肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座

肝病与肝癌中EGFR、MMP2、MMP9表示及比较曹晓蕾陈莉肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第1页

原发性肝癌(primaryhepaticcarcinoma,PHC)是危害人类健康常见肿瘤，尽管对其发生、发展、演化过程进行了大量研究，但其发生机制还未明了。对EGFR、MMP2、MMP9在肝癌发生发展中作用还未见报道。为此，本文采取免疫组化方法，检测比较在慢性肝病与肝癌中EGFR、MMP2、MMP9表示，探讨其意义。肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第2页1.材料与方法1.1材料：取南通医学院从属医院及周围市医院肝病蜡块标本47例，其中肝癌标本26例、慢性肝病(chronichepaticdisease,CHD)标本21例（包含肝炎、肝硬化）。连续切片4μm厚，贴于APES处理载玻片上。EGFR、MMP2、MMP9及免疫组化试剂盒购于北京中山生物试剂企业。肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第3页1.2方法：⑴HE染色切片病理观察，双盲法进行病理诊疗。⑵免疫组织化学（SP法）检测EGFR、MMP2、MMP9在肝炎、肝硬化、肝癌组织中表示。使用抗体为EGFR(SantacruzBiotechnologyInc),工作浓度1：100;鼠抗人MMP9单克隆抗体（2M-0335）,工作浓度1:50;鼠抗人MMP2单克隆抗体(2M-0330),工作浓度1:50。EGFR染色过程中使用胃蛋白酶消化，全部免疫组化切片经DAB染色，苏木素轻微复染。以磷酸盐缓冲液(PBS)代替第一抗体作为阴性对照。肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第4页1.3判断标准：EGFR阳性定位于肝实质细胞胞浆中，呈棕黄色；MMP2、MMP9阳性定位于胞浆中，呈棕黄色，可见于肝癌细胞、间质Ito细胞、再生肝细胞、新生胆管细胞中。1.4统计学处理：用x2检验，P值取小于0.05作判断差异显著标准。肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第5页2.结果2.1EGFR、MMP2、MMP9在CHD、PHC中表示特征EGFR在CHD中仅有较弱表示，阳性率仅为28.57%(4/21)；在PHC中呈异质性表示，阳性率为73.08%(19/26)，而且呈较强表示。MMP2在CHD中呈较强表示，阳性率为76.19%(16/21)；MMP2在PHC中呈较强表示，阳性率为80.77%(21/26)。MMP9在CHD中有较弱表示,阳性率为52.38%(11/21)，MMP9在PHC中呈较强表示，阳性率为80.77%(21/26)。肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第6页2.2EGFR、MMP2、MMP9在PHC和CHD中比较（表1）表1EGFR、MMP2、MMP9在PHC和CHD中表示比较由表1可见，EGFR在PHC中表示阳性率显著高于CHD中（x2=9.24，P<0.01）；MMP9在PHC中表示阳性率显著高于CHD中（x2=4.31，P<0.05）；MMP2在PHC和CHD中表示阳性率无显著差异（x2=0.15，P>0.05）。肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第7页2.3PHC中EGFR、MMP2、MMP9三者表示比较2.3.126例PHC中MMP2、MMP9表示阳性病例完全一致，即当PHC病例MMP2阳性时，MMP9亦呈阳性，26例PHC中MMP2、MMP9阳性21例，占80.77%；阴性5例，占19.23%。2.3.2PHC中MMP2、MMP9与EGFR表示比较（表2）表2PHC中MMP2、MMP9与EGFR表示比较由表2可见，PHC中MMP2、MMP9与EGFR表示无显著差异（x2=0.538，P>0.05）。肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第8页2.4CHD中EGFR、MMP2、MMP9三者表示比较2.4.1CHD中MMP2、MMP9表示比较（表3）由表3可见，CHD中MMP2、MMP9表示无显著差异(P>0.05)肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第9页2.4.2CHD中EGFR与MMP2、MMP9表示比较（表4）由表4可见，CHD中EGFR表示增高时，MMP2、MMP9表示降低，而EGFR表示阴性中有较多MMP2、MMP9表示，差异显著(P<0.05)肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第10页肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第11页肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第12页肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第13页肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第14页肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第15页肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第16页肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第17页肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第18页肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第19页肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第20页肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第21页肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第22页3.讨论表皮生长因子受体（EGFR）是原癌基因C-erbB-1表示产物，分子量为170KD，属于穿膜受体烙氨酸激酶家族组员，与细胞增殖、分化调整、肿瘤转化亲密相关[1]。它在肿瘤形成中作用日渐受到重视。许多肿瘤组织都有较高水平EGFR表示，并发觉EGFR表示与肿瘤生物学行为有一定相关性。本文发觉，EGFR在CHD组织中阳性表示率较低（28.57%）,而在PHC中阳性表示率较高（73.08%）,经x²检验，EGFR在PHC、CHD中表示有显著差异，EGFR高表示与PHC有一定相关性。EGFR高表示可能是其基因扩增和/或转录增加所致，所以，有些人构想将EGFR作为治疗靶抗原，将抗EGFR抗原单克隆抗体与放疗或化疗剂连接制成“生物导弹”进行抗肿瘤治疗[2]，若这一构想能够实现，再加上本文所发觉EGFR在PHC中高表示，就将为PHC治疗提供一个新思绪。肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第23页

