药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论

特征研究-理化、稳定性对照品研究-标化、校正因子方法研究-建立、验证原料药研究特点

杂质研究-工艺、残留溶剂1432药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第1页建立标按时要考虑问题Growth

常见研究误区以及供参考经验和体会

新版药典动态对化学原料药质量研究影响

研发原始统计中常见问题及改进提议

主要讨论内容药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第2页Clicktoedittitlestyle杂质控制微粒控制安全性控制注射剂所用原辅料应从起源及工艺等生产步骤进行严格控制并应符合注射用质量要求。标准增项杂质谱比较供注射用原料质控改变重点提醒药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第3页杂质控制力度大幅度提升

未修订品种药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第4页盐酸阿糖胞苷项目含量程度97.0％～103.0％98.0%～102.0%判别3项3+1项（+HPLC）检验干燥失重干燥失重溶液澄清度与颜色含氯量相关物质梯度、校正、3个特定杂质残留溶剂炽灼残渣和重金属含量测定UV吸收系数法HPLC外标法*性状项下还有熔点和比旋度项，药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第5页第一次飞跃第二次飞跃相关物质研究

－杂质质控理念变迁药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第6页杂质谱定义ImpurityProfile

（杂质谱）:Adescriptionoftheidentifiedandunidentifiedimpuritiespresentinadrugsubstance.对存在于药品中全部已知杂质和未知杂质总描述。

药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第7页CompanyLogo名词解释已判定杂质IdentifiedImpurity特定杂质SpecifiedImpurity潜在杂质PotentialImpurity杂质谱ImpurityProfile已确证了结构特征杂质在质量标准中要求检验并有自己程度标准杂质。已判定或未判定按照理论推测在生产或贮藏过程中可能产生杂质，实际产品中不一定存在存在于药品中杂质组成或模式药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第8页Clicktoedittitlestyle选择最优各种互补结构确证比较杂质数与量，一致或基本一致，物质基础相同决定可否桥接已上市药品安全有效性结果杂质谱比较杂质谱比较药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第9页新方法分析方法有效性（氨苄西林钠/舒巴坦钠）原方法中国抗生素杂志，，34：734在对各国药典方法比较基础上确定分析方法药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第10页项目原研厂标准确定标准EP7.0USP34JP15含量程度按干燥品计算，每1mg效价不得少于150单位按干燥品计算，每1mg效价不得少于150单位按干燥品计算，每1mg效价不得少于150I.U.（非口服制剂），每1mg效价不得少于120I.U.（口服制剂按干燥品计算，每1mg中效价不得少于180USP肝素单位每1mg效价不得少于110单位。性状白色或类白色粉末，有引湿性白色或类白色粉末，极具引湿性白色或几乎白色粉末，有适度引湿性白色到灰棕色粉末或颗粒溶解度在水中易溶在水中易溶，在乙醚中不溶在水中易溶在水中溶解，在乙醚中不溶比旋度大于+35°(40mg/ml,水)应大于+50°(40mg/ml,水)判别1、电泳法2、钠盐1、电泳法2、钠盐A、含有抗凝血作用B、比旋度C、电泳法：D.钠盐A、H-NMRB、IC法C、抗Xa/抗IIa：D、钠盐酸碱度5.0～7.5（0.10g到10ml水）5.0～7.5（0.10g到10ml水）5.5～8.0（0.10g到10ml水）5.0～7.5（0.10g到10ml水）6.0～8.0药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第11页杂质谱比较－各种互补不一样色谱系统（流动相、色谱柱、波长）不一样检测器（uv、DAD）不一样原理方法-分离或检测

药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第12页杂质谱比较－各种互补柱串联技术适合用于溶解度无显著差异但电荷上有显著差异难分离物质，经过将一根SCX（阳离子交换）短柱与一根MGⅡC18长柱串联就能够简单到达将其分离目标。原理：有电荷差异被分离物质进入色谱柱串联络统后，带正电荷物质（通常是碱性物质）会因为SCX短柱离子交换作用而被保留在短柱中，而带负电荷物质（通常为酸性物质）与中性物质则会毫无妨碍经过短柱进入C18长柱中，从而成功分离；然后因为MGⅡC18长柱中疏水性基团间相互作用而对中性物质有强保留作用，但对带负电荷物质无强保留作用，这么带负电荷物质与中性物质也简单被分开了假如为了让峰形更加好，各峰间分离更开，还可在阳离子交换短柱与C18长柱前接一根NH2短柱（它可与阴离子发生交换作用），进行三根串联，也能够使带负电荷酸性物质与中性物质到达更加好分离效果。

