸膜液肠胃道腹膜液泌尿道关节液皮肤毛发临床微生物标本采集规范专家讲座第14页一、血培养标本采集规范临床微生物标本采集规范专家讲座第15页相同规模医院血培养数•国内多数三甲综合医院2～10瓶/天•复旦大学中山医院20～50瓶/天•香港玛丽医院200瓶/天•台湾大学医院300瓶/天•我院约10～20瓶/天临床微生物标本采集规范专家讲座第16页（一）血培养检测采血指征临床上疑为败血症、脓毒血症或其它血液感染患者1.发烧（≥38℃）或低温（≤36℃）

2.寒战

3.白细胞增多（>10×109/L，尤其有“核左移”未成熟或杆状核白细胞增多）

4.粒细胞降低（成熟多核白细胞<1×109/L）

5.血小板降低

6．皮肤粘膜出血

7．昏迷，休克

8．多器官衰竭9.CRP升高在评定可疑新生儿败血症时，除发烧或低烧外，极少培养出细菌，应该补充尿液和脑脊液培养。

对入院危重感染患者未进行系统性抗菌药品治疗之前，应及时采集血培养。临床微生物标本采集规范专家讲座第17页（二）血培养检测消毒程序

1.皮肤消毒程序：严格执行三步法（预防皮肤寄生菌污染）

（1）用75%酒精擦拭静脉穿刺部位待30s以上；

（2）然后用1%-2%碘酊作用30秒或10%碘伏作用60秒，从穿刺点向外画圈消毒，至消毒区域直径达3cm以上；（3）最终用75%酒精脱碘，待酒精挥发干燥后采血。

新生儿及对碘过敏患者，只能用75%酒精消毒60s，待穿刺部位酒精挥发干燥后穿刺采血。

2.培养瓶消毒程序：

（1）用75%酒精消毒血培养瓶橡皮塞，作用60秒。

（2）用无菌纱布或无菌棉签去除橡皮塞表面剩下酒精，然后注入血液。

临床微生物标本采集规范专家讲座第18页要求：严格无菌操作，不允许在皮肤消毒后用手按压静脉，除非带有没有菌手套。不推荐采血和接种血培养瓶更换注射器针头，采取真空采血装置能降低污染率。说明：不论采取何种采血方法，血培养可接收污染率通常是≤3%。研究表明，经过专门培训熟练抽血者采集血培养污染率为3%，而未经培训住院医生和护士污染率则达11%。所以对临床护士就血培养标本采集进行专门、严格培训是非常必要。临床微生物标本采集规范专家讲座第19页（三）血培养标本采集和运输1.采集时间要求：对怀疑菌血症、真菌血症患者，在考虑使用抗菌药品之前，应马上采集血培养标本。必须同时或间隔短时间内采集2套（每套包含1只普通血培养瓶及1只厌氧血培养瓶）以上血培养标本。说明：试验数据表明细菌入血后约1小时，寒战和发烧开始出现2小时内，此时为采集血培养标本进行病原菌培养最正确时机。在不一样时间点采血只有在以下情况才有必要：疑似感染性心内膜炎或其它血管内（如导管相关性感染）感染患者连续性菌血症。临床微生物标本采集规范专家讲座第20页你认为对吗？