基质金属蛋白酶是一类分解细胞外基质组分锌蛋白酶[3]。它们在有机体生长发育中细胞外基质逆转与重塑以及疾病中病理损害起着极为主要作用。MMP2是相对分子量为7明胶酶A，MMP9是相对分子量为9明胶酶B，明胶酶（Ⅳ型胶原酶）主要降解基底膜、Ⅳ型胶原和明胶。明胶是形成间质中胶原主要成份。在体内由巨噬细胞、结缔组织细胞和肿瘤细胞合成与分泌。肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第24页

大量研究表明基质金属蛋白酶-2（MMP2）、基质金属蛋白酶9（MMP9）与各种肿瘤侵袭相关[4]，但二者与PHC侵袭转移性关系研究不多[5]。尤其是怎样用二者来判断PHC是否含有侵袭转移性报道较少。本文发觉，基质金属蛋白酶2(MMP2)在PHC、CHD组织中都有表示，阳性率分别为80.77%,76.19%,经x²检验，MMP2在PHC、CHD组织中表示无差异。在PHC中，癌组织，癌旁组织都有MMP2表示，所以，不能单纯以有没有MMP2表示来判断PHC有没有侵袭性。基质金属蛋白酶9(MMP9)在PHC、CHD组织中阳性率分别为80.77%,52.38%,经x²检验,MMP9在PHC、CHD中表示有显著差异。MMP9高表示与PHC有一定相关性。肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第25页MMPS是ECM降解酶，主要有三类：①间质胶原酶②明胶酶③间充质溶解素。在大多数恶性肿瘤中，MMPS家族一些组员表示增高、活性增强，并与肿瘤病理分级相关，含有肿瘤诊疗、判别诊疗和判断预后临床价值。肿瘤细胞在侵袭过程中需要基质金属蛋白酶对细胞外基质进行酶解，肿瘤细胞在转移过程中要先后经过进出毛细血管两个过程，在这两个过程中，肿瘤细胞必须穿过内皮细胞基底膜，而这一过程又必须依赖MMPS对基底膜成份酶解。正因为如此，本文中MMP9在PHC中高表示，可能造成肿瘤细胞在侵袭、转移过程中突破各种屏障如基底膜能力大大增强，使肿瘤细胞易于发生转移。所以，MMP9在PHC中高表示可能预示着PHC复发、转移率提升，预后不良。肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第26页

肝癌组织中，肿瘤细胞活跃生长，表示较高EGFR(73.08%)，同时也经过自分泌、旁分泌作用使癌细胞和间质细胞分泌较多MMP2、MMP9，这与肿瘤深入发展，降解ECM而侵润转移相关。

肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第27页众所周知，大部分肝癌均伴有显著肝病背景，慢性肝病中显著特点是大量ECM沉积而合并肝炎肝硬化，肝细胞坏死，炎细胞被吸引到局部，活化Kuffers细胞、单核细胞及血小板释放各种增殖因子。TGF-α、EGF、TNF都使肝星状细胞活化，增生转化为肌成纤维细胞，后者产生大量ECM。炎症阶段是一个从基因活化到蛋白成份表示再到合成ECM在组织内沉积过程。肌成纤维细胞在增殖过程中必定分泌基质金属蛋白酶，它能够使沉积胶原降解。当胶原生成与降解失衡时，ECM过分沉积引发肝纤维化。伴随纤维化加重，胶原酶合成降低，基质金属蛋白酶抑制剂(TMP)增多，后者抑制MMP活性，阻止胶原降解，深入加重纤维化。肌成纤维细胞增生过程中还能合成各种生长因子，经过自分泌、旁分泌形式促进本身增生，继续产生各种ECM成份，此时即使致病因子停顿，肝纤维化仍可继续发展，最终发展为肝癌。

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正如本文观察到，慢性肝病中EGFR表示增加时，MMP2、MMP9均表示降低，可能是因为肝硬化形成中，肝细胞首先增生形成假小叶，另首先，大量纤维化及TMP增多使MMP2、MMP9合成降低所致。所以，临床对慢性肝病治疗应注意保护肝细胞不受损伤，降低肝细胞增生，控制炎症，降低肝硬化程度，促进MMP2、MMP9分泌。不过一旦肝癌形成，就要设法抑制MMP2、MMP9分泌，降低癌细胞侵润与转移。肝病与肝癌中EGFRMMPMMP表达及比较专家讲座第29页4.结论4.1EGFR在PHC中显著高于CHD,说明EGFR表示与PHC有一定相关。4.2MMP2、MMP9在PHC和CHD中表示比较无显著差异，在PHC中含有一致表示，在CHD中表示亦无显著差异。4.3