【产叶酸菌株的筛选及合成机理的研究进展6100字（论文）】

产叶酸菌株的筛选及合成机理的研究进展目录TOC\o"1-2"\h\u1999产叶酸菌株的筛选及合成机理的研究进展 1249摘要 12537关键词：产叶酸菌株；筛选；安全性 181911.叶酸介绍 2246991.1叶酸基本性质 257621.2叶酸功能 2202032.产叶酸菌株的筛选 349652.1菌株的分离、鉴定及保存 3177302.2叶酸产量的鉴定 462693.1叶酸的来源及合成机理 4287423.1叶酸的来源 542703.2叶酸的合成 591153.3叶酸的影响 630964.总结 713761参考文献 7摘要叶酸对于人体的营养摄入有重要的促进作用，天然叶酸的主要来源是绿色植物的叶子、动物肝脏、蛋黄、大豆、小麦和以叶酸发酵产生的早餐谷物类及酵母，许多酵母菌株都可以产生叶酸，但是要获得安全有效的产叶酸菌株还需要进一步的筛选与鉴定。当前对于产叶酸菌株的筛选及合成机理已经有诸多研究成果，本文就在借鉴总结前人研究成果的基础上，探究产叶酸菌株的筛选及合成机理的研究进展，进一步加深对于产叶酸菌株的筛选及合成机理的认识。关键词：产叶酸菌株；筛选；安全性叶酸是一种水溶性维生素。叶酸在人体内起到非常重要的作用。其中还包括了影响细胞的增殖、调亡等等，这些影响表达方式为对形成疾病的速度进行抑制。叶酸和身体健康状况有联系，当叶酸缺乏时，多种先天发育畸形发生概率会变大，包括白血病、先天性心脏病和神经管畸形等。另外，叶酸还和神经疾病以及肿瘤息息相关。基于叶酸对人体健康的重要程度不断上升，叶酸的提取、合成便成了重要的研究方向。且目前叶酸的生产主要是以化学合成为主，安全性不高，不能有效改良人体肠道菌群的丰富度，通过微生物方法发酵所得的叶酸品质很高，对人体无副作用，但所得的叶酸含量比较低。因此，从自然界存在的菌株中筛选出高产叶酸的菌株成为了研究热点。1.叶酸介绍1.1叶酸基本性质叶酸（VitaminB9，VitB9），是一种水溶性维生素，其生物活性形式为四氢叶酸（Tetrahydrogenfolicacid，THF），在氨基酸代谢和DNA合成中起辅酶的作用。主要存在于动物和奶制品中，如肉类、家禽、鱼卵和牛奶；但在以植物为基础的饮食中，比如新鲜水果、蔬菜、坚果、种子、谷物、豆类、豆制品和强化谷物也可以获得。叶酸可以在谷氨酸尾的长度上有所不同(范围从一个到大约八个γ-连接的l-谷氨酸盐和附着在分子上的一个碳)REF_Ref78875644\r\h[1]。黄色或橙黄薄片状或针状晶体，无臭无味，加热至约250℃，色渐变深，最后成黑色胶状物。不易溶于水和乙醇，易溶于酸性或碱性溶液。1.2叶酸功能人体所必须的一种维生素就是叶酸，其在人体主要发挥两个重要功能：一是充当某种角色来发挥作用，如一碳这一物质，实现了辅酶的移动，还发挥DNA甲基化进行表达的改善作用；二是主要促进一些物质的形成，能够有效的提高形成RNA和DNA的速率。因此叶酸在人体内起到非常重要的作用。此外还包括了影响细胞的增殖和调亡等，这些影响表达方式为对形成疾病的速度进行抑制[2-3]。由于这种维生素不能由人体合成，它必须通过饮食或通过补充来获得。然而，一些天然食物中的叶酸可能会在烹饪过程中被破坏，尤其是在高温下延长烹饪时间ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Sijilmassi</Author><Year>2019</Year><RecNum>87</RecNum><DisplayText><stylesize="10">[131]</style></DisplayText><record><rec-number>87</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="9e9r55ws5fre04exfp7v0599pwwxd22zp209"timestamp="1583319878">87</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Sijilmassi,O.</author></authors></contributors><auth-address>FacultyofOpticsandOptometry,DepartmentofAnatomyandHumanEmbryology,UniversidadComplutensedeMadrid,Avda.ArcosdeJalon,118,28037,Madrid,Spain.o.sijilmassi@ucm.es. FacultyofOpticsandOptometry,DepartmentofOptics,UniversidadComplutensedeMadrid,Avda.ArcosdeJalon,118,28037,Madrid,Spain.o.sijilmassi@ucm.es.