动物细胞工程曲

动物细胞工程曲第1页，共34页，2023年，2月20日，星期一关于蛋白质工程的说法错误的是（）A.蛋白质工程能定向改造蛋白质的分子结构，使之更加符合人类的需要B.蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作，定向改变分子结构C.蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子D.蛋白质工程又称为第二代基因工程关于蛋白质工程的说法错误的是（）A.蛋白质工程能定向改造蛋白质的分子结构，使之更加符合人类的需要B.蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作，定向改变分子结构C.蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子D.蛋白质工程又称为第二代基因工程下列关于蛋白质工程的说法错误的是（）A．蛋白质工程能定向改造蛋白质分子的结构，使之更加符合人类的需要B．蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作，定向改变分子的结构C．蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子D．蛋白质工程与基因工程密不可分，又被称为第二代基因工程下列关于蛋白质工程的说法错误的是（）A．蛋白质工程能定向改造蛋白质分子的结构，使之更加符合人类的需要B．蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作，定向改变分子的结构C．蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子D．蛋白质工程与基因工程密不可分，又被称为第二代基因工程2、下列关于蛋白质工程的说法错误的是（）A．蛋白质工程能定向改造蛋白质分子的结构，使之更加符合人类的需要B．蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作，定向改变分子的结构C．蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子D．蛋白质工程与基因工程密不可分，又被称为第二代基因工程B科学家利用生物技术将改造后的人干扰素基因导入小鼠受精卵的细胞中，经培育获得转基因小鼠，从转基因小鼠的乳汁中可以提取出人的干扰素。分析：该项技术手段为基因工程还是蛋白质工程？如何判断？第2页，共34页，2023年，2月20日，星期一科学家用植物细胞杂交方法，将番茄的原生质体和马铃薯的原生质体融合，成功地培育出了“番茄—马铃薯”杂种植株如图，其中①～⑤表示过程，英文字母表示细胞、组织或植株。据图回答下列问题：（1）实现过程②是指____________，在此之前使用____________________处理细胞以除去细胞壁。与过程③密切相关的具有单层膜结构的细胞器为_____。诱导②的方法有______________________________。原生质体融合纤维素酶、果胶酶物理方法：离心、振动、电激等化学方法：聚乙二醇（PEG）高尔基体第3页，共34页，2023年，2月20日，星期一（2）在利用杂种细胞培育成为杂种植株的过程中，依据的原理是______________，其中过程④⑤相当于______________过程，涉及的分裂方式为__________。植物细胞的全能性脱分化、再分化有丝分裂(3)e内的细胞表示

，特点是_________________,它与①相比分化程度

，全能性

。

(4)若想制作人工种子，应该选用

，再包裹上____________________而制成。

细胞排列疏松，高度液泡化的薄壁细胞愈伤组织未分化高胚状体人工胚乳、人工种皮（5）植物体细胞杂交的繁殖方式_______，具有___个亲本的优良性状。与传统的有性生殖相比具怎样的优点_______________。无性生殖两克服远缘杂交不亲和的障碍第4页，共34页，2023年，2月20日，星期一动物细胞工程常用的技术手段：动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。知识回忆：植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物细胞工程通常以获得什么为目的？植物组织培养,植物体细胞杂交完整植物体第5页，共34页，2023年，2月20日，星期一一、动物细胞培养1、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？3、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？4、如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？2、培养瓶中的细胞在生长过程中表现出怎样的生长特点？5、如何理解原代培养和传代培养？6、传代培养的细胞都能一直传代下去吗？第6页，共34页，2023年，2月20日，星期一一、动物细胞培养1、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？先用剪刀剪碎,后用蛋白酶处理3、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞分裂就会停止分裂增殖，这种现象叫接触抑制。4、如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？将贴满细胞壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖。这样的过程叫做传代培养2、培养瓶中的细胞在生长过程中表现出怎样的生长特点？贴壁生长、接触抑制第7页，共34页，2023年，2月20日，星期一5、如何理解原代培养和传代培养？培养过程中，在第一培养瓶中培养就是原代培养，之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养6、传代培养的细胞都能一直传代下去吗？不都能有些遗传物质发生改变，能无限增殖。第8页，共34页，2023年，2月20日，星期一能力提高：1、用文字箭头的形式表示出动物细胞培养的过程2、总结动物细胞培养的概念及依据的原理第9页，共34页，2023年，2月20日，星期一动物胚胎或幼龄动物的组织块胰蛋白酶或胶原蛋白酶先剪碎单个细胞加培养液稀释制成细胞悬液原代培养传代培养细胞分裂旺盛易培养去掉组织细胞间的蛋白质过程：用文字、箭头表示细胞贴壁接触抑制转入培养瓶中胰蛋白酶处理分瓶继续培养10—50代：细胞增殖缓慢甚至停止，50代以后：部分细胞的细胞核型发生变化，获得不死性，无限增殖10代以内：遗传物质不变原理：细胞的增殖第10页，共34页，2023年，2月20日，星期一分析：1、一组概念：贴壁生长、接触抑制，原代培养、传代培养，细胞株、细胞系2、动物细胞培养的条件有哪些？3、动物细胞培养技术的应用？第11页，共34页，2023年，2月20日，星期一强调一：细胞贴壁■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。■培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于贴附。第12页，共34页，2023年，2月20日，星期一■当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。强调二：接触抑制第13页，共34页，2023年，2月20日，星期一3、培养条件：（1）无菌、无毒的环境（2）营养（3）温度和PH

