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血液中转氨酶活力的测定分光光法第1页/共6页酶促反应显色反应第2页/共6页三、操作1．标准曲线的绘制：取6支干洁试管，分别标上0，1，2，3，4，5六个号，按下表操作。

试剂（ml）试管号012345丙酮酸钠标准溶液（2.0μmol/ml）00.050.100.150.200.25谷丙转氨酶底物0.500.450.400.350.300.25磷酸缓冲液（0.1mol/L，PH7.4）0.100.100.100.100.100.10各管摇匀，置于37℃恒温水浴锅预热5-10分钟2,4－二硝基苯肼溶液0.50.50.50.50.50.5各管摇匀，置于37℃恒温水浴锅加热20分钟NaOH溶液（0.4mol/L）5.05.05.05.05.05.0充分摇匀，室温下静置30分钟后，以0号管作空白，520nm处比色丙酮酸的μmol数（横坐标）00.10.20.30.40.5A520nm（纵坐标）用丙酮酸μmol数为横坐标，光吸收值A520nm为纵坐标，画出标准曲线。第3页/共6页2．酶活力的测定取2支干洁试管并标号，用第1号试管做为未知管，第2号试管做为空白对照管。按下表操作。试剂（ml）试管号12谷丙转氨酶底物0.50.5置于37℃水浴内预热5分钟人血清0.1－振摇均匀，置于37℃水浴内继续保温60分钟2,4－二硝基苯肼溶液0.50.5人血清－0.1氢氧化钠溶液55充分摇匀，室温下静置30分钟后，以2号管作空白，520nm处比色A520nm0

在标准曲线上查出丙酮酸的μmol数（用1μmol丙酮酸代表1.0单位酶活力），计算每100mL血清中转氨酶的活力单位数。第4页/共6页思考题：

转氨酶在代谢过程中的重要作用及在临床诊断中的意义？参考答案：生物体内广泛存在的氨基移换酶也称转氨酶，能催化α-氨基酸的α-氨基与α-酮酸的α-酮基互换，在氨基酸的合成和分解，尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。肝细胞中含转氨酶最丰富，因此当肝脏疾病致肝细胞受损伤时，转氨酶即大量释放入血液，致使血清中转氨酶活性增高。测定转氨酶是检查肝功能的重要指标之一。转氨酶显著增高见于各种急性肝炎及药物中毒性肝细胞坏死，中等程度增高见于肝癌、肝硬化、慢性肝炎及心肌梗塞，轻度增高则见于阻塞性黄疸及胆道炎等

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