</auth-address><titles><title>Folicaciddeficiencyandvision:areview</title><secondary-title>GraefesArchClinExpOphthalmol</secondary-title></titles><periodical><full-title>GraefesArchClinExpOphthalmol</full-title></periodical><pages>1573-1580</pages><volume>257</volume><number>8</number><edition>2019/03/29</edition><keywords><keyword>Animals</keyword><keyword>*EyeDiseases/blood/etiology/prevention&control</keyword><keyword>FolicAcid/*blood/therapeuticuse</keyword><keyword>*FolicAcidDeficiency/blood/complications/therapy</keyword><keyword>Humans</keyword><keyword>VitaminBComplex/therapeuticuse</keyword><keyword>Eyedisease</keyword><keyword>Folatereceptors</keyword><keyword>Folicaciddeficiency</keyword></keywords><dates><year>2019</year><pub-dates><date>Aug</date></pub-dates></dates><isbn>1435-702X(Electronic) 0721-832X(Linking)</isbn><accession-num>30919078</accession-num><urls><related-urls><url>/pubmed/30919078</url></related-urls></urls><electronic-resource-num>10.1007/s00417-019-04304-3</electronic-resource-num></record></Cite></EndNote>[4]。研究表明，围产期给予叶酸有助于预防许多先天性异常的发生和复发。另外叶酸对于动脉粥样硬化（Atheroslerosis,AS）的影响也越来越多的受到重视，我国在2015年发表的一项4.5年大规模卒中一级预防RCT试验(ChinaStrokePrimaryPreventionTrial,CSPPT)表明，长期补充叶酸可以减少CVD的发病，特别是卒中。传统的假设认为叶酸对血管功能的影响主要是由于同型半胱氨酸的降低ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>AA</Author><Year>2006</Year><RecNum>174</RecNum><DisplayText><stylesize="10">[136]</style></DisplayText><record><rec-number>174</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="9e9r55ws5fre04exfp7v0599pwwxd22zp209"timestamp="1584619718">174</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>MangoniAA</author></authors></contributors><titles><title>Folicacid,inflammation,andatherosclerosis:falsehopesortheneedforbettertrials?</title><secondary-title>Clinicachimicaacta;internationaljournalofclinicalchemistry</secondary-title></titles><periodical><full-title>Clinicachimicaacta;internationaljournalofclinicalchemistry</full-title></periodical><pages>11-9</pages><volume>367</volume><dates><year>2006</year></dates><accession-num>16413521</accession-num><label>2.735</label><urls></urls><electronic-resource-num>10.1016/j.cca.2005.11.016</electronic-resource-num></record></Cite></EndNote>[5]。