分子诊断刘斌VIP

分子诊断刘斌分子诊断刘斌第1页

肿瘤发生根本原因是因为基因异常改变引发。伴随分子生物学发展，尤其是人类基因组计划顺利实施、人类基因组序列剖析、相关基因功效识别，对肿瘤发生、发展及转归机制有了更深入了解，使人类除了能更早期发觉及诊疗肿瘤外，还可预测人群或个体发生肿瘤风险（肿瘤易感性）、病因检测、肿瘤恶性特征、对特定治疗伎俩反应（疗效预测）、转移复发可能与早期发觉等，进行肿瘤诊疗、分类、判断预后及指导治疗。分子诊断刘斌第2页

如今检测癌患者基因状态有很多方法：

IHC，FISH，CISH，SouthernBlot，PCR，RealTimePCR。现如今FISH技术已应用于实体瘤、血液肿瘤、产前产后多个领域。分子诊断刘斌第3页荧光原位杂交Fluorescenceinsituhybridization原理利用DNA碱基正确互补性，将直接标识了荧光单链DNA(探针)和与其互补目标样本DNA(玻片上标本)杂交,经过观察荧光信号在染色体上位置反映对应染色体情况FISH分子诊断刘斌第4页分子诊断刘斌第5页FISH检测类型基因过表示检测基因突变及其检测基因易位与重排染色体数目标检测端粒酶与肿瘤关系检测分子诊断刘斌第6页一.基因过表示检测1.对HER2检测检测方法检测指标优点缺点IHCHER2蛋白费用低光镜即可观察结果准确性差，判断主观性强，假阳性、阴性率高CISHHER2DNA光镜即可观察结果对低倍扩增及染色体非整倍扩增检测灵敏度下降FISHHER2DNA对于低倍、高倍及染色体非整倍性扩增检测准确性高，灵敏度特异性好，结果判断比较客观，是HER2基因检测“金指标”相对费用较高其中FISH是FDA同意方法，被誉为“金标准”。分子诊断刘斌第7页ICH赫赛汀分子诊断刘斌第8页

FISH技术对HER2基因检测HER-2基因为致癌基因，位于17q11.2-q12可编码跨膜蛋白，基因有扩增乳腺癌对三苯氧胺不敏感。HER-2基因扩增是决定Herceptin是否有效关键性指标。分子诊断刘斌第9页赫赛汀(Herceptin)抗肿瘤机制

阻断异常信号转导增强抗体依赖性细胞毒作用分子诊断刘斌第10页乳腺癌和胃癌中HER2基因扩增比率所做乳腺癌中HER2基因检出阳性率为65%；胃癌中HER2基因检出阳性率为35.7%。标本HER2总数阳性例数乳腺癌2617胃癌145总计40例分子诊断刘斌第11页2.非小型细胞肺癌中EGFR基因扩增检测

EGFR扩增EGFR无扩增分子诊断刘斌第12页

NSCLC中EGFR基因扩增鳞癌扩增为80%左右，腺癌与大细胞癌为60%左右基因扩增能引发EGFR酪氨酸激酶活化，激发其下游一系列信号传导路径，促进肿瘤发生发展，基因扩增与酪氨酸激酶抑制剂敏感性相关基因扩增病人用药有效率达38.9%，无扩增病人用药有效率在9.8%分子诊断刘斌第13页

EGFR功效

EGFR在各种上皮性肿瘤高表示,其过表示与肿瘤细胞增殖、活动性、粘连性、侵袭性、凋亡抑制和血管生成相关,最终造成细胞转化、增殖,抵抗细胞凋亡、促进细胞生存,与肿瘤发生、发展、临床分期、生存期、预后和对治疗反应相关。分子诊断刘斌第14页TKGenetranscriptionCellCycleProgression抗凋亡CancerATPEGFR变异分子诊断刘斌第15页当前应用于NSCLC靶向治疗药品吉非替尼(gefitinib,ZD-1839,商品名Iressa

FDAapproved)厄洛替尼(erlotinib,OSI-774,商品名TarcevaFDAapproved)西妥昔单抗:(cetuximabFDAapproved)

