修改植物病毒病害及脱毒

修改植物病毒病害及脱毒修改植物病毒病害及脱毒第1页第一节植物病毒病害概述

当前在高等植物中，发觉病毒病已超出700种，数量仅次于真菌性病害。

一、植物病毒病概念

指由病毒和类似病毒微生物如类病毒、植原体、螺原体以及类细菌等引发一类植物病害。植物病毒必须在寄主细胞内营寄生生活，专一性强，某一个病毒只能侵染某一个或一些植物，但也有少数为害广泛。修改植物病毒病害及脱毒第2页二、植物病毒病症状

受害植物常表现以下症状：

1．变色

2．坏死

3．畸形修改植物病毒病害及脱毒第3页Symptomsofcommonviraldiseases修改植物病毒病害及脱毒第4页植物病毒症状修改植物病毒病害及脱毒第5页修改植物病毒病害及脱毒第6页黄瓜花叶病毒病：

皱缩,卷叶,黄化修改植物病毒病害及脱毒第7页褪绿大白菜病毒病修改植物病毒病害及脱毒第8页辣椒病毒病修改植物病毒病害及脱毒第9页萝卜花叶毒病修改植物病毒病害及脱毒第10页番茄病毒病

修改植物病毒病害及脱毒第11页修改植物病毒病害及脱毒第12页黄瓜花叶病毒病：修改植物病毒病害及脱毒第13页修改植物病毒病害及脱毒第14页三、植物病毒感染方式

1．植物病毒经过寄主伤口感染----农田操作、人工移植、摘心、整枝、打杈。

2．植物病毒经过动物传输感染--传输介体除昆虫外，还有真菌、线虫、菟丝子等。

3．植物病毒经过染病植物营养器官传输—营养繁殖体感染下一代。

4、种子和花粉传输—个别豆科植物种子。修改植物病毒病害及脱毒第15页当前，在生产上尚无特效药彻底消除植物体内病毒，但经过组织培养却能够实现消除植物体内病毒；所以，组织培养脱毒显得非常主要；修改植物病毒病害及脱毒第16页第二节植物脱毒技术

一、植物脱毒机理

病毒在植物体内分布是不均匀，在茎尖中呈梯度分布。在受侵染植株中，顶端分生组织无毒或含毒量极低。较老组织含毒量伴随与茎尖距离加大而增加。修改植物病毒病害及脱毒第17页①植物细胞分裂和病毒繁殖之间存在着竞争。在旺盛分裂细胞中植物核蛋白合成占优势，在细胞伸长生长久间病毒核蛋白合成占优势。

②病毒在植物体内传输主要是经过维管束实现，但在分生组织中，胞间连丝和维管组织还不健全。

③在茎尖中存在高水平内源生长素，可抑制病毒增殖。茎尖培养主要用于消除病毒以及类病毒、类菌质体、细菌和真菌等病原物。修改植物病毒病害及脱毒第18页二、植物脱毒方法

（一）物理脱毒法

1．热处理脱毒

植物组织处于高于正常温度环境中，组织内部病毒受热以后个别或全部钝化，但寄主植物组织极少或不会受到伤害。但每种植物都有其临界温度范围，超出这一临界范围或在此范围内处理时间过长，都会造成寄主植物组织受伤。为此可使用变温处理方法，高（40℃）和低温（16～20℃）交替处理，既能确保植物材料不受伤害，又能除去病毒。修改植物病毒病害及脱毒第19页（1）温汤浸渍处理适合用于休眠器官、剪下接穗或种植材料，在50℃左右温水中浸渍10分钟至数小时，方法简便易行，但易使材料受伤。

（2）热空气处理热空气处理对活跃生长茎尖效果很好，将生长盆栽植株移入温热治疗室（箱）内，普通在35～40℃，短则几十分中长可达数月。修改植物病毒病害及脱毒第20页植物生长区与热处理区关系温度生长量热处理区病原菌被消除寄主被杀死修改植物病毒病害及脱毒第21页2．低温处理脱毒

低温处理亦称冷疗法，菊花植株在5℃下，经4～7.5个月处理后，切取茎尖进行离体培养，能够有效去除菊花矮化病毒与菊花褪绿斑驳病毒，仅茎尖培养则无此效果，当前低温脱毒报道尚少，但不失为一个脱毒方法。修改植物病毒病害及脱毒第22页（二）化学脱毒法

化学脱毒法代表是抗病毒药剂处理脱毒。用于植物脱毒抗病毒药剂主要包含嘌呤和嘧啶类似物、氨基酸、抗生素等。

多年来，在脱毒生产中，经常采取且效果很好抗病毒药剂有：

①病毒唑

②抗病毒醚和DHT修改植物病毒病害及脱毒第23页（三）生物脱毒法

1．茎尖培养脱毒

植物根尖和茎尖等顶端组织不带病毒。但不含有病毒个别不超出0.1～0.5mm。这是因为分生区域内无维管束，病毒只能经过胞间连丝传递，其传递速度不如细胞不停分裂和活跃生长速度。这么小无病毒组织，利用常规方法无法繁殖利用。自组织培养技术发展以来，这种微小无病毒组织才能够培养利用。修改植物病毒病害及脱毒第24页（1）茎尖培养脱毒方法