以人群为基础的队列研究表明，在美国和加拿大在研究对象的粮食产品中强化增加叶酸补充，2年后，可以有效的降低以AS为病理学基础的中风的死亡率。ShirodariaADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>C</Author><Year>2009</Year><RecNum>178</RecNum><DisplayText><stylesize="10">[138]</style></DisplayText><record><rec-number>178</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="9e9r55ws5fre04exfp7v0599pwwxd22zp209"timestamp="1584676331">178</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>AntoniadesC</author><author>AntonopoulosAS</author><author>TousoulisD</author><author>MarinouK</author><author>StefanadisC</author></authors></contributors><titles><title>Homocysteineandcoronaryatherosclerosis:fromfolatefortificationtotherecentclinicaltrials</title><secondary-title>Europeanheartjournal</secondary-title></titles><periodical><full-title>Europeanheartjournal</full-title></periodical><pages>6-15</pages><volume>30</volume><number>1</number><dates><year>2009</year></dates><accession-num>19029125</accession-num><label>23.239</label><urls></urls><electronic-resource-num>10.1093/eurheartj/ehn515</electronic-resource-num></record></Cite></EndNote>[6]等研究显示，叶酸的推荐日摄食量(400μg/天)可以诱导血管内皮5-甲基四氢叶酸水平产生与高剂量(5mg/天)类似的增加效果。这证实每日推荐的叶酸摄入量足以对血管功能提供最大的益处，包括改善内皮功能、细胞内氧化还原状态和大血管的弹性特性。叶酸添加对血管疾病的益处也表现在对于血栓闭塞性脉管炎（Buerger’s）中，研究表明ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>MH</Author><Year>2016</Year><RecNum>183</RecNum><DisplayText><stylesize="10">[139]</style></DisplayText><record><rec-number>183</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="9e9r55ws5fre04exfp7v0599pwwxd22zp209"timestamp="1584679675">183</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>ModagheghMH</author><author>RavariH</author><author>HaghighiMZ</author><author>RajabnejadA</author></authors></contributors><titles><title>EffectofFolicAcidtherapyonHomocysteineLevelinpatientswithAtherosclerosisorBuerger'sDiseaseandinHealthyindividuals:Aclinicaltrial</title><secondary-title>Electronicphysician</secondary-title></titles><periodical><full-title>Electronicphysician</full-title></periodical><pages>3138-3143</