药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第13页杂质谱分析基本途经药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第14页新杂质研究－药品杂质可能起源药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第15页1.原料：红霉素A、红霉素B、红霉素C、红霉素D、红霉素E、红霉素F、阿奇霉素B、阿奇霉素C、阿奇霉素E、阿奇霉素F2.中间体：红霉素A肟（Z）、6，9-亚胺醚、氮红霉素A、红霉素A肟（E）、红霉素C肟（E）、9，11-亚胺醚、红霉素C6，9-亚胺醚、红霉素A内酰胺3.副产物：红霉素-N-氧化物、N-去甲基红霉素A、N-去甲基阿奇霉素A、氨基阿奇霉素A、N-甲酰基-N去甲基阿奇霉素A、N-去甲基-N-苯磺酰基阿奇霉素、阿奇霉素N-氧化物、3’-去（二甲氨基）-3’,4’-去氢阿奇霉素、O-甲苯磺酰基红霉素肟、红霉素Z肟重排物、氮红霉素11，12-硼酸酯、N，N-去二甲基N-甲酰基阿奇霉素A、丙基阿奇霉素、3’-N，N-去二甲基氨基-酮基阿奇霉素A、阿奇霉素11，12-硼酸酯4.降解产物：去克拉克定糖阿奇霉素A、去克拉克定糖氮红霉素、红霉素8，

9-脱水-6，9-半缩酮、红霉素6，9：9，12-螺缩酮阿奇霉素中可能存在杂质：37种药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第16页CompanyLogo结构确证惯用方法热分析Ｘ－粉末衍射核磁元素分析质谱紫外红外药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第17页模拟色谱图实际色谱图药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第18页毒性快速评价平台斑马鱼毒性快速评价平台，对杂质胚胎毒性、神经毒性，心脏毒性等进行评价。优点：杂质用量少无需知道杂质结构试验周期短（3－4天一个周期）药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第19页药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第20页药品耳毒性检测利用一个特殊染料对斑马鱼幼体头部耳蜗区神经丘毛细胞染色，检测毛细胞存活状态，来判断检测物耳毒性。下列图中红色圈示耳蜗区域；给药组中红色箭头示给药后毛细胞降低，黄色圈示给药后1神经丘消失。给药后系统对照组（正常幼体）药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第21页增设有效项目指标加强安全性监控

结合药品制法和工艺特点，以及杂质特殊性设置特色有针对性检测项目，最大程度处理安全隐患。

人尿制品增加乙肝表面抗原检验：如尿激酶、尿促性素、绒促性素、乌司他丁等重组品种增加菌体蛋白残留量、外源性DNA残留量如重组人生长激素、重组人胰岛素等。含不饱和脂肪酸品种增加甲氧基苯胺值检验：如多烯酸乙酯（P272）等。药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第22页增设有效项目指标-甲氧基苯胺值

含有不饱和脂肪酸药品在生产和贮藏过程中易被氧化，初级氧化产物普通不稳定，又可深入生成醛类等化合物，而甲氧基苯胺值（也称p-茴香胺值）就是ISO推荐一个对这类降解产物进行评价伎俩，欧洲药典附录2.5.36收载了此测定方法。药品甲氧基苯胺值越高，说明其劣变程度越严重。测定原理：甲氧基苯胺与醛反应生成醇胺，醇胺脱水生成醛亚胺可采取紫外-可见分光光度法在350nm波优点测定。药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第23页增设有效项目指标-甲氧基苯胺值

注意：甲氧基苯胺试剂为无色结晶，含有一定毒性，使用时应防止接触皮肤，一旦失误，需用水冲洗15分钟以上。甲氧基苯胺冰醋酸溶液不稳定，需当日配制使用。以异辛烷作空白做基线校正时，假如测得甲氧基苯胺冰醋酸溶液吸光度超出了0.2，则需重新配制试剂。供试品溶液中加入0.25％4-甲氧基苯胺冰醋酸溶液后应注意避光，在350nm波优点吸光度随时间延长迟缓增加，需准确放置10分钟后测定，尽可能减小误差。本试验受水分影响较大，样品及试剂中水分存在会造成反应不完全，测定值偏低，当样品中水分含量超出0.1%时，可按10g样品加1～2g无水硫酸钠百分比脱除水分后测定。另外，应取用新开启包装供试品。药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第24页2-乙基己酸β-内酰胺类抗生素对生产工艺过程中使用2-乙基己酸原料，增加此项检验，采取气相色谱法测定；方法增订为附录－年版药典二部（附录ⅦL）；如:头孢地嗪钠、头孢呋辛钠、头孢孟多酯钠、氨苄西林钠等。药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第25页2-乙基己酸勘误：β-内酰胺类抗生素对生产工艺过程中使用2-乙基己酸原料，增加此项检验，采取气相色谱法测定；方法增订为附录－年版药典二部（附录ⅦL）；如:头孢地嗪钠、头孢呋辛钠、头孢孟多酯钠、氨苄西林钠等。勘误：药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第26页