为了提升病人血培养阳性率，最好抽血时间是：A.发烧开始时

B.寒战开始时

C.发烧最高峰时

D.寒战结束时

E.预计寒战发烧前

临床微生物标本采集规范专家讲座第21页细菌量体温时间上升幅度临床微生物标本采集规范专家讲座第22页2.采集部位要求：从两侧上肢静脉采血，“双瓶双侧”采血培养。最少做到“双侧双瓶”。必要时从下肢静脉采血做第三套血培养。说明：不提议采集（1）动脉血，因其诊疗价值没有比静脉血更大；（2）静脉留置导管，因其常伴有高污染率。假如必须从留置导管内采血，也应同时从外周静脉采集另外一个血培养标本，以帮助阳性结果判读。临床微生物标本采集规范专家讲座第23页所谓“双瓶双侧”，是指从一个部位采血接种一套培养瓶，再从另一部位采血接种另一套培养瓶。（通常是双臂）所谓“双侧双瓶”，是指从一个部位采血接种一个需氧瓶，再从另一部位采血接种另一个厌氧瓶。一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为单个血培养。临床微生物标本采集规范专家讲座第24页3.采集次数要求：对怀疑菌血症、真菌血症成人患者，推荐同时采集2~3套（不一样部位）血培养标本。（即双瓶双臂同时采集血培养标本。）婴幼儿患者，推荐同时采集2次（不一样部位）血培养标本。说明：除特殊情况之外，在采取血培养后2至5天内，无需重复采取血培养。因为抗菌治疗2至5天内，血液中细菌不会马上消失。研究证实，血培养只做1套检出率为65%，做2套和3套检出率分别为80%和96%。单瓶血培养检出率不高，而且结果极难做出临床解释。临床微生物标本采集规范专家讲座第25页4.采血量要求：成年患者推荐采血量为每套不少于10ml，每瓶不少于5ml。婴幼儿患者推荐采血量为每瓶不少于2ml。说明：血标本采集量是影响检出率最主要原因。成人血培养采血量在2~30ml之间，病原菌检出率与采血量成正百分比增加。每增加1ml血液，病原菌检出率增加3.2%。儿童患者因为血液中病原菌浓度较高，血培养量无需等同于成人。对血液病患者或者血容量相对较低患者提议使用儿童瓶来降低血液采集量增加病原菌检出率。临床微生物标本采集规范专家讲座第26页菌血症病人血中细菌浓度成年病人:链球菌心内膜炎1to30organisms/ml葡萄球菌心内膜炎1to20organisms/ml革兰氏阴性菌血症少于1to10organisms/ml革兰氏阳性菌血症1to300organisms/ml幼儿病人:革兰氏阴性菌血症5to1000organisms/ml75%幼儿菌血症病人血液有＞100organisms/ml所以采血量一定要足够！临床微生物标本采集规范专家讲座第27页5.血液标本在需氧瓶和厌氧瓶中分配要求：一个需氧瓶和一个厌氧瓶为一套血培养，作为常规血培养组合。说明：采取一对需氧瓶+厌氧瓶组合，比采取二个需氧瓶组合可检出能更多葡萄球菌、肠杆菌科细菌和厌氧菌。而且，采两瓶能够确保足够采血量。当被用来做培养采血量少于推荐值时，血必须首先接种需氧瓶，然后将剩下血液接种入厌氧瓶。因为多数菌血症是由需氧和兼性需氧细菌造成，而这些细菌从需氧瓶中更加好被分离。

临床微生物标本采集规范专家讲座第28页因为婴幼儿患者厌氧菌所致菌血症比较罕见，婴幼儿血培养能够仅用需氧瓶，为提升检出率、区分污染菌，应采取两只需氧瓶为一组血培养。依然采取双侧双瓶采血方式。真菌血培养采取需氧血培养瓶采集标本。采取中和/灭活抗菌药品血培养瓶可提升真菌检出率。自动化血培养系统不能用于双相真菌检测。临床微生物标本采集规范专家讲座第29页6.血培养标本运输要求：（1）采集后血培养瓶应在1小时之内送往试验室。（2）血培养瓶在接种前和接种后均不得冷藏和冷冻。说明：血培养瓶冷藏或冷冻会将一些微生物杀灭，将装着液体容器冰冻也会使容器破裂。临床微生物标本采集规范专家讲座第30页7.血培养培养周期要求：自动化血培养仪标准血培养周期为5天。说明：有研究表明，95%-97%有临床价值细菌会在3-4天内被自动血培养系统检出，当前仍推荐5天培养周期。特殊情况可适当延长培养时间。如临床怀疑布鲁菌感染，可延长培养至28天等。临床微生物标本采集规范专家讲座第31页血培养假阳性危害1、增加患者抗生素用量，破坏其微生态环境2、延长了住院天数3、延误病情诊疗4、增加经济负担