分子诊断刘斌第16页二.基因突变及其检测Real-time检测基因突变原理TaqMan探针机理:DNA聚合酶在延伸阶段把探针切碎，产荧光基团和荧光淬灭基团分开，于是荧光得以检测。分子诊断刘斌第17页EGFR基因突变突变率在33%左右，其中腺癌高达48%（董强刚等）东方亚裔显著高于高加索人种、女性高于男性、非吸烟高于吸烟EGFR19、21外显子突变占95%左右EGFR变异使EGFR酪氨酸激酶ATP结合位点一些关键基团发生重构,使得小分子酪氨酸激酶抑制剂更易与之结合，增强了与ATP竞争性抑制剂相互作用全球突变型NSCLC用Iressa/Tarceva有效率约80%；无突变NSCLC用ressa/Tarceva有效率约10%。

分子诊断刘斌第18页Real-time检测EGFR19、21突变分子诊断刘斌第19页K-RAS基因突变检测KRAS基因属于RAS家族一员，包含K-RAS,N-RAS,H-RAS含有GTP酶活性，活化状态与GTP结合，失活与GDP结合，绝大个别细胞是与GDP结合非活化状态参加调整细胞生长、增殖、分化与凋亡15-20%NSCLC存在RAS基因突变，其中90%以上是K-RAS突变，12号密码子突变占80%以上。而腺癌病人突变占30%，K-RAS突变与吸烟亲密相关，终生未吸烟未发觉K-RAS基因突变与EGFR基因突变存在排斥性是Gefitinib与Erlotinib原发耐药分子标识之一分子诊断刘斌第20页

在直肠癌中K-ras基因突变患者不会从EGFR单抗靶向治疗中获益，K-ras野生型患者对cetuximab/Erbitux（爱必妥）和panitumumab/Vectibix（维克替比）单药或与基础化疗联合治疗反应率显著大于突变型患者。野生型分子诊断刘斌第21页现临床通常将EGFR和K-RAS基因联合检测，来针对非小细胞肺癌进行靶向治疗，对拟行TKI治疗患者，能够首先检测KRAS突变状态，排除阳性后对KRAS阴性者进行EGFR突变检测；若EGFR突变阳性，选择TKI治疗。

分子诊断刘斌第22页三.基因易位与重排分子诊断刘斌第23页1.慢性淋巴细胞白血病（CLL）检测经过对P53、RB1、D13S25、ATM基因以及12号染色体检测来判断预后。分子诊断刘斌第24页2.慢性粒细胞白血病（CML）检测BCR/ABL融合基因1.辅助诊疗CML2.指导格列卫用药3.药品使用效果评定4.骨髓移植效果评定BCR/ABL基因融合正常细胞分子诊断刘斌第25页3.急性早幼粒细胞白血病（M3）检测PML/RARA融合基因。指导全反式维甲酸(Alltrans-retinoicacid，ATRA)用药ATRA治疗机制是靶向降解PML/RARA融合蛋白，促进阻滞在早幼粒细胞阶段白血病细胞分化成熟。PML/RARA融合基因正常细胞分子诊断刘斌第26页3.性染色体骨髓错配移植检测用于监测性染色体错配骨髓移植效果女性患者骨髓移植前女性患者骨髓移植后分子诊断刘斌第27页四.染色体数目标检测不明原因流产中较为常见有X单体，发生率约为20%；16号三体，发生率约为16%；18号三体，发生率约为3%；21三体，发生率约为5%；22三体，发生率约为5%。进行染色体检测能够为下一胎妊娠遗传咨询提供资料。

21三体13三体分子诊断刘斌第28页其它项目一.基因重排在淋巴瘤诊疗中应用 它在淋巴瘤分型、疗效评价、预测复发和预后评定等方面有主要临床意义。二.端粒酶与肿瘤关系检测

因为TERC（telomeraseofRNAcomponent）基因编码端粒酶RNA组分，维持端粒长度，该基因扩增使得端粒稳定，阻止细胞凋亡，造成肿瘤产生。当病理检测不能明确患者分级情况下：