蛋白质样品的制备

蛋白质样品的制备第1页/共31页I-吲哚（indol）试验色氨酸→吲哚→玫瑰吲哚↑吲哚试剂

-+第2页/共31页IMViC试验I-吲哚（indol）试验M-甲基红（methylred）试验V-VP（Voges-Proskauer）试验C-枸橼酸盐利用（citrateutilization）试验第3页/共31页IMViC试验细菌的生化反应用于鉴别细菌，尤其对形态、革蓝氏染色反应和培养特性相同或相似的细菌更为重要。吲哚（I）、甲基红（M）、VP（V）、和枸橼酸试(C)验常用于鉴定肠道杆菌，合称为IMViC试验第4页/共31页IMViC试验大肠埃希菌++--产气杆菌--++第5页/共31页硫化氢试验+（FeS黑色）尿素酶试验第6页/共31页3．尿素分解试验

变形杆菌具有尿素酶，可分解尿素产生氨，培养基呈碱性，以酚红为指示剂检测呈红色，由此区别于沙门氏菌。幽门螺杆菌C14尿素呼气检测试验

第7页/共31页第8页/共31页

气相、液相色谱法通过对细菌分解代谢产物中挥发性或不挥发性有机酸和醇类的检测，可准确、快速地确定细菌的种类，是目前进行细菌生化鉴定的高新技术。

第9页/共31页合成代谢产物细菌通过新陈代谢不断合成菌体成分，如多糖、蛋白质、脂肪、核酸、细胞壁及各种辅酶等。此外，细菌还能合成很多在医学上具有重要意义的代谢产物。

第10页/共31页热原质（pyrogen）

细菌合成的一种注入人体或动物体内能引起发热反应的物质。LPS

耐高温去除方法：250℃干烤、蒸馏、吸附剂等制备和使用注射药品过程无菌操作毒素与侵袭性酶色素抗生素某些微生物代谢过程中产生的一类能抑制或杀死某些微生物或肿瘤细胞的物质细菌素维生素第11页/共31页毒素与酶：细菌可产生内、外毒素及侵袭性酶，与细菌的致病性密切相关。

内毒素（Endotoxin）即革兰氏阴性菌细胞壁的脂多糖，其毒性成分为类脂A。菌体死亡崩解后释放出来。外毒素(Exotoxin)是由革兰氏阳性菌及少数革兰氏阴性菌在生长代谢过程中释放至菌体外的蛋白质。具有抗原性强、毒性强、作用特异性强的突出特点。

某些细菌可产生具有侵袭性的酶，能损伤机体组织，促进细菌的侵袭、扩散，是细菌重要的致病因素，如链球菌的透明质酸酶等。

第12页/共31页色素（Pigment）：有些细菌能产生色素，对细菌的鉴别有一定意义

细菌色素有两类：①水溶性色素，能弥散至培养基或周围组织，如绿脓杆菌产生的绿脓色素使培养基或脓汗呈绿色。②脂溶性色素，不溶于水，仅保持在菌落内使之呈色而培养基颜色不变，如金黄色葡萄球菌色素。细菌色素的产生需一定条件（营养丰富、氧气充足、温度适宜），无光合作用，对细菌的功能尚不清。

第13页/共31页抗生素（Antibiotic）:某些微生物代谢过程中可产生一种能抑制或杀死某些其他微生物或癌细胞的物质，称抗生素。抗生素多由放线菌和真菌产生，细菌仅产生少数几种，如多粘菌素（Polymyxin）、杆菌肽(Bicitracin)等。

第14页/共31页链霉素红霉素青霉素作用位点第15页/共31页细菌素（Bactericin）:某些细菌能产生一种仅作用于有近缘关系的细菌的抗菌物质，称细菌素。细菌素为蛋白类物质，抗菌范围很窄，无治疗意义，但可用于细菌分型和流行病学调查。

细菌素以生产菌而命名。大肠杆菌产生的细菌素称大肠菌素，绿脓杆菌产生的称绿脓菌素，霍乱弧菌产生的称弧菌素。

第16页/共31页第17页/共31页细菌的人工培养人工培养细菌需要的条件：充足的营养和能量；酸碱度；渗透压；温度；必要的气体第18页/共31页细菌的人工培养根据不同的标本及不同的培养目的，可选用不同的接种和培养方法。分离培养：纯培养：第19页/共31页第20页/共31页第三节

细菌的人工培养植物病原细菌一般用稀释分离法，稀释培养可以使病原细菌与杂菌分开，形成分散的菌落，容易分离得到纯培养。培养皿稀释分离法：平板划线分离法：第21页/共31页常用分离方法稀释分离法：主要用于分离细菌和酵母等。是直接将病组织上的孢子洗下配成孢子悬浮液，经稀释后与溶化并冷却到45℃左右的培养基混合，然后倒在灭菌的培养皿中。病组织是不经过表面消毒的，可能带来叫多的杂菌。组织分离法：就是切取小块病组织，经表面消毒和灭菌水洗过后，移入培养基平板上培养。第22页/共31页第23页/共31页第24页/共31页细菌的人工培养

培养基（culturemedium）由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品培养基的分类：基础培养基（basicmedium） 增菌培养基（enrichmentmedium） 选择培养基（selectivemedium） 鉴别培养基（differentialmedium） 厌氧培养基（anaerobicmedium）液体培养基固体培养基半固体培养基第25页/共31页按成分不同划分

天然培养基(complexmedium)：凡是利用来自生物的组织、器官以用它们的抽提物或制品制成的培养基。如：牛肉汁、玉米粉、米糠。其化学成分还不清楚或化学成分不恒定，也称化学限定培养基。如：牛肉膏蛋白胨培养基等。合成培养基(syntheticmedium)是由化学成分完全了解的物质(化学药品)配制而成的培养基。也称化学限定培养基。如：高氏一号培养基等。第26页/共31页为了研究和利用微生物，必须人为地创造适宜的环境培养微生物，培养基是指经人工配制而成的适合微生物生长繁殖和积累代谢产物所需要的营养基质。我们配制培养基不但需要根据不同微生物的营养要求，加入适当种类和数量的营养物；并要注意一定的碳氮比例（C/N）；还要调节适宜的酸碱度（pH）；保持适当的氧化还原电位和渗透压。

第27页/共31页按成分不同划分半合成培养基：采用天然有机物作为N源和生长物质，再添加一部分的化学药品作为C源和无机盐来源的培养基。天然培养基：成本低，生长量好，工业上常采用；合成培养基：成本高，生长缓慢，但研究代谢途径是必需用的。第28页/共31页按用途划分

基础培养基(minimummedium)是含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质的培养基。如：细菌——牛肉膏蛋白胨；酵母菌——麦芽汁；真菌——马铃薯蔗糖培养基（PDA）。选择培养基(selectivemedium)是用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基。(SS培养基、MS培