预防皮肤寄生菌或环境微生物污染临床微生物标本采集规范专家讲座第32页二、下呼吸道（痰培养）

标本采集规范临床微生物标本采集规范专家讲座第33页病原体种类繁多而复杂

使下呼吸道感染病原诊疗成为难题细菌（包含放线菌与奴卡菌，厌氧菌与分枝杆菌）真菌（包含肺孢子菌）病毒支原体、衣原体与立克次体原虫寄生虫临床微生物标本采集规范专家讲座第34页我国痰培养现实状况标本送检率低苛养菌检出率极低结果重复性差汇报速度慢感染菌与污染菌不易区分药敏结果与治疗反应存在差距临床微生物标本采集规范专家讲座第35页标本采集方法医师或护士直视下采集标本病人先漱口，去除表面菌群教育病人深咳，搜集从下呼吸道咳出痰液临床上约半数咳痰标本不合格！咳痰标本临床微生物标本采集规范专家讲座第36页咳痰途经口咽部不可防止地受到污染唾液中口咽部定植菌浓度可达108～109/ml。研究显示，国内常规痰标本中约半数存在唾液严重污染现象。临床微生物标本采集规范专家讲座第37页合格标本判断标准外观：观察颜色、粘度、有没有血丝或脓。若标本为水状且很显著是唾液，则应拒收。为了判定是否来自下呼吸道痰，需检验是否为合格痰标本。白细胞＞25个/低倍镜视野、鳞状上皮细胞＜10个/低倍镜视野为合格标本。采集合格标本对细菌诊疗极为主要。合格痰液标本不合格痰液标本临床微生物标本采集规范专家讲座第38页（一）采集指征凡是发烧、咳嗽和咳痰，痰呈脓性、粘稠或血性，并伴有胸痛、气急，肺部闻及湿罗音，外周白细胞总数及中性粒细胞百分比显著增高，X线检验提醒肺部有炎性浸润或胸腔积液，甚至出现感染性休克和呼吸衰竭等患者，应采集痰液或下呼吸道标本。对可疑烈性呼吸道传染病（如SARS、肺炭疽、肺鼠疫等）患者采集检验标本时必须注意生物安全防护。临床微生物标本采集规范专家讲座第39页（二）采集方法自然咳痰法以晨痰为佳。用清水重复漱口，用力咳出呼吸道深部痰，痰液直接吐入无菌容器中，尽快送检。不然有细菌（如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌）在外界可能死亡。不能及时送检标本，室温保留≤2h。要求采到肺深部痰液，不要唾液。临床微生物标本采集规范专家讲座第40页在抗生素应用前采集痰标本;标本采集后1～2h内必须马上进行试验室处理；咳痰标本应用最早且广泛，但也是最受争议标本;取标本前应摘去牙托，清洁口腔如刷牙和漱口;深咳，采集标本过程中要有专业医务人员指导;对于细菌性肺炎，痰标本送检天天1次，连续2～3天；不提议24h内屡次采集，除非痰液外观性状改变；怀疑分枝杆菌感染者，应连续搜集3天清晨痰液送检。临床微生物标本采集规范专家讲座第41页2.小儿取痰法

用弯压舌板向后压舌，用棉拭子深入咽部，小儿经压舌刺激咳嗽时，可喷出肺部和气管分泌物，粘在棉拭子上送检。幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。3.支气管镜采集法

–-经支气管镜直接吸引

–-支气管肺泡灌洗

–-防污染样本毛刷临床微生物标本采集规范专家讲座第42页（三）注意事项1.痰标本不能及时送检者，可暂存4℃冰箱。室温下耽搁数小时，定植于口咽部非致病菌过分生长而肺炎链球菌、葡萄球菌和流感嗜血杆菌检出率则显著降低。2.在临床上咳痰仍是诊疗肺部感染最惯用标本，但咳痰也最易被口咽部正常菌群污染。痰液标本细菌学检验，必须区分是病原菌还是来自上呼吸道正常菌群。经过洗涤处理痰液或自气管镜采集及气管穿刺所获标本，结果比较可靠。