pages><volume>8</volume><number>10</number><dates><year>2016</year></dates><accession-num>27957316</accession-num><label>0</label><urls></urls><electronic-resource-num>10.19082/3138</electronic-resource-num></record></Cite></EndNote>[7]，每日服用5mg叶酸补充治疗可显著降低血清同型半胱氨酸水平，并可能在Buerger’s病等血管疾病的发展中发挥作用，且研究者建议将叶酸作为Buerger’s病治疗方案中的常规药物。2.产叶酸菌株的筛选2.1菌株的分离、鉴定及保存对于产叶酸菌株的生物特性，当前研究较少。在赵宏飞等的研究中提出产叶酸菌株的生长曲线较为一致，在2h后产酸开始加快，在12h左右产酸达到顶峰，在20h左右开始结束对数期进入稳定期，与徐玲燕等的研究一致[25-26]。在生长温度方面，研究提出产叶酸菌株最适宜的生长的温度为37℃，当温度达到40℃以上后菌体的生长会受到抑制，但是不同的菌株具体的适应温度不一致。在生长环境方面，研究提出产叶酸菌株在葡萄糖、蔗糖和乳糖碳源条件下生长速度最快，但是在乳糖碳源条件下生长速度稍逊于葡萄糖和蔗糖。除此之外，不同的菌株在葡萄糖以及蔗糖碳源条件下生长速率会呈现不同的利用率。不同的氮源条件也对菌株的生长有促进作用，一般的氮源条件对于菌株的生长促进作用是一样的，没有很大的区别，因此，产叶酸菌株对于氮源条件要求不高。在pH值方面，由于微生物细胞对于pH值比较敏感，因此pH值对于产叶酸菌株来说较为重要。研究提出产叶酸菌株一般在PH值5.0-6.5之间生长较快，在PH值在5.0以下时，生长速率会受到影响，逐渐降低，同时不同菌株适应的PH值也有细微不同。目前国内外对产叶酸细菌的分离通常是先用MRS固体培养基活化，然后用叶酸酪蛋白培养基（FACM）分离叶酸,该菌株在MS培养基中接种2-3次，在叶酸去除培养基中加入溴甲酚紫作为指示剂，pH值为6-8，1-2滴于37℃下进行1-3D液体培养基活化试验，如果溶液呈黄色，则为阳性，表明该菌株能合成叶酸，可用液体石蜡和甘油保存细菌。一般情况下，液体石蜡先消毒，然后存放在37℃恒温箱中蒸发水蒸气，将待保存的细菌置于最合适的倾斜培养基中，用无菌吸管吸出消毒剂和石蜡，然后将延伸的倾斜介质注入斜面的上端。试管应竖直放置，并在4℃或室温下储存。大约可储存一年。甘油保存时甘油和细菌溶液以1:1的比例储存在离心管中。2.2叶酸产量的鉴定叶酸是生物体合成胸腺嘧啶脱氧核苷和核酸中嘌呤的一碳供体。在生物合成核酸中进行具体参与。叶酸水平异常或者叶酸缺乏都会造成不同的疾病，包括癌症、心血管疾病和胎儿神经管缺陷。显而易见，分析检测叶酸是一项十分重要的工作内容。目前多采用比色法、薄层层析法、高效液相色谱法、微生物法和分光光度法进行叶酸检测，目前在物质分析检测领域得到广泛应用。传统的微生物叶酸检测方法是基于乳酸菌的生长，将氯霉素耐药菌株应用于微生物改良方法，并将酶标板和酶标仪引入方法中。经叶酸水解酶处理的叶酸转化为多种形式的叶酸和单谷氨酸后，可获得生物样品中的总叶酸含量。目前，除了采用普通检测以外，具有单波长和电化学传感的荧光探针也实际应用于叶酸的分析检测，不过这些方法的缺点也非常明显，比如使用探针检测的时候存在检测时间长、合成复杂的问题，另外，需要进一步提高探针的灵敏度和选择性。根据分析检测过程中纳米荧光材料的独特优势，这一章内容主要描述了将铜离子掺杂入到量子点中，进而成功的搭建出荧光探针，并且得到最优条件，最后通过叶酸进行检测发光强度[15]。荧光信号因为自身极强的敏感性的特征，会导致它的变化受到许多因素的影响，比如说环境的变化会影响其信号。因此对掺杂得到的产物通过叶酸检测荧光信号前，会提前对检测条件进行改善达到最优条件，这样保证通过叶酸检测的结果具有最大的准确性以及灵敏性。实验过程主要考察了检测物和检测过程进行的反应时间。随着技术的不断进步，许多先进的鉴定技术也不断推出。传统的方法就是运用比色法、薄层层析法、微生物法的基本鉴定方法，这些方法能够初步的得出叶酸含量。在出现高效液相色谱法之后，能够对于叶酸的更完全的分离出来，并且结果准确、操作简单；紫外分光光度法同样能够准确分离叶酸，相比成本更低、灵敏度高。当前，荧光探针运用荧光信号，在众多检测方法中属于成本较低、灵敏度较高且简单的方法，目前在物质分析检测领域得到广泛应用。3.1叶酸的来源及合成机理菌株安全性研究3.1叶酸的来源自然界中，植物和微生物可以自行合成叶酸，比如酵母和绿色植物中有丰富的叶酸，而动物和人不能合成叶酸，只能从外界摄取。对于家禽而言，虽然饲料中含有叶酸，但主要是多元谷氨酸形式的叶酸，家禽对这类叶酸的利用率有限，只有20%-30%。人类则主要从膳食中摄取叶酸，比如绿色蔬菜、水果和蛋类。