当前中国不但接收了ICH对化学药品中残留溶剂控制理念，而且结合中国国情，建立了含有中国特色残留溶剂检验方法。《中国药典》版中，对残留溶剂分类及程度标准已经与ICH要求完全一致，但仅在附录中作为标准性统一要求。《中国药典》版中，原料药要求在各论项下依据其生产工艺制订残留溶剂检验方法抗生素原料药几乎全部品种均在各论项下增订了详细残留溶剂检验方法从附录走向各论残留溶剂药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第27页

如：头孢泊肟酯

残留溶剂照残留溶剂测定法（附录ⅧP）测定。

甲醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷、异丙醇、丁酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、乙酸丁酯、1,2-二氯乙烷、乙酸异丙酯、苯、四氯化碳、环己烷、二氧六环、甲基异丁基酮、吡啶、甲苯

色谱条件与系统适用性试验略内标溶液制备取正丙醇适量，用二甲基亚砜稀释制成每1ml中约含200μg溶液，作为内标溶液。残留溶剂药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第28页残留溶剂检验方法及验证

！

除正文已明确列有“残留溶剂”检验品种必须依法进行检验外，其它未在“残留溶剂”项下明确列出有机溶剂与未在正文中列有此项品种，如生产过程中引入或产品中残留有机溶剂，均应按附录“残留溶剂测定法”检验并应符合对应溶剂要求药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第29页检测方法进行了对应调整：顶空进样甲烷气体，统计死时间(t0)顶空进样供试品溶液，统计色谱图，按公式计算诸色谱峰保留时间(tR)相对于参考物质保留时间(t’R)相对调整保留时间(Relativeadjustmentretentiontime，RART)法替换RRT法tR为组分保留时间;t’R为参比物保留时间。t0为甲烷保留时间。残留溶剂药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第30页

检测方法选择：直接进样？顶空进样？程度比较？对照品法？标准加入法？内标？外标？验证项目确定：回收试验？最低定量限？最低检测限？线性？耐用性试验？原始统计较常发觉问题连带问题：按无水无溶剂计算残留溶剂方法建立、验证与常见问题药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第31页高聚物凝胶色谱法（年版新增19个标准）原料制剂头孢唑肟钠注射用头孢唑肟钠头孢替唑钠注射用头孢替唑钠头孢尼西钠注射用头孢尼西钠头孢噻吩钠注射用头孢噻吩钠磺苄西林钠注射用磺苄西林钠阿洛西林钠注射用阿洛西林钠美洛西林钠注射用美洛西林钠氯唑西林钠注射用氯唑西林钠苯唑西林钠注射用苯唑西林钠普鲁卡因青霉素药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第32页高聚物版：品种增加,方法多元化

1、自填柱和商品玻璃柱：填料惯用葡聚糖凝胶G-10（SephadexG10）；短柱子使用，降低分离时间

2、商品凝胶柱TSK-GELGSWXL：头孢地嗪（北京所）

3、ODS柱，聚合物-氨苄西林钠舒巴坦钠（浙江所)

4、柱切换（中检所），实现凝胶色谱与反相色谱统一药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第33页高聚物

盐酸头孢替安聚合物分析方法比较SephadexG-10系统TSK-GelGswxl系统

0.8ml/min药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第34页供注射用原料可见异物检验头孢他啶：取本品5份，每份3.0g，加1%碳酸钠溶液（经0.45μm滤膜滤过）溶解，依法检验（附录ⅨH），应符合要求。头孢地嗪钠：取本品5份，每份2.0g，分别加微粒检验用水溶解，依法检验（附录ⅨH），应符合要求。药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第35页有些品种如碱性药品与玻璃容器久置起反应，产生白点、白块和玻璃屑有些品种如甲硝唑等与重金属发生反应产生不溶物有些品种如喹诺酮类药品对金属设备产生腐蚀，易有金属屑有些品种如胰岛素等提取生化大分子易产生蛋白沉淀有些品种如头孢噻肟钠等成盐不完全，溶解度太低，产生白点、白块引发不合格部分原因药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第36页供注射用原料不溶性微粒检验头孢他啶：取本品3份，加1%碳酸钠溶液（经0.45μm滤膜滤过）溶解制成每1ml中含30mg溶液，依法检验（附录ⅨC），每1g样品中含10μm以上微粒不得过6000个，含25μm以上微粒不得过600个。头孢曲松钠：取本品3份，加微粒检验用水溶解并制成每1ml中含50mg溶液，依法检验（附录ⅨC），每1g样品中含10μm以上微粒不得过6000个，含25μm以上微粒不得过600个。药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第37页供注射用原料药增加不溶性微粒检验以确保制剂能符合注射剂要求因为光阻法测定结果仅与一定浓度范围内样品溶液成正比，故标准给出了不溶性微粒检验供试品溶液浓度制剂最多有11个规格，均按每1g样品中含10µm以上微粒不得过6000粒，含25µm以上微粒不得过600粒；

