实验诊断骨髓细胞学和化学染色理论课件

骨髓细胞学检查血细胞的生成与发育全能干细胞

多能干细胞阶段

祖细胞阶段

阶段

1.BFU-E

髓系

2.CFU-GM全能干细胞

3.CFU-EO

4.CFU-Meg

CFU-TL

淋巴系

CFU-BL血细胞分化过程血细胞形态发育规律图造血干细胞髓性干细胞淋巴干细胞原粒原单原红原巨核原浆原淋巴(B/T)早幼早幼幼巨核中性嗜酸嗜碱中幼中幼中幼中幼颗粒巨幼浆中性嗜酸嗜碱幼单幼淋巴(B/T)晚幼晚幼晚幼晚幼产板巨成浆

中性嗜酸嗜碱杆核杆核杆核网织中性嗜酸嗜碱分叶分叶分叶单核成红血小板淋巴(大/小)骨髓内血液内血细胞发育形态演变规律要点

原始

成熟胞体：大

小胞质:量少多色深蓝

浅蓝或灰（红）颗粒无有（特异或非特异）胞核:量大小形态

圆

不规则（或消失）染色质疏松细致紧密粗糙色淡紫色

深紫色核仁:可见消失血细胞的分化、发育、成熟具有一定的规律性，我们在辨认细胞时需要掌握下列几个方面：细胞大小核质比例胞质—量、颜色、内含物、胞核—大小、形状、结构、颜色、核膜、核仁。

胞体：血细胞随着分化发育其体积逐渐变小（巨核细胞系除外）早期红细胞成熟红细胞胞核:血细胞随着分化发育其胞核体积——由大到小形态——由圆到不规则（或消失），淋巴细胞的核型改变不明显染色质—由疏松细致到紧密粗糙颜色——由染淡紫色到深紫色成熟细胞幼稚细胞原始细胞

核仁:血细胞随着分化发育其胞核内的核仁从有到无。原始细胞早期幼稚细胞中晚期幼稚细胞核仁核仁血细胞形态分析要点涂片质量：a．厚薄b．染色c．部位选取

细胞发育连贯性：注意细胞发育过程中各阶段的主要特征结合细胞功能：细胞发育与细胞功能具密切关系骨髓细胞检查

结果分析与临床意义

骨髓象检验的临床应用

1.适应症临床上通常出现下列情况时，可作骨髓细胞学检查：a.外周血数量、成分、形态等异常者b.经一定检查原因不明的发热、肝脾及淋巴结肿大c.出现原因不明的骨痛、骨质破坏、黄疸、紫癜等d.需作治疗观察和其他检查者f.其他（活检、标记检测、染色体检查等）

2.禁忌症a.血友病或凝血因子重度缺陷者b.穿刺部位有炎症或畸形c.晚期妊娠的孕妇骨髓穿刺方法：（一）部位的选择和条件穿刺部位通常选择—髓液丰富、浅表易定位、避开重要器官。如髂后上棘、髂前上棘、胸骨、胫骨等。被穿刺部位的体表皮肤应无破损和炎症及畸型结果的计算和填写检验报告单：首先计算各系统各阶段细胞所占百分比。然后将各阶段粒细胞百分率的总和除以各阶段有核红细胞白分率，得出粒红比值（G/E）。据实填写取材、涂片、染色。检测结果分析与报告方式：（一）结合临床分析1．一般资料2．症状3．体征（二）结合血象分析三系数量和质量（三）骨髓象分析1．小粒、油滴、色泽2．有核细胞增生程度3．细胞数量分析4．细胞形态分析（粒、红、巨、淋、单、浆、其他异常细胞）（四）骨髓象与血象结合分析1．骨髓象相似，而血象有区别（溶贫、急性失血等）2．骨髓象有区别,而血象相似（传淋与慢淋、白血病与类白）3．骨髓象无变化,而血象有变化（传单、部分淋巴瘤）4．骨髓象有变化,而血象无变化（多发性骨髓瘤、戈谢病）5．骨髓象细胞难以辨认,而血象细胞易辨认

（白血病、血液寄生虫、淋巴瘤）临床意义粒细胞系增多-原粒、早幼粒、中幼粒、晚幼粒和杆状核

急性白血病等急性早幼白血病M2、慢性粒细胞白血病等慢性粒细胞白血病、类白、中毒等减少-再障、粒缺、急性造血停滞等。

红细胞系增多-原红和早幼红、中幼红和晚幼红

减少-

巨核细胞系增多-减少-急性红血病、急性红白血病增生性贫血真红、铅中毒、红白血病等纯红再障、急性白血病未分化型、化疗后等MPD、ITP、急性巨核细胞白血病、脾亢、慢粒等再障、急性白血病、慢粒、化疗后等单核系细胞增多-原单及幼单成熟单核淋巴系细胞

