感染性疾病实验诊断

感染性疾病试验诊疗

珠江医院微生物室感染性疾病实验诊断第1页主要学习内容及要求

掌握：感染性疾病惯用试验检测项目及其临床意义和评价；各系统病原体检验处理步骤；熟悉：各系统感染常见病原体、常见疾病及病原学检测；了解：

当今感染病特点与感染类型，常见医院感染病原体及特点。感染性疾病实验诊断第2页第一节概述感染性疾病实验诊断第3页一、感染性疾病定义

又称感染病，是由微生物（细菌、病毒、真菌）和寄生虫感染人体后机体组织细胞受到不一样程度损害并出现一系列临床症状和体征。其中，有传染性感染性疾病称为传染病。感染性疾病实验诊断第4页1、微生物变异所出现新亚型、亚性、不经典株及耐药株已成为当今主要病原体；2、感染患者多因免疫防御能力下降感染；3、内源性感染与条件致病菌感染增加，其中肠道菌群和口咽部菌群是最主要内源性感染源。二、感染病特点感染性疾病实验诊断第5页1、按病原体分类：可分为细菌、病毒和真菌；2、按病原体起源分类：可分为内源性感染和外源性感染；3、按疾病特征分类：A.隐性感染（亚临床感染）、B.潜伏感染、C.显性感染（包含急性感染、慢性感染、局部感染、全身感染）、带菌状态、不感染。三、感染类型感染性疾病实验诊断第6页医院感染定义：指来自医院或医疗机构感染，包含在医院获得出院后才发生感染，但不包含入院前已存在感染，入院时已处于潜伏期感染。入院48小时后发生感染通常认为是医院感染。四、医院感染感染性疾病实验诊断第7页院感特点：1、院感感染链由感染源、传输路径和易感宿主组成，细菌是主要病原体，且多为异位菌和耐药菌；为此，采集时要预防人体定值菌及环境污染菌对标本污染；判定时要判定到种并提供药品敏感性试验结果；2、全部分离自无菌部位菌株、主要耐药株和流行病学主要菌株都要保留3—5年；四、医院感染感染性疾病实验诊断第8页四、医院感染

院感特点：3、当院感发生率增加而超出该时期预计值时就称为暴发，暴发时应该及时进行环境卫生学检测。感染性疾病实验诊断第9页五、普通试验检测

感染病试验诊疗包含普通试验室检验和病原学试验诊疗，前者是感染病首要

检测项目，含有初筛作用，常见项目以下：1、C—反应蛋白：判别诊疗细菌或病毒感染首选指标，还可判断抗生素疗效和预后；2、前降钙素原：PCT升高程度与感染严重度及预后相关，在全身性细菌感染和脓血症诊疗方面有很高临床价值；感染性疾病实验诊断第10页五、普通试验检测

3、白细胞常规检验：A.白细胞上升：急性细菌感染（如G+C）、一些病毒感染（如传单）；B.白细胞下降：G+b（如伤寒、副伤寒沙门菌）、疟疾、病毒感染；C.嗜酸性粒细胞：寄生虫病；D.单核细胞增多：亚急性心内膜炎、疟疾；E.淋巴细胞增多：病毒感染、一些杆（如百日咳鲍特菌、结核杆菌、布氏杆菌）。