（4）气体环境：

保证细胞顺利的生长增殖措施：①对培养液和用具进行无菌处理②添加一定量的抗生素③定期更换培养液）合成培养基（已知成分），外加动物血清、血浆等36.5+（-）0.5℃,7.2-7.4O2和CO2，二者的作用分别是什么？细胞培养时常用的混合气体的组成：（95%空气和5%CO2）第14页，共34页，2023年，2月20日，星期一问题1：为什么用胰蛋白酶处理而不用胃蛋白酶？动物细胞培养的最适PH值为7.2-7.4，胰蛋白酶作用的适宜PH为7.2-8.4，胃蛋白酶适宜PH为1.5。胃蛋白酶在PH为7.2-7.4的动物细胞培养中无活性。合作探究问题2、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组织培养基有何独特之处？主要成分：（葡萄糖、氨基酸）、（水、无机盐）、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基2、成分中有动物血清等问题3、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？目前还不能，高度分化的动物细胞全能性受到限制，失去了发育成完整个体的能力，动物细胞培养只能使细胞数目增多。第15页，共34页，2023年，2月20日，星期一细胞的全能性细胞植物体或组织培养结果获得细胞或细胞产物快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、水、维生素、动物血清等蔗糖、氨基酸、植物激素、水、矿物质、琼脂等培养基成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖（分裂）原理动物细胞培养植物组织培养比较项目植物组织培养和动物细胞培养的比较第16页，共34页，2023年，2月20日，星期一1、下图表示从苏云金芽孢杆菌分离出来的杀虫晶体蛋白质基因（简称Bt基因）及形成转基因抗虫棉的图解。（1）图中a过程要用到的酶是_________。（2）在进行图中b过程时．由我国科学家独创的十分简便经济的方法是_______，此外，也经常采用________法。若要培育转基因绵羊，则此过程要用__________的方法。（3）为确定抗虫棉是否培育成功，既要用放射性同位索标记的___________作探针进行分子杂交测试，又要在个体水平上鉴定，后者具体过程是______________。限制酶花粉管通道法农杆菌转化法显微注射法Bt基因把害虫放在抗虫棉植株上，看其是否存活第17页，共34页，2023年，2月20日，星期一2、草莓生产上传统的繁殖方式易将所感染的病毒传播给后代，导致产量降低、品质变差。运用微型繁殖技术可以培育出无病毒幼苗。草莓微型繁殖的基本过程如下：

①②③④脱分化再分化(1)微型繁殖培育无病毒草莓苗时，一般选取________作为外植体，其依据是_______________。(2)若①是花药，则④是

，继续对其使用___处理可获得

正常植株，该过程称为

。

（3）若利用此项技术培育相关组织制造治疗烫伤、割伤的药物——紫草素，培养将进行到（填序号）

；若想制作人工种子，应该选用（填序号）

。人工种子是否都具有可育能力？理由：

芽尖、茎尖茎尖(或根尖)病毒极少单倍体纯合子单倍体育种②③秋水仙素第18页，共34页，2023年，2月20日，星期一3、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答：（1）容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自_______________________。

（2）容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是___,然后用_________酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的目的是_______________。(3)培养首先在B瓶中进行，瓶中的培养基成分______________________________________________等。动物胚胎或幼龄动物的组织块剪碎胰蛋白酶或胶原蛋白避免接触抑制及细胞易与培养液进行物质交换（糖、氨基酸、维生素、促生长因子）（水、无机盐）动物血清、血浆第19页，共34页，2023年，2月20日，星期一(4)在B瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第