茎尖培养脱毒普通包含以下几个步骤：

培养基选择和制备；待脱毒材料消毒；

茎尖剥离、接种和培养；

诱导芽分化和小植株增殖；诱导生根和移栽。修改植物病毒病害及脱毒第25页修改植物病毒病害及脱毒第26页（2）影响微茎尖培养脱毒原因

①外植体大小

外植体大小决定茎尖存活率，外植体越大，成活率越大，而茎尖越小，脱毒效果越好，叶原基存在是否也影响分生组织分化能力，因为叶原基能提供生长素和细胞分裂素，这么可快速形成双极性两端。修改植物病毒病害及脱毒第27页所以，在采取茎尖培养脱毒时，要兼顾脱毒率、成活率及茎尖发育成完整植株能力。茎尖应以大到足以脱毒、小到足以发育成完整植株为前提，普通切取长度为0.2～0.5mm、带有1-2个叶原基茎尖作为培养材料。修改植物病毒病害及脱毒第28页百合茎尖剥离培养一周后培养三周后芽增殖修改植物病毒病害及脱毒第29页②培养条件：光培养效果通常比暗培养好。

③外植体生理状态选择活跃生长芽，培养顶芽茎尖比培养腋芽茎尖效果好。

④取芽时间普通选作萌动期很好。修改植物病毒病害及脱毒第30页

茎尖培养生长可能有四种类型:

（1）组织不增大,很快变褐死亡----可能是生长点受到损伤所致;

(2）组织逐步变绿,但体积增大迟缓-----可把组织转到NAA浓度高于0.05mgL-1培养基上,并提升温度以加速生长。修改植物病毒病害及脱毒第31页(3)组织基部不产生或少产生愈伤组织,生长点发育正常,一个月可形成无根小植株-----最理想情况-----当长有2~3片小叶时,应转移到无生长素培养基上促进生根。

(4)茎尖基部产生大量愈伤组织,而生长点极少生长---不理想----把愈伤组织转移到无生长素培养基上,并降低培养温度,以抑制愈伤组织生长,促进其分化。修改植物病毒病害及脱毒第32页2、愈伤组织培养脱毒

经过植物器官和组织培养去分化诱导产生愈伤组织。然后从愈伤组织再分化产生芽，长成小植株，能够得到无病毒苗。感染烟草花叶病毒愈伤组织经机械分离后，仅有40%单个细胞含有病毒，即愈伤组织无病毒植株。修改植物病毒病害及脱毒第33页3．茎尖微体嫁接

微体嫁接是组织培养与嫁接技术相结合而取得无病毒种苗一个方法。微体嫁接脱毒是在无菌条件下，将切取茎尖（未感染病毒病植株）嫁接到试管中培养砧木苗（或实生苗）上，待其愈合发育为完整植株而到达脱毒效果（木本植物茎尖培养难以生根成植株）。修改植物病毒病害及脱毒第34页病芽嫁接热处理嫩芽嫁接判定取得无病毒苗修改植物病毒病害及脱毒第35页4．花药培养脱毒

花药培养初衷本是取得单倍体，但由花药培养能够产生脱毒植株。以后很多研究证实了这项发觉，而且表明，草莓花药经愈伤组织培养产生再生植株不但脱毒率可高达85%以上，而且其中有95%以上都是能开花结果二倍体。修改植物病毒病害及脱毒第36页5．珠心胚培养脱毒

柑橘、芒果等多胚植物珠心细胞很轻易形成珠心胚。因为珠心细胞与维管束系统无直接联络，而病毒通常是经过维管束韧皮组织传递，所以，珠心组织往往是不带病毒。经过珠心胚培养能够取得无病毒植株。修改植物病毒病害及脱毒第37页三、脱毒苗判定

经过不一样路径脱毒处理所取得材料必须经过严格病毒检测和农艺性状判定证实确实是无病毒存在、又是农艺性状优良株系才能作为无病毒种源在生产上应用。修改植物病毒病害及脱毒第38页（一）脱毒苗判定方法：

1．直观察定法---直接观察植株茎叶有没有这一病毒可见症状特征是一个最简便方法。

2．指示植物法----用病毒在其它植物上出现病毒特征作为判别病毒种类标准，这种专用易产生病毒症状特征寄主即为指示植物，又称判别寄主（荆芥、千日红和各种烟草）。修改植物病毒病害及脱毒第39页苹果褪绿叶斑病指示植物西方烟（叶雏缩）苋色藜（坏死斑）修改植物病毒病害及脱毒第40页葡萄卷叶病指示植物—丽株—叶片反卷、红叶修改植物病毒病害及脱毒第41页3、抗血清判定法

植物病毒是由核酸与蛋白质组成核蛋白，可作为一个抗原，注射到动物体内即产生抗体。抗体存在于血清之中称为抗血清。不一样病毒产生抗血清都有各自特异性，用已知病毒抗血清来判定未知病毒，这种抗血清就成为高度专一性试剂，特异性高，是当前快速定量测定病毒常规诊疗。修改植物病毒病害及脱毒第42页4、电子显微镜检验法

人眼睛不能观察小于0.1mm微粒，借助于普通光学显微镜也只能看到小至200微米微粒，只有经过电子显微镜才能分辨0.5μm大小病毒颗粒。采取电子显微镜能够直接观察病毒，检验出有没有病毒存在，并可得知病毒颗粒大小、形状和结构，借以判定病毒种类。修改植物病毒病害及脱毒第43页5、酶联免疫法

是采取酶标识抗原或抗体定量测定法。将抗原固定在支持物上，加入待检血清，然后加入酶（过氧化物酶或碱性磷酸酶）标识抗体，使待检血清中与对应抗原特异性抗体结合，最终用特殊分光光度计测定。此法是现在灵敏度较高和常使用方法。

6、PCR检测法修改植物病毒病害及脱毒第44页（二）脱毒苗性状判定