感染性疾病实验诊断第11页五、普通试验检测

4.器官功效改变检测：不一样系统感染造成检测其器官功效改变项目不一，如诊疗中枢神经系统感染还需做脑脊液常规检测。感染性疾病实验诊断第12页

第二节感染性疾病病原检测感染性疾病实验诊断第13页一、标本采集和运输

正确选择、采集与运输标本是病原学试验诊疗第一步，留取标本质量关系到试验诊断结果正确是否。

错误检验结果主要是发生在检验前，所以对不合格标本要拒收并及时和临床沟通！感染性疾病实验诊断第14页二、病原检测方法

依据对与病原体相关不一样成份检测，能够分为以下几个检测方法：

直接显微镜检测

病原体分离培养和判定

病原体抗原检测

病原体抗体检测

病原体核酸检测

细菌毒素检测

感染性疾病实验诊断第15页1、直接显微镜检验包含以下四种方式：

检测方法主要用途方法评价涂片染色显微镜检验能够观察细菌、真菌形态、染色性、排列和特殊结构，也可检验寄生虫简便快速、能提供初步诊疗，对无菌体液尤其有诊疗价值，应用很广泛涂片不染色显微镜检验可观察病原体生长、运动方式、螺旋体形态和运动对螺旋体、梅毒、真菌诊疗比较有意义组织细胞形态学检验能够依据包涵体特点，初步怀疑病毒或衣原体感染多数病毒在组织细胞呈非特异性，难以判断种属复染标本电镜观察和免疫电镜技术能够用来观察病毒颗粒临床上不惯用感染性疾病实验诊断第16页2、病原体分离培养和判定病原体方法评价细菌选择适当培养基培养，然后依据菌落性状和细菌形态染色性作出初诊，最终可用自动化判定系统判定病原体分离和判定是细菌、真菌和病毒感染性疾病诊疗金标准真菌接种于沙氏或脑心琼脂，依据真菌菌落性状及菌丝孢子形态判定到种病毒将标本接种于体外培养细胞、易感动物或鸡胚，然后依据动物发病情况或鸡胚中形成特殊病灶作出初诊，最终用血清学判定感染性疾病实验诊断第17页3、病原体抗原检测用已知抗体，借助金标免疫、荧光免疫、酶免疫等技术检测未知病原体抗原；病原体主要用途评价细菌脑脊液脑膜炎奈瑟菌、痰液中结核杆菌、衣原体、幽门螺旋杆菌等抗原在无菌或极少其它微生物标本中较有意义真菌G试验、隐球菌和曲霉抗原检测隐球菌抗原检测可作为确诊依据，其它不能够病毒肝炎病毒抗原、AIDSp24抗原、轮状病毒抗原、CMVpp65抗原、呼吸道病毒抗原有利于病毒早期诊疗，但需注意交叉反应感染性疾病实验诊断第18页4、病原体抗体检测

用已知抗原，借助ELISA、凝集试验、胶体金标识EIA等技术检测病原体抗体病原体惯用方法评价细菌惯用方法有凝集试验（肥达试验、外斐试验等）、胶体金标志试验、ELISA、间接免疫试验特异性免疫学试验很有诊疗价值，但其特异性不能等同病原菌检出病毒ELISA应用最广泛，适适用于大多数病毒，另外还有中和试验、补体结合试验、免疫印迹法等；可用来检测急慢性病毒感染，同时检测双份血清或lgM抗体较有意义真菌可用ID、CF、LA、EIA等检测曲霉、新型隐球菌、念珠菌等，但免疫低下患者检测往往无价值；有初筛意义，但敏感性和特异性均不高感染性疾病实验诊断第19页5、病原体核酸检测

病原体核酸检测技术主要有PCR、实时荧光定量PCR和DNA探针杂交技术；

评价：含有很高敏感性，可用来判断病毒活动性感染，细菌判定、耐药基因检测和细菌分子流行病学调查，但轻易造成假阳性或假阴性。感染性疾病实验诊断第20页6、细菌毒素检测内毒素检测：鲎试验是当前内毒素检测最敏感、最惯用方法，有利于判断细菌感染严重程度；外毒素检测：免疫法是检测细菌外毒素最常用方法，可用来检测艰难梭菌毒素A或B、大肠埃希菌Vero细胞毒素、金葡肠毒素，反抗生素相关性肠炎很有意义。感染性疾病实验诊断第21页第三节系统感染试验诊疗感染性疾病实验诊断第22页一、血流感染血流感染定义：病原生物经过各种路径进入血流，并经过血流造成全身播散，引发各种临床症状。血流感染常见病原菌包含：

