实验核酸的提取_第1页
实验核酸的提取_第2页
实验核酸的提取_第3页
实验核酸的提取_第4页
实验核酸的提取_第5页
已阅读5页，还剩5页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

实验核酸的提取实验核酸的提取第1页CompanyLogo一、试验原理

核酸是生物体最主要组成成份之一。动物组织细胞中核糖核酸（RNA）与脱氧核糖核酸（DNA）大个别与蛋白质结合，以核蛋白形式存在。所以分离核酸时必须使核酸与蛋白质分离，并除去蛋白质。本试验是将组织匀浆后加水饱和酚溶液，振荡使蛋白质变性，变性蛋白质溶于酚相或两界面处形成凝胶层。而DNA或RNA则溶于上层水盐溶液中。在离心后上层水盐溶液中加入乙醇，核酸不溶于乙醇而形成白色絮状沉淀析出。

DNA与RNA均由单核苷酸组成，每个单核苷酸中含有磷酸、嘌呤与嘧啶、戊糖（核糖、脱氧核糖)。核酸用硫酸水解后，即可游离出这三种物质。用下述方法可分别判定出这三类物质。实验核酸的提取第2页CompanyLogo（1）磷酸：用钼酸铵与之作用可生成磷钼酸，磷钼酸可被氨基萘酚磺酸还原成蓝色钼蓝（2）嘌呤碱：用硝酸银与之反应生成灰褐色絮状嘌呤银化合物。（3）戊糖:A.核糖:用硫酸使之生成糠醛，糠醛与3，5－二羟甲苯综合成为一个绿色化合物B.脱氧核糖：在硫酸作用下，与二苯胺生成蓝色化合物实验核酸的提取第3页CompanyLogo二、试剂及器材钼酸铵试剂氨基萘酚磺酸3，5－二羟甲苯溶液二苯胺试剂0.9%NaCl20％三氯醋酸水饱和酚预冷95％乙醇浓硫酸5%硝酸银5%硫酸实验核酸的提取第4页CompanyLogo试验步骤一：动物组织中核酸提取1.匀浆制备：全班制备一份。取冻存兔肝20g置匀浆器中，加入0.9%NaCl溶液60ml制成匀浆。2.提取：将匀浆取出分装在四个100ml塑料离心管内，分别加入1mol/LNaCl溶液15ml，混匀，再加入水饱和酚溶液40ml，猛烈振荡10min，然后4000rpm离心20min。将上清轻轻吸入一烧杯中，每2人一组取上清液4ml于小离心管中，加入等量预冷95%乙醇，即可见白色沉淀逐步析出，静置10min后，3500rpm离心10min，倾去上清，即得白色核酸钠沉淀。实验核酸的提取第5页CompanyLogo试验步骤二、核酸水解在含有核酸钠盐离心管内加入5%硫酸4ml，用玻璃棒混匀，转入小试管中，在沸水浴中加热15min。实验核酸的提取第6页CompanyLogo试验步骤三、DNA与RNA成份判定（1）嘌呤碱判定：试管号水解液5%硫酸浓氨水5%硝酸银1220滴————20滴数滴呈碱性数滴呈碱性10滴10滴加入硝酸银后，观察有什么改变？静止15min后再比较两管中沉淀颜色有何改变？实验核酸的提取第7页CompanyLogo（2）磷酸判定管号水解液5%硫酸钼酸铵试剂氨基萘酚磺酸1210滴————10滴5滴5滴20滴20滴沸水浴中加热数分钟，观察两管颜色改变。实验核酸的提取第8页CompanyLogo（3）核糖判定：管号水解液5%硫酸3，5－二羟甲苯溶液124滴————4滴6滴6滴沸水浴中加热10min，比较两管颜色改变。实验核酸的提取第9页CompanyLogo（4）脱氧核糖判定管

人人文库> 全部分类> 办公材料 > 办公文档

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论