临床微生物标本采集规范专家讲座第43页3.因为口腔和咽部存在大量革兰阳性和革兰阴性厌氧细菌，而且缺乏可靠方法区分它们终究是致病菌还是定植菌，所以不主张对咳痰标本进行厌氧菌培养。4.约有1/4～1/2肺部感染患者可能发生菌血症，应同时做血培养。临床微生物标本采集规范专家讲座第44页三、尿培养标本采集规范

尿路感染是指尿道内有大量微生物繁殖而引发尿路炎症。依据感染部位分为：

上尿路感染（肾盂肾炎）下尿路感染（膀胱炎、尿道炎）男性可出现前列腺炎。临床微生物标本采集规范专家讲座第45页（一）尿培养标本送检指征1.有经典尿路感染症状；2.有肉眼脓尿或血尿；3.尿常规检验白细胞或亚硝酸盐阳性；4.有不明原因发烧，无其它局部症状；5.留置导尿管患者出现发烧；6.膀胱排空功效受损；7.泌尿系统疾病手术前；8.有尿路感染症状者，前次培养结果阴性或抗菌治疗48h后仍连续发烧。9.抗生素停药后，感染症状再次出现。临床微生物标本采集规范专家讲座第46页正常人尿液是无菌，而尿液细菌培养最大问题是杂菌污染。正常人外尿道有大肠杆菌、葡萄球菌等存在。而这些细菌又是尿路感染中常见病原菌。所以要作好尿液细菌学检验，首先应注意标本搜集问题。尿液经尿道排出时会受到尿道内正常菌群污染,但定量培养时计数不会超出103CFU/ml,泌尿系感染时定量培养在104～105CFU/ml。另外,因为绝大多数泌尿系感染是由肠杆菌科细菌引发,而这类细菌硝酸盐还原试验为阳性,故可参考尿检验常规中硝酸盐还原试验来推断是否有细菌感染。临床微生物标本采集规范专家讲座第47页（二）尿培养标本采集方法标本采集应在使用抗生素之前，防止消毒剂污染标本。1．清洁中段尿留取清晨清洁中段尿标本，先用肥皂水仔细清洗会阴部，再用清水冲洗尿道口周围；将前段尿排去，留取中段尿10ml左右于无菌容器内，马上加盖送检，2h内接种。该方法简单、易行，是最惯用尿标本搜集方法，不过轻易受到会阴部细菌污染。2．耻骨上膀胱穿刺使用无菌注射器直接从耻骨上经皮肤消毒穿入膀胱吸收尿液，是评定膀胱内细菌感染“金标准”方法，主要用于厌氧菌培养或留取标本困难婴儿尿标本采集。临床微生物标本采集规范专家讲座第48页3．直接导尿按常规方法对会阴局部进行消毒后，用导尿管直接经尿道插入膀胱，获取膀胱尿液，可降低尿液标本污染，准确地反应膀胱感染情况。但有可能下尿道细菌进入膀胱，造成继发感染，普通不提倡使用。4．小儿搜集包无自控能力小儿可用搜集包搜集尿液，这种装置因为极难防止会阴部菌群污染产生假阳性，所以只有在检验结果为阴性时才有意义。假如检验结果为阳性，应结合临床进行分析，必要时可使用膀胱上穿刺或导尿法留取标本进行复检。5．留置导尿管搜集尿液用导尿管导取10-15ml尿液置灭菌容器内送检。长久留置导尿管者，应在更换新导尿管后留取尿标本。留置导尿患者应消毒导尿管外部及尿管口，采取无菌操作方法，用注射器经过导尿管吸收尿液。注意预防混入消毒剂，不能从尿液搜集袋中采集尿液。临床微生物标本采集规范专家讲座第49页（三）采集时间和标本运输