G+C如葡萄球菌、链球菌和肠球菌属，G+b如肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌和流感嗜血杆菌，白念珠菌和脆弱杆菌也较常见。检测项目标选择：

血常规+CRP+血培养判定

感染性疾病实验诊断第23页血流感染标本采集和运输血液标本：尽可能在抗菌药品使用前采集，发烧寒战者在寒战或体温高峰前0.5—1h采集，也能够在寒战发烧1h后采集；普通24h内周期性地搜集2—3次血标本培养。中心静脉导管标本：剪下5cm导管尖端或近心端，及时送到细菌室进行半定量平板滚动培养或定量培养感染性疾病实验诊断第24页血流感染细菌检验程序感染性疾病实验诊断第25页血流感染真菌检验程序感染性疾病实验诊断第26页血流感染寄生虫检验采血制作血涂片、固定与姬氏或瑞氏染色可镜检找红内期阶段疟原虫；对丝虫病、弓形虫病和锥虫病诊疗也有价值。感染性疾病实验诊断第27页血流感染检验临床应用血培养阳性：可确诊血流感染，要及时涂片、革兰染色和镜检，汇报到临床并分离培养判定到种；血培养阴性：血培养5d后仍未报阳，可汇报“培养5天，未见细菌生长”血培养应注意假阳性和一过性菌血症，对比前后分离菌株有利于判别；另外，动态监测BG水平有利于判断疾病发展和预后。感染性疾病实验诊断第28页二、中枢神经系统感染中枢神经系统感染定义：指病原微生物侵犯中枢神经系统实质、被膜及血管等引发急性或慢性炎症性（或非炎症）疾病，如脑膜炎、病毒性脑炎和脑脓肿。中枢感染常见病原体：

脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、新生隐球菌、乙型脑炎病毒、单词疱疹病毒等；检测项目选择：

血常规+CRP+脑脊液生化项目+病原学检测（涂片镜检、培养判定、PCR、血清学试验等）感染性疾病实验诊断第29页中枢感染细菌和真菌检验程序感染性疾病实验诊断第30页中枢系统病毒和寄生虫检测程序病毒检测程序：以血清学试验、核酸分子杂交及核酸扩增技术为主；寄生虫检测程序：取脑脊液沉渣涂片镜检，对阿米巴滋养体、弓形虫、疟原虫、广州管圆线虫幼虫有诊疗意义。感染性疾病实验诊断第31页中枢感染检验临床应用1、脑脊液分离培养阳性：可确诊中枢神经系统感染。抗酸染色查见抗酸杆菌，革兰染色查见阴性双球菌，墨汁染色查见透亮菌体和宽厚荚膜均可汇报。2、血清学有利于诊疗，但要区分假阳性和假阴性；3、PCR对肠道病毒引发病毒性脑膜炎很有意义；4、病毒性脑炎确诊有赖于脑活检病剪发觉细胞内包涵体、病毒核酸或脑脊液检测病毒抗原或抗体。感染性疾病实验诊断第32页三、呼吸系统感染呼吸系统感染：包含急性上呼吸道感染、急性气管—支气管炎、慢性支气管炎和肺炎。常见病原体：

急性上呼吸道感染90%由病毒引发，细菌则以溶血性链球菌多见；肺炎80%由细菌引发，以肺炎链球菌、金葡、肺炎克雷伯菌、流感嗜血杆菌、肺炎支原体和肺炎衣原体多见。检测项目选择：血常规+CRP+痰培养判定+免疫学及核酸检测感染性疾病实验诊断第33页呼吸道标本采集和运输