天然叶酸的来源有蔬菜、豆类、谷类、水果、坚果、肝脏、乳制品等，其中蔬菜中菠菜、萝卜、青菜等叶酸含量较高，小麦、玉米、谷子中相对含量较少。叶酸摄入到人体后先转化为二氢叶酸，然后在小肠粘膜上通过二氢叶酸还原酶的作用生成5，6，7，8-四氢叶酸，紧接着在体内转化为5，10-亚甲基四氢叶酸，最后在亚甲基四氢叶酸还原酶的作用下转化成5-甲基四氢叶酸，5-甲基四氢叶酸具有生物活性3。四氢叶酸是叶酸代谢过程的主要形式。3.2叶酸的合成3.2.1蝶呤、pABA和谷氨酸合成叶酸叶酸在线粒体、叶绿体和细胞质中合成，分为叶黄素支和PABA支。甲氨蝶呤在细胞质中合成，从GTP转化为二氢新喋呤三磷酸开始；该反应由GTP环水解酶I催化，也是合成甲氨蝶呤的限速反应。在哺乳动物中，gchi受到叶酸含量反馈的抑制，因此解除这种抑制可以有效地增加叶酸含量。pterin分支合成的Hmdhp和PABA分支合成的PABA进入线粒体，经过五步反应最终合成四氢叶酸。在二氢叶酸合成酶的催化下，DHP进一步与PABA的羧基结合形成二氢叶酸（DHF），这是叶酸合成过程中的第一种谷氨酸。在二氢叶酸还原酶（DHFR）和叶酸聚谷氨酸合成酶的作用下，DHF进一步将谷氨酸转化为聚谷氨酸四氢叶酸。此外，聚谷氨酸还通过增加叶酸的阴离子来增强叶酸的保留。FPGS是叶酸稳态的重要调节点。3.2.2叶酸的补救合成叶酸分解产物可转化为叶酸合成前体，再用于叶酸合成。与生物合成类似，叶酸的补救合成也分为两条途径：叶黄素和PABA。叶酸分解代谢的最终产物二氢蝶呤-6-醛被蝶呤醛还原酶（PTAR）催化生成HMDHP用于叶酸合成。植物中有许多PTAR亚型。PTAR活性在豌豆细胞质中最强，位于豌豆液泡和线粒体中。在哺乳动物中已经发现，叶酸结合蛋白（FBP）和pABAGlu的结合可以大大提高叶酸池的稳定性。3.3叶酸的影响3.3.1药物动物实验结果表明，在载脂蛋白E(apolipoproteinE，ApoE)基因敲除小鼠中，叶酸添加可以有效降低动脉粥样硬化病变的大小，提示补充叶酸可以有效预防AS，其机制可能与通过甲硫氨酸循环修饰DNA甲基化，改善DNA甲基转移酶活性和表达有关，从而改变动脉粥样硬化相关基因的表达。HodisHN等对506名早期亚临床AS受试者进行临床双盲实验，结果发现，在血浆Hcy≥9.1μmol/L的受试者当中，补充大剂量叶酸、维生素B6和维生素B12者，其颈动脉内膜平均厚度明显小于安慰剂组，明显降低早期AS的进一步发展，减少Hcy血症患者心脑血管疾病的发病风险。国内庄爱霞等的研究也表明，对HHcy血症AS患者长期进行B族维生素补充，可明显降低Hcy水平，减慢颈动脉粥样硬化斑块进展，同时可稳定斑块，预防病情进一步恶化。在近期的一项长达7.3年之久的针对存在心血管疾病风险因素的女性群体的随机对照研究中，长期与叶酸、维生素B6和维生素B12联合治疗可降低同型半胱氨酸浓度。总之，多种B族维生素联合使用可以有效地改善CAD患者的慢性低度炎症水平，主要体现在对同型半胱氨酸为主的炎症因子的水平。另外，目前叶酸也广泛的应用与药物制剂之中。例如，马来酸依那普利叶酸片为第二代血管紧张素转换酶抑制剂，属于复方制剂，由马来酸依那普利和叶酸组成，马来酸依那普利能够降低血压，并对心、脑、肾等靶器官起保护作用，而叶酸能降低同型半胱氨酸水平，因此，临床上常将马来酸依那普利叶酸片作为H型高血压的首选治疗药物。另外，有研究证实，对于缺铁性贫血的治疗，硫酸亚铁和叶酸联合补充比单独补充硫酸亚铁更有效。此外，缺乏叶酸可能会限制体重的增加和身高的增长。复方硫酸亚铁叶酸片，是一种复方制剂，主要的成分是硫酸亚铁和叶酸，另外还含有当归、黄芪等中药成分。复方硫酸亚铁叶酸片是一种治疗各种原因引起的缺铁性贫血的药物，临床上适用于老年患者贫血、儿童患者及孕妇贫血或者哺乳期女性。复方硫酸亚铁叶酸片通过补充铁剂和叶酸，能够促进人体对铁剂和叶酸吸收，从而改善贫血的症状。3.3.2食品维生素常常共同作用，促进身体的生理功能，包括维生素B6、叶酸和维生素B12在内的B族维生素在一碳单位代谢途径中具有重要功能，与同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）代谢相关，因此也是营养学家研究维生素补充的重要切入点。许多已发表的研究调查了低叶酸水平对健康的影响，包括在怀孕前和怀孕期间。这些研究表明，低水平的叶酸与多种出生缺陷有关，如神经管缺陷(尤其是无脑儿和脊柱裂)、低出生体重、腭裂。研究表明，围产期给予叶酸有助于预防许多先天性异常的发生和复发。4.总结叶酸对于人体健康具有重要作用，当前运用产叶酸菌株合成叶酸成为主要的研究方向，但是在运用中产叶酸菌株的筛选及安全性是运用产叶酸菌株合成叶酸的前提，具有重要意义。当前对于产叶酸菌株的筛选主要运用比色法、薄层层析法、气相色谱-质谱法、高效液相色谱法、微生物法和同位素放射免疫法等，在安全性方面也已有很多方法进行测定，在未来关于产叶酸菌株的测定与安全性测定方法优化需通过更多具体且专业的实验与测试，为工业化生产提供更多有效验证。