1.应选择在抗菌药品应用前或停用抗菌药品5天后采集尿液。2.通常采集清晨第1次尿液送检，确保尿液在膀胱内停留4h以上，使细菌有足够时间繁殖。嘱患者睡前少饮水以免尿液稀释。3.怀疑沙门菌感染时应在发病2周左右采集尿液培养。4.对无症状患者应连续采集3天晨尿送检。5.怀疑结核分枝杆菌感染时，患者应停药1-2天后采集晨尿或24h尿沉渣部分10-15ml送检。6.标本采集后应马上送检、及时接种，室温下保留时间不得超出2h（夏季保留时间应适当缩短或冷藏保留），冷藏保留标本必须在6h内进行接种，但冷藏保留标本不能用于淋病奈瑟菌培养。临床微生物标本采集规范专家讲座第50页（四）注意事项1.因为自然排尿搜集标本极难防止会阴部及下尿道细菌污染，所以需要定量接种、合理评价才能判断培养细菌是否与尿路感染相关。尿标本菌落计数中革兰阴性杆菌数>105CFU/ml或革兰阳性球菌数>104CFU/ml时有临床诊疗意义。（不是绝正确，受多原因影响，综合判断）2.尿液标本采集和培养中问题是污染杂菌，故应严格进行无菌操作。3.尿标本采集后应马上送检，以免污染，尿液中不得加防腐剂和消毒剂。临床微生物标本采集规范专家讲座第51页4.除非是流行病学调查，长久留置导尿管患者常规尿培养没有临床意义，大量病原菌常可在这类患者中检出，导尿管留置时间延长易造成与引发患者尿道感染不一致微生物定植生长；5.不可从集尿袋下端管口留取标本，集尿袋内尿液也不能用于培养，可能会引发污染；6.临床常让患者留取清洁中段尿，应该在医护人员监督指导下让患者正确留取清洁中段尿；7.因为种种原因，患者经常不能正确地留取清洁中段尿，试验室只是针对尿液标本培养结果进行评定，或经常因为分析前尿液标本污染了各种细菌无法正确解释结果，可能延误了临床正确诊疗和治疗。临床微生物标本采集规范专家讲座第52页以下原因可使尿液中细菌数量降低，判断结果时应注意

①使用抗生素治疗，细菌生长受到抑制；②尿液稀释，尿比重＜1.003，营养成份降低，细菌生长迟缓；③尿PH＜5.0或＞8.5，细菌生长受阻；④尿频时，膀胱内细菌停留时间短，菌落数降低；⑤尿道口消毒液混入标本中，影响细菌繁殖，菌落数降低；⑥不一样种类细菌生长速度不一样、营养要求不一样，菌落计数有所不一样。临床微生物标本采集规范专家讲座第53页四、大便培养标本采集规范

临床微生物标本采集规范专家讲座第54页（一）采集时间腹泻患者应在急性期，并尽可能在使用抗生素之前采集新鲜粪便；伤寒患者在发病2周以后。（二）采集方法1．自然排便采集法自然排便后，挑取有脓血或黏液部位粪便2-3g，液状粪便取絮状物盛于无菌容器内或置于保留液或增菌液中送检。2．直肠拭子采集法对不易取得粪便或排便困难患者及婴幼儿，可采取直肠拭子法采集标本，其方法是将拭子前端用甘油湿润。然后插入肛门约4～5cm（幼儿约2～3cm）处，轻轻在直肠内旋转，擦取直肠表面粘液后取出，盛入无菌试管或保留液中送检。临床微生物标本采集规范专家讲座第55页（三）试验室检验