代，到这时的培养称为________。（5）为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用_________处理，然后配置成

，再分装。（6）在C瓶中正常培养了一段时间后，发现细胞全部死亡，原因是_______________。

10原代培养胰蛋白酶细胞悬液细胞没有癌变第20页，共34页，2023年，2月20日，星期一二、动物体细胞核移植技术与克隆动物:1、克隆动物：2、核移植概念：3、核移植的种类胚胎细胞核移植体细胞核移植（难度高）将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物4、体细胞核移植的过程为什么？第21页，共34页，2023年，2月20日，星期一从优良供体动物中取体细胞采集卵母细胞，体外培养到减数第二次分裂的中期

对供体体细胞进行细胞培养通过显微操作去核，得到去核卵母细胞将供体细胞核注入去核卵母细胞电激，构建重组胚胎将早期胚胎移植到代孕母牛体内分娩出克隆牛核移植过程：体细胞核移植思考：该克隆牛的遗传物质与供体牛之间有何关系？性状主要与哪方动物相同？克隆动物的成功说明了什么？

第22页，共34页，2023年，2月20日，星期一5、体细胞核移植技术的应用前景（了解）畜牧业方面：1、加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育2、保护濒危物种医药卫生方面：1、做生物反应器，生产医用蛋白2、转基因克隆动物可作为异种移植的供体3、人的核移植胚胎干细胞可用于组织器官的移植4、深入了解胚胎发展和衰老过程5、追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病6、该技术存在的问题（了解）成功率低、存在健康问题、克隆动物的食品安全性问题等第23页，共34页，2023年，2月20日，星期一卵细胞Ａ母绵羊Ｂ母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核细胞核移植早期胚胎卵裂C母绵羊子宫胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育过程融合后的卵细胞第24页，共34页，2023年，2月20日，星期一知识回忆：1、用箭头和文字的形式简述植物体细胞杂交的过程分析：去壁的方法、融合的方法？形成杂种细胞的标志、杂种植株形成的标志？2、用文字箭头的形式表示出动物细胞培养的过程分析：培养过程中主要有那两个阶段的培养，培养过程中表现出来的特点细胞株及细胞系，动物细胞的培养条件培养应选用怎样的动物组织材料，为什么？将动物组织分散成单个细胞的方法？能否用胃蛋白酶？为什么要分散成单个细胞？

第25页，共34页，2023年，2月20日，星期一3、用文字箭头的形式表示出细胞核移植的过程分析：采用的卵母细胞是处于哪一时期的？克隆的动物遗传性状100%与提供核的动物相同吗？为什么？动物细胞核移植的分类：第26页，共34页，2023年，2月20日，星期一三、动物细胞融合1、概念：？又称？得到的细胞称为什么？2、原理：？3、诱导融合的方法：？与植物细胞融合方法的区别是？4、常用在哪一领域？四、单克隆抗体1、获得抗体的传统方法是？该方法有何缺陷？2、动物体内的抗体由什么细胞产生？人的血清中含有抗体的种类？4、一个B淋巴细胞能否在体外培养条件下，无限增殖？5、如何才能赋予B淋巴细胞无限增殖的能力，从而产生大量的抗体呢？科学家有何设想？这种设想的结果是什么？第27页，共34页，2023年，2月20日，星期一设计方案：一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖杂种细胞能力提高：用文字箭头的形式表示出单克隆抗体的制备过程第28页，共34页，2023年，2月20日，星期一抗原小鼠B淋巴细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞细胞融合，筛选细胞培养筛选，继续培养体外培养体内培养单克隆抗体单克隆抗体的制备第29页，共34页，2023年，2月20日，星期一1、对小鼠注射抗原的目的是什么？2、诱导融合的方法有哪些？及融合细胞类型？3、怎样筛选出杂交瘤细胞？该细胞有何特点？4、为什么要进行专一抗体检测和克隆化培养？5、大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法？B-B细胞B-瘤细胞（杂交瘤细胞）瘤-瘤细胞使其发生免疫反应，产生抗体，获得与抗原对应的效应B细胞物理（如：电激），化学（如：聚乙二醇），灭活的病毒用选择培养基筛选既能无限增殖，又能产生专一性抗体将不同种杂交瘤细胞分开，筛选出能产生所需特异性抗体的杂交瘤细胞

①体外培养杂交瘤细胞，从培养液中提取②将杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔中，从腹水中提取第30页，共34页，2023年，2月20日，星期一整个制备过程为何要经过两次筛选及其采用的方法第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