增多-原淋及幼淋成熟淋巴急性单核或粒-单细胞血病、慢粒急单变急性单核细胞白血病病、慢性粒单细胞白血病急性淋巴细胞白血病、慢粒急淋变、淋巴瘤等慢性淋巴细胞白血病、淋巴瘤、巨球蛋白血症等再障、病毒感染等

常用血液细胞

化学染色

细胞化学染色是将形态和功能相结合的科学。他在保持完整的细胞形态和细胞结构的前提下，应用化学反应将被检细胞内的各类化学成分和细胞结构及生理活性物质原位的显示。从而对分析细胞化学成分、生理功能、新陈代谢及细胞生理和病理改变有着重要的意义。细胞内染色的范围通常是：蛋白类、多糖类、脂类、盐类和金属类等。采用的方法通常为：化学结合、物理溶解及酶-底物反应。（一）原理过氧化物酶H2O2H2O

[O]无色联苯胺蓝色联苯胺（二）方法根据各公司产品说明书进行（三）正常阳性细胞1.中性粒细胞强阳性2.嗜酸粒细胞强阳性3.单核细胞弱阳性或阳性（弥散状）4.淋巴细胞、红细胞、浆细胞、组织细胞、巨核细胞等均为阴性（四）临床评价病理变化1．增高--再生障碍性贫血、感染、急慢性淋巴细胞白血病、

2.减低--急慢性粒细胞白血病、MDS、风湿热、放射病等3.缺乏—先天性髓过氧化物酶缺乏症。过氧化物酶染色在急性白血病分型中的意义临床上通常将POX染色阳性率3%作为淋巴与非淋巴的分界标准若能结合其他化学染色、细胞免疫标记、遗传学和分子生物学检测则更好二．糖原染色（PAS）此试验中能被过碘酸-雪夫反应呈阳性的多糖类物质有糖原、粘多糖、糖蛋白、糖脂、还包括一些磷脂类物质等，因此PAS阳性不能简单地就表明有糖原的存在，只是在对血细胞的组织化学研究中通常习惯于将PAS阳性认同于糖原。PAS染色虽然不完全代表糖原，但在血液系统疾病特别在各类型急性白血病中却有相当大的应用价值。PAS染色若结合其他化学染色和细胞免疫表型检测可对部分疾病的诊断和鉴别诊断提供一定的价值。

（一）原理

过碘酸乙二醇双醛基+无色品红紫红色化合物（二）方法（三）正常阳性细胞1.粒系—阳性（且随细胞的成熟逐渐增强）.2.单核--阳性（且随细胞的成熟逐渐增强）.3.淋巴—大部分阴性,少数呈阳性.4.巨核—强阳性(粗颗粒或块状).5.浆系--大部分阴性,少数呈阳性.6.红系—阴性.（四）临床评价红系红（白）血病、MDS等幼红细胞可呈阳性。

各类急性白血病的辅助鉴别：

淋粗颗粒或块状单细颗粒弥散状粒细颗粒或均匀红色巨粗颗粒或块状强阳性

三．碱性磷酸酶（NAP）中性粒细胞碱性磷酸酶是中性粒细胞中的特异性颗粒（S颗粒）所释放的一种酶，存在于细胞浆内的三级颗粒中呈不规则形的管状结构，该酶的活力与积分受到体内许多因素的影响。如中性粒细胞的成熟度、HbF、内分泌功能等均可使NAP的积分产生一定的差异，但正常人群中性粒细胞的阳性程度一般很少到三分，绝对达不到四分。若结合染色体检查可协助慢粒的诊断。

（一）原理

pH9.6α-磷酸萘酚+H2Oα-萘酚+磷酸碱性磷酸酶+

重氮盐有色沉淀物（二）方法（三）正常阳性细胞在血细胞中除成熟中性粒细胞阳性外，其他细胞基本呈阴性。（四）临床评价1.生理变化：

年龄、应激、妊娠可见增高或降低

2.病理变化：（1）．增高感染、AA、类白血病、急淋、其它（2）．减低粒缺、脾亢、感染（G－）、病毒、白血病

五．氯化醋酸AS-D萘酚酯酶染色

（AS–DCE）此酶主要分布在粒细胞和肥大细胞中。通常从原粒细胞后期即可见有弱阳性反应，而到早幼粒细胞就可见强阳性反应。且酶的活性不随细胞分化成熟而增强。此酶的阳性产物比POX更为特异。单核细胞、淋巴细胞、巨核细胞等均为阴性，所以在临床上将AS-DCE染色作为是粒细胞的标志性酶。（一）原理