肠道细菌大多为革兰阴性杆菌，且因粪便标本中有各种正常菌群，形态上区分困难，所以普通不做直接涂片检验。只有当临床怀疑肠道菌群失调或检验霍乱弧菌、结核分枝杆菌、疑似葡萄球菌或难辩梭菌引发伪膜性肠炎以及真菌性腹泻时，才做直接涂片检验。疑似葡萄球菌引发抗菌素相关性肠炎，可取水样便或肠黏膜样物涂片，革兰染色后镜检，见革兰阴性杆菌显著降低，革兰阳性球菌大量散在或成堆（葡萄状）排列，可提醒肠道菌群失调。临床微生物标本采集规范专家讲座第56页（四）注意事项在腹泻发病正确时间搜集标本，病人应尽可能在急性期（3d）内和用药前采集标本，以提升检出率。大便标本中含有很多杂菌，粪便标本采集须注意预防外界脏物污染，尽可能采取无菌容器。为提升阳性检出率，要采集新鲜标本，马上送检。临床微生物标本采集规范专家讲座第57页五、生殖道标本采集规范

临床微生物标本采集规范专家讲座第58页（一）送检指征

1.男性泌尿系统表现尿急、尿频、尿痛尿道分泌物增多会阴部疼痛及阴囊疼痛性功效障碍泌尿生殖器畸形和缺损临床微生物标本采集规范专家讲座第59页2.女性泌尿系统表现

分泌物增多及性状异常尿道口搔痒及脓性分泌物流畅下腹疼痛月经失调阴道出血外阴搔痒外阴或阴道疼痛性功效障碍临床微生物标本采集规范专家讲座第60页（二）标本采集生殖器官标本包含子宫颈、阴道、前列腺；男性及女性外生殖器分泌物及经血等。应依据感染部位和可能病原体决定用于病原学诊疗标本种类、采集部位和采集方法等。阴道、子宫颈及前列腺等分泌物应由医师采集，搜集于无菌试管内送检。临床微生物标本采集规范专家讲座第61页尿道分泌物1.女性尿道：患者排尿1小时后采集，首先拭去尿道口渗出物；再用拭子经过阴道，靠着耻骨联合，按摩尿道，采集分泌物；如未取得分泌物，清洗外尿道，用灭菌纱布或棉球擦拭，用泌尿生殖道拭子插入尿道2－4cm，旋转拭子2秒。2.男性尿道：用泌尿生殖道拭子插入尿道腔2－4cm，旋转拭子，最少停留20秒，而使之轻易吸收。临床微生物标本采集规范专家讲座第62页阴道分泌物擦除过多分泌物和排出液，用无菌棉拭子采取阴道口内4厘米内侧壁或后穹窿处罚泌物，假如需要涂片，需再用一个拭子。男性前列腺：用前列腺按摩法采集前列腺液。清洗尿道口，冲洗尿道膀胱，从肛门用手指按摩前列腺，使前列腺液溢出，用无菌容器搜集。无肉眼可见脓液时，可用灭菌拭子轻轻伸入前尿道内，旋转拭子采集标本。临床微生物标本采集规范专家讲座第63页（三）注意事项1.生殖器是开放性器官，标本采集过程中应严格遵循无菌操作规程以降低杂菌污染。2.因为阴道正常菌群存在而使细菌分离判定受到干扰，所以在采集女性生殖道标本时应注意尽量降低或防止正常菌群污染。3.疑有宫腔感染，如遇产妇需行剖宫产，待胎儿娩出后取宫腔分泌物，并同时取婴儿耳拭子一同送检。4.沙眼衣原体和病毒均在宿主细胞内繁殖，取材时拭子应在病变部位（移行上皮处稍内）停留十几秒钟，并采集尽可能多上皮细胞。临床微生物标本采集规范专家讲座第64页5.生殖道感染厌氧菌也较多见，疑有厌氧菌感染时，标本采集和运输应防止与氧气接触，最正确方法是床边采样，直接接种至厌氧装置内。6.淋病奈瑟菌检验时，取材深度一定要够，因为淋球菌好发于柱状上皮细胞而不是复层鳞状上皮细胞。不论男女尿道及子宫颈均需用拭子插入尿道及子宫颈3cm深转动并停留10-30s取样送检。7.淋病奈瑟菌抵抗力低，对外环境改变颇为敏感，对严寒和干燥抵抗力很弱。所以，为了确保培养有足够成功率，取材后要尽快送检，马上接种，标本离体时间越短越好。临床微生物标本采集规范专家讲座第65页六、化脓和创伤标本采集规范临床微生物标本采集规范专家讲座第66页组织或器官化脓性感染，其病原菌起源可分为两类：①内源性：感染源是炎症局部周围器官中正常菌群，因为损伤等原因进入无菌状态组织内，发生感染。②外源性：感染源是存在于人体外部自然界微生物，因为外伤和直接接触经过人体表面进入人体，造成感染。脓液细菌学检验对于确定感染种类（结核性或非结核性等）、提供药品敏感结果和指导临床治疗有主要意义。临床微生物标本采集规范专家讲座第67页（一）标本采集1．开放性感染和已溃破化脓灶标本采集前先用灭菌生理盐水拭去表面渗出物，尽可能用抽吸或将拭子深入伤口，紧贴伤口前沿取样，从脓肿底部或脓肿壁取样，效果最好。慢性感染，污染严重，极难分离到致病菌，可取感染部位下组织，研磨成组织匀浆接种于适宜培养基。2．封闭性脓肿局部消毒后用针及注射器抽吸脓肿壁，将全部物质置于无菌试管内送检，疑为厌氧菌感染时马上作床边接种或置于厌氧转运装置送检（针头插一橡皮塞隔绝空气）。但取样时，可能会带入与感染过程无关定植细菌。3．大面积创伤感染：可取感染组织块或沾有脓汁内层敷料送检。临床微生物标本采集规范专家讲座第68页（二）注意事项细菌对干燥敏感或只能采集少许标本时，用棉拭子采集标本后马上放入液体培养基内，或采标本前先将棉拭子沾少许肉汤以保持标本湿度。对于不能马上送检标本，应放4℃保留，培养淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌标本除外。尽可能在用药前采集标本。采样前病灶局部应防止用抗菌药品或消毒剂。革兰染色对标本进行评定。涂片中如出现上皮细胞提醒标本已被污染。没有上皮细胞而有白细胞说明标本采集正确。有创伤均可有细菌污染，但不一定发生感染，所以对分离到细菌要依据创伤情况、菌量和种数，搜集标本处理过程、机体免疫力及抗生素使用情况等各种原因来分析判断。临床微生物标本采集规范专家讲座第69页七、穿刺液标本采集规范