呼吸道标本包含鼻咽拭子、痰、经过气管收集标本（气管内吸出物、气管镜采集法），后者是理想标本。

对于合格痰标本才接收,当白细胞≤25个/LP，鳞状上皮细胞≥10个/LP,应该拒收；

下呼吸道标本中一旦怀疑肺炎支原体、军团菌、双相型真菌、结核分支杆菌等即可认为是合格标本而直接进行病原判定。感染性疾病实验诊断第34页呼吸系统细菌、真菌检验程序感染性疾病实验诊断第35页呼吸系统病毒和寄生虫检验病毒检验：主要采取病毒培养、免疫学和分子生物学检测方法。在流感季节，应对免疫力正常成人进行流感病毒检测；免疫力有缺点成人，应采取细胞培养和分子生物学方法检测；小于2岁婴幼儿应进行呼吸道合胞病毒检测；小于10儿童应进行流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒检测；寄生虫检验：痰液镜检对溶组织内阿米巴滋养体、卫氏并殖吸虫、粪类圆线虫幼虫、蛔蚴、钩蚴等检出有一定意义。感染性疾病实验诊断第36页呼吸系统感染检验临床应用痰涂片抗酸染色：对结核分枝杆菌有诊疗意义；痰中有颗粒状、菌块和干酪样物质：对放线菌病和曲霉菌有诊疗意义；检测出肺炎支原体、军团菌、双相型真菌、结核分枝杆菌：可认为是肺部感染病原体；检出与正常菌相同菌：涂片有大量中性粒细胞，培养后涂片镜检也为优势菌则由诊疗意义；有感染症状、脓臭痰但普通细菌培养为阴性：提醒厌氧菌感染。感染性疾病实验诊断第37页四、胃肠系统感染胃肠道感染：是以呕吐、腹痛、腹泻为临床特征常见感染病，有食物中毒、霍乱、伤寒、细菌性痢疾、结肠炎、胃炎与抗生素相关性腹泻等。常见病原菌：A.侵袭性细菌：沙门菌、志贺菌（A群）、空场弯曲菌、大肠埃希菌（EPEC、EIEC）、幽门螺杆菌等；B.细菌毒素性细菌：霍乱弧菌、志贺菌（B、C、D群），大肠埃希菌（ETEC、EHEC、EAggEC）等；C.病毒：轮状病毒、杯状病毒等；D.真菌：白念珠菌、曲霉等。检测项目选择：血常规+免疫学+PCR/RT—PCR+病原体分离培养判定感染性疾病实验诊断第38页胃肠道标本采集和运输应取脓血或粘液粪便置于清洁容器中尽快送检（不能超出2h），然后接种于选择培养基上；

对于传染性腹泻患者需3次送检粪便进行培养；

疑为寄生虫感染者，要尽快运输水样便以保持原虫滋养体活力，若不能及时送检，应用含10%甲醛和聚乙烯醇小螺口塑料容器保留。感染性疾病实验诊断第39页胃肠道细菌检验程序感染性疾病实验诊断第40页胃肠道病毒和寄生虫检验病毒检验：主要采取ELISA或乳交凝集试验检测病毒抗原、用核酸杂交、PCR和RT—PRC法检测病毒核酸；血清学多用于流行病学调查。寄生虫检验：经过检测粪便中寄生虫虫卵、幼虫、滋养体等对寄生虫感染进行诊疗。感染性疾病实验诊断第41页胃肠道感染检验临床应用粪便直接镜检意义不大，胃肠道感染诊疗有赖于细菌分离与培养；

胃粘膜活检标本直接镜检对幽门螺杆菌较大意义；

镜检观察各菌落数量与球菌与杆菌百分比对诊疗抗生素相关性腹泻有诊疗价值；细胞毒素试验检测艰难梭菌毒素是诊疗引发抗生素相关性腹泻金标准。感染性疾病实验诊断第42页五、肝脏感染肝脏感染：是由病毒、细菌和其它病原体引发肝脏炎性损伤，主要包含肝炎和肝脓肿。常见病原体：肝炎主要由病毒和毒素所致，包含HAV、HBV、HCB、HDV、HEV和CMV；肝脓肿以细菌性多见，主要是化脓性细菌，阿米巴肝脓肿也较为常见。检测项目选择：