参考文献BlancquaertD,DeSteurH,GellynckX,VanDerStraetenD.Presentandfutureoffolatebiofortificationofcropplants.JExpBot.2014Mar;65(4):895-906.doi:10.1093/jxb/ert483.PMID:24574483.FerrazziE,TisoG,DiMartinoD.Folicacidversus5-methyltetrahydrofolatesupplementationinpregnancy.EurJObstetGynecolReprodBiol.2020Oct;253:312-319.doi:10.1016/j.ejogrb.2020.06.012.Epub2020Jun13.PMID:32868164.EbaraS.Nutritionalroleoffolate.CongenitAnom(Kyoto).2017Sep;57(5):138-141.doi:10.1111/cga.12233.Epub2017Jul25.PMID:28603928.ZhangJ,CaiD,YangM,HaoY,ZhuY,ChenZ,AzizT,SarwarA,YangZ.Screeningoffolate-producinglacticacidbacteriaandmodulatoryeffectsoffolate-biofortifiedyogurtongutdysbacteriosisoffolate-deficientrats.FoodFunct.2020Jul22;11(7):6308-6318.doi:10.1039/d0fo00480d.PMID:32602881.TameneA,BayeK,KariluotoS,EdelmannM,BationoF,LeconteN,HumblotC.LactobacillusplantarumP2R3叶酸IsolatedfromTraditionalCereal-BasedFermentedFoodIncreaseFolateStatusinDeficientRats.Nutrients.2019Nov18;11(11):2819.doi:10.3390/nu11112819.PMID:31752138;PMCID:PMC6893693.徐玲燕.产叶酸菌株的筛选、生物学特性研究和发酵条件优化[D].浙江工业大学,2012石丹,贾云虹,包怡红,生庆海.叶酸检测方法的研究现状及发展趋势[J].中国乳品工业,2009,37(03):42-45.张毅.叶菜中叶酸含量的HPLC测定条件优化及不同处理方式对叶酸保留效果研究[D].西北农林科技大学,2016.VanDaeleJ,BlancquaertD,KiekensF,VanDerStraetenD,LambertWE,StoveCP.FolateProfilinginPotato(Solanumtuberosum)TubersbyUltrahigh-PerformanceLiquidChromatography-TandemMassSpectrometry.JAgricFoodChem.2014Apr9;62(14):3092-3100.doi:10.1021/jf500753v.Epub2014Mar31.PMID:24655154.郝玲,郑俊池,田熠华,范大为,李竹.血浆叶酸两种常用检测方法检测结果的比较[J].北京大学学报(医学版),2004,(02):210-214.KOHASHIM,INOUEK,SOTOBAYASHIH,etal.Microdetermi-nationofFolateMonoglutamatesinSerumbyLiquidChromatographywithElectrochemicalDetection[J].JChromatogr,1986,382:303-307.]张一爽.副干酪乳杆菌抗生素耐药性分析及蛋白酶活性评价[D].哈尔滨工业大学,2020.HassanHA,DingX,ZhangX,ZhuG.FishborneEdwardsiellatardaehainvolvedinthebacterialbiofilmformation,hemolyticactivity,adhesioncapabilityandpathogenicity.ArchMicrobiol.2020May;202(4):835-842.doi:10.1007/s00203-019-01794-x.Epub2019Dec21.PMID:31865430.苏婷,罗鹏,陈偿,任春华,胡超群.溶藻弧菌溶血活性检测及溶血素基因、启动子区功能[J].微生物学通报,2013,40(07):1138-1144.何杉杉,王晓蕊,彭禹熙,马立娟,杜丽平.雪莲菌中乳酸菌的益生特性研究[J/OL].食品科学:1-15[2021-08-23]./kcms/detail/11.2206.TS.20210630.1