临床微生物标本采集规范专家讲座第70页穿刺液主要包含:脑脊液胆汁胸水腹水心包液关节液鞘膜液在正常人体中，上述体液均是无菌。有感染情况下检出细菌，在排除污染后应视为病原菌，及时给予正确治疗，使病人早日恢复健康。临床微生物标本采集规范专家讲座第71页（一）脑脊液1.采集时间：怀疑为脑膜炎病人，应马上采集脑脊液，最好在使用抗菌药品以前采集标本。2.采集方法：用腰穿方法采集脑脊液3～5ml，分装到3个无菌试管中，每个试管1～2ml。第一管用于细菌培养!也可将抽取液直接注入血培养瓶,用血培养仪培养。临床微生物标本采集规范专家讲座第72页3.标本运输和保留：脑膜炎奈瑟菌离体后会快速自溶,肺炎链球菌和流感嗜血杆菌也很轻易死亡,所以,标本应马上送检,并注意保温、防干燥。切不可置冰箱保留,不然会影响检出率。脑脊液标本送检理想时间为15分钟内，半小时送检是可接收，假如送检时间超出1小时，则会影响结果。如不能及时送检，可使用血培养瓶（怀疑脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌感染时，请勿使用血培养瓶）临床微生物标本采集规范专家讲座第73页新型隐球菌墨汁负染色左图：低倍镜；右图：高倍镜临床微生物标本采集规范专家讲座第74页