血、尿、便、常规+肝功效生化+PCR+病原体涂片分离培养判定感染性疾病实验诊断第43页肝脏感染标本采集和运输

肝炎病毒是肝脏感染主要病原体，血清是检测肝脏病毒最惯用标本；

细菌性肝脓肿多以兼性厌氧菌与厌氧菌混合感染为主，应注意厌氧菌标本采集、运输和检验方法感染性疾病实验诊断第44页肝脏感染病毒检验程序感染性疾病实验诊断第45页肝脏感染细菌和真菌检验抽取肝脓肿脓液，涂片、染色，显微镜检验，再依据镜检结果对标本中可能细菌或真菌种类进行初步预计；然后行病原体分离培养，依据菌落形态、涂片染色镜检和生化反应进行判定；

阿米巴肝脓肿可在肝脓肿脓液中查见阿米巴包囊和滋养体。感染性疾病实验诊断第46页肝脏感染检验临床应用

病毒性肝炎

诊疗主要检验病毒抗原抗体，免疫学检测主要有ELISA、免疫胶体金法、免疫荧光法等方法；HAV和HEV诊疗都主要依赖lgM，HBV主要检查“乙肝两对半”，HCV主要用ELISA初筛，用免疫印迹法确诊,HDV多用ELISA法检测；

另外，PCR法也较常应用，以荧光实时定量PCR应用最为广泛。

感染性疾病实验诊断第47页六、泌尿系统感染泌尿系统感染：是因为大量微生物在泌尿系统中生长繁殖而引发泌尿系统炎症，分为上尿路感染和下尿路感染。绝大多数是单一病原体感染，培养≥3种细菌及念珠菌多为污染所致。常见病原体：大肠埃希菌、肠球菌属、奇异变形杆菌、铜绿假单胞菌和凝固酶阴性葡萄球菌。检测项目选择：尿常规+尿沉渣镜检、分离培养尿液标本采集和运输：多以中段尿为主，对于厌氧菌可采取膀胱穿刺法搜集、无菌厌氧小瓶运输；若是乳糜尿，需加等量乙醚震荡再进行寄生虫检验。感染性疾病实验诊断第48页泌尿系统细菌和真菌检验程序感染性疾病实验诊断第49页泌尿系统感染检验临床应用在临床诊疗基础上，符合以下4条中1条即可诊断为泌尿系统感染：1、膀胱穿刺尿培养细菌数≥103CFU/ml；2、清洁中段尿或导尿留取尿液培养G+C菌数≥104CFU/ml、G+b菌数≥105CFU/ml；3、尿沉渣用相差显微镜检验（x400）在30个视野中有过半都能见到细菌；4、无症状性菌尿症患者在近期（1w）有内镜检验或留置导尿史，尿液培养G+C菌数≥104CFU/ml、G+b菌数≥105CFU/ml；感染性疾病实验诊断第50页七、皮肤及软组织感染

当皮肤屏障受损，外界环境中微生物即可经过破损皮肤侵入引发皮肤和软组织感染，或发生全身感染时，一些微生物也能够经血液扩散至皮肤或皮下组织引发感染。

常见病原体：包含金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和皮肤念珠菌等。

检测项目选择：细菌感染多采取脓性分泌物涂片染色和分离判定；病毒和寄生虫则主要依赖临床表现。感染性疾病实验诊断第51页皮肤及软组织感染标本采集和运输1、采集时，首先要对皮肤表面进行消毒；2、开放性脓肿要用无菌棉拭采取脓液及病灶深部分泌物，封闭性脓肿则以无菌干燥注射器穿刺抽取；3、怀疑是厌氧菌感染者，取脓液后要马上排净注射器内空气，针头插入无菌橡皮塞送检；4、用于病毒检测组织标本应放在有灭菌盐水纱布培养皿内或病毒运输培养基内运输，匀浆