氯化醋酸AS-D萘酚酯酶氯化醋酸AS-D萘酚AS-D萘酚+醋酸+重氮盐有色沉淀物（二）方法（三）阳性细胞

中性粒细胞阳性外，其他血液细胞均为阴性。（四）临床评价粒细胞及肥大细胞的标志酶四．非特异性酯酶

非特异性酯酶是属水解酶,通常可分为中性酯酶(NAE)、酸性酯酶（ANAE）和丁酸酯酶（NBE）。由较多的同工酶所组成，在不同的细胞内存在有不同的同工酶。电泳分析证明人血细胞含有九种酯酶同工酶，如中性粒细胞含同工酶1、2、7、9；单核细胞和血小板含有同工酶4、5。淋巴细胞含有同工酶1和6等。其中同工酶4、5能被NaF所抑制，所以对染色呈阳性的细胞作NaF抑制试验可鉴别中性粒细胞和单核细胞。非特异性酯酶检测通常应用于白血病的鉴别诊断，而白血病细胞的高度异型性或异质性使酶活性的表达出现紊乱，所以组合酯酶检测比单一检测更具价值和意义。在临床上非特异性酯酶一般选用：α-醋酸萘酚酯酶（α-NAE）α-丁酸萘酚酯酶（α–NBE）醋酸AS-D萘酚酯酶（AS-DAE）若将上述任何一个酶与POX或AS-DCE染色于同一张标本片上，就被称为双酶（双酯）染色。可使粒细胞系和单核细胞系分辨得更清楚。

（一）原理（α-NAE、AS-DAE、α-NBE）

α-醋酸萘酚

α-萘酚+醋酸α-醋酸萘酚酯酶+重氮盐有色沉淀物（二）方法（三）正常阳性细胞（四）临床评价此组合酶类染色，主要运用于各种急性白血病的鉴别诊断，特别在急非淋（ANLL）中的分型和亚型分型提供重要依据。

六．铁染色

骨髓铁包括细胞内铁和细胞外铁。细胞内铁为幼红细胞合成血红蛋白时的利用形式，而细胞外铁是骨髓以含铁血黄素形式存在的储存铁。骨髓铁染色可了解骨髓中幼红细胞对铁利用的功能和铁原料在机体内的吸受与储存情况，若将铁染色与血清、总铁结合力等检测综合观察，可了解机体内铁的动态变化。所以铁染色是诊断缺铁性贫血最重要且较早期的指标之一。

细胞内外的铁与酸性亚铁氰化钾反应形成蓝色的亚铁氰化铁，定位于含铁的部位。正常值：细胞外铁--（+）--（++）细胞内铁—19-44%（Ⅰ--Ⅱ）意义：1、缺铁性贫血明显降低甚至阴性。2、铁粒幼细胞贫血明显增多。3、MDS可见环形铁粒幼细胞增多（15%）

常见血液病

血细胞特征骨髓增生异常综合症

本病是一组骨髓造血干细胞克隆性疾病。外周血象-主要表现在三系呈不同程度的改变，可见到各类细胞在数量、质量上的异常。骨髓象-主要以各系病态造血为突出表现。分型；（Ⅰ-Ⅴ型）RA；RAS；RAEB；RAEB-t；CMML。WHO在1997年11月修订了MDS的分型难治性贫血:伴有环行铁粒幼细胞(RARS)不伴有环行铁粒幼细胞(RA)难治性血细胞减少伴有多系增生异常(RCMD)难治性血细胞减少伴有多系增生异常和环行铁粒幼细胞(RCMD-RS)难治性贫血伴有原始细胞过多(RAEB)5q-综合征(原始细胞大于20%的AML且有细胞遗传学异常)骨髓增生异常综合征,不能分类

白血病

白血病是一种造血系统的恶性疾病，其特点是大量原始和幼稚或异常细胞出现在骨髓、外周血和其他器官或组织。根据白血病细胞的分化程度和白血病的自然病程，可分成急性白血病和慢性白血病二大类。

急性白血病

急性白血病的骨髓和外周血中主要的白血病细胞是以原始和早期细胞为主（骨髓中达到或超过30%以上）。根据白血病细胞的种类可将其分为急性淋巴细胞性白血病和急性非淋巴细胞性白血病。急性淋巴细胞性白血病

原始或幼稚淋巴细胞为主，依据形态可分为三型：L1-以小细胞型；L2-大小细胞混合型；L3-空泡型；按照免疫学特点可分成T-细胞和B-细胞二大类，再分成多种亚型。形态学分型和免疫学分型目前二者无相关性。急性非淋巴细胞白血病

急性非淋巴细胞性白血病根据发病细胞种类的不