（二）胆汁及其它穿刺液（胸水、腹水、心包液、关节液及鞘膜液等）1.采集时间怀疑感染存在，应尽早采集标本，普通在患者使用抗菌药品之前或停顿用药后2-3天采集。2.采集方法①无菌操作穿刺抽取标本或外科手术采集标本。②标本采集量应＞1ml。胸腔积液、腹水可抽取10ml,心包液、关节液等可抽取2～5ml。③标本采集后注入无菌小瓶或无菌试管中送检也可将抽取液直接注入血培养瓶，用血培养仪培养。为预防穿刺液凝固，应在无菌试管中预先加入灭菌肝素，再注入穿刺液。临床微生物标本采集规范专家讲座第75页八、眼、耳、鼻、咽拭子标本采集规范

临床微生物标本采集规范专家讲座第76页正常眼部、中耳及鼻窦内是无菌，而咽峡部有口腔常在菌丛。耳、鼻、咽部细菌感染病原菌多源于口腔，口腔中现有需氧菌也有厌氧菌，所以，其周围组织器官感染不但考虑是需氧菌，也须检验厌氧菌。临床微生物标本采集规范专家讲座第77页（一）标本采集1.眼结膜：分别用（无菌盐水预湿）拭子绕每一个结膜取；采集完即接种培养基；将拭子涂片在两个玻片上染色。角膜刮擦：滴两滴局部麻醉液；用无菌铲刮擦脓肿或溃疡，将刮擦物直接接种于培养基；将剩下材料涂于两个洁净玻片上染色。液体或抽吸物：备眼，用针头抽吸液体。先用无菌生理盐水冲洗眼部，然后用棉拭子拭干，再用无菌棉拭子采集分泌物。临床微生物标本采集规范专家讲座第78页2.耳

内耳：对复杂、重复或慢性顽固中耳炎做鼓膜穿刺术，接触耳鼓室先用肥皂水清洗耳道再用注射器搜集液体；对破裂鼓室，借助耳科诊视器，用软杆拭子搜集液体。外耳：用湿拭子将耳道任何碎屑或痂皮拭去；在外耳道用力旋转拭子取样。3．鼻或鼻咽分泌物直接用拭子涂抹病灶部位，切勿接触周围粘膜或皮肤，标本马上送检。4．咽分泌物先用清水漱口，用压舌板将舌向下向外压，将咽拭子在咽后壁或悬雍垂后侧涂抹数次，插入运输培养基。切勿接触口腔和舌粘膜。

临床微生物标本采集规范专家讲座第79页（二）标本运输和保留标本采集时，无菌手续以稍蘸肉汤拭子采集病变显著处脓液和分泌物。采取后拭子应置于运输培养基或培养拭子运输，以防干燥。马上送检，如不能及时送检，应置于４℃冰箱保留，超出48h不可使用。临床微生物标本采集规范专家讲座第80页九、导管标本采集规范

临床微生物标本采集规范专家讲座第81页血管内留置管道是当代医护工作，尤其是ICU一个不可缺乏部分。当前使用有外周静脉导管和单腔、多腔中心静脉导管、隧道式中心静脉导管、漂浮式肺动脉导管、经外周静脉置入中心静脉导管、外周动脉导管等。这些可留置通道为医疗工作液体、血液制品、营养物质、药品输入、血流动力学监测、采血及抢救通道维持提供了可靠路径；但同时也带来了各种并发症，如导管相关局部感染与菌血症、血栓形成、血栓性脉管炎、脓性血栓脉管炎等。临床微生物标本采集规范专家讲座第82页血管导管培养•血管导管（intravascularcathetertips）及腹膜透析导管（peritonealdialysiscatheters）培养是侦测血流感染源方法之一•标准方法：经由导管抽取20ml血液，进行血液培养；导管周围皮肤乙醇消毒，然后以无菌剪刀取