强化不溶性微粒等项目控制强化不溶性微粒等项目控制供注射用原料不溶性微粒检验药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第38页可见异物/不溶性微粒检验原始统计问题不详细无趋势缺方法探索及分析原始统计提议药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第39页控制生产环境和过程中污染-外源异物考查药品与容器兼容性-内源异物考查活性成份稳定性以及与溶剂/添加物稳定性-内源异物深刻了解“药品质量源于设计”认真做好处方研究/工艺验证和稳定性考查！可见异物检验目标药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第40页

标准统一、规范、明确、严谨

经典项目-无菌检验方法无菌检验是药品安全性风险控制主要项目之一，但详细检验方法以前标准中均不给出，由检验者自己探索。抗生素阳性菌选取不注意抗菌谱，存在试验有效性、一次成功率等问题对每个品种均要求经过验证，确定样品使用最适宜方法（直接接种法？薄膜过滤法），最正确溶解方式、最正确冲洗液、冲洗方式、敏感阳性对照菌等操作关键原因，并将上述内容按统一规范格式在质量标准中单独立项表述详细。供注射用原料无菌检验药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第41页供注射用原料无菌检验头孢呋辛钠：取本品3份，加1%碳酸钠溶液（经0.45μm滤膜滤过）溶解制成每1ml中含30mg溶液，依法检验（附录ⅨC），每1g样品中含10μm以上微粒不得过6000个，含25μm以上微粒不得过600个。头孢曲松钠：取本品3份，加微粒检验用水溶解并制成每1ml中含50mg溶液，依法检验（附录ⅨC），每1g样品中含10μm以上微粒不得过6000个，含25μm以上微粒不得过600个。药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第42页无菌检验方法规范表述方式举例氧氟沙星氯化钠注射液：

无菌取本品，经薄膜过滤法处理，用0.1%无菌蛋白胨水溶液分次冲洗（每膜不少于500ml），每管培养基中加入0.1mol/L硫酸锰溶液1ml，以大肠埃希菌为阳性对照菌，依法检验（附录ⅪH），应符合要求。乙酰谷酰胺注射液：

无菌取本品，经薄膜过滤法处理，用0.1%无菌蛋白胨水溶液分次冲洗（每膜不少于100ml），以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌，依法检验（附录ⅪH），应符合要求。药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第43页注射剂制剂通则改变重点提醒纯度要高、杂质要少、生物负荷要低＊从源头控制杂质数和量、染菌数和量、热原或细菌内毒素重点品种为营养性、无抑菌性、制剂有注射剂型注射剂用原料重视数量口服原料也要限定菌属种类（沙门氏菌）原料药微生物程度检验药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第44页注射剂制剂通则改变重点提醒胰岛素（制剂为注射剂）取本品0.2g,依法检验（附录ⅪJ），每1g中含细菌数不得过300个。胰酶（制剂为口服制剂，起源于动物提取）取本品,依法检验（附录ⅪJ），每1g供试品中细菌数不得过10000个，霉菌和酵母菌总数不得过100个。并不得检出大肠埃希菌；每10g供试品中不得检出沙门菌。原料药微生物程度检验药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第45页注射剂制剂通则改变重点提醒必要时应增设对应安全性检验，如异常毒性、过敏反应、溶血与凝聚、降压物质、热原或细菌内毒素等因为有些药品成份复杂、组分结构不清楚（如多组分抗生素动物起源提取生化药等）、采取化学伎俩难于监控杂质异常毒性：有可能污染生物毒性物质品种（发酵）过敏反应：有可能污染异源蛋白或未知过敏反应物质品种降压物质：有可能污染组胺、类组胺样物质品种（腐败）供注射用原料安全性检验药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第46页增设有效项目指标加强安全性监控用化学伎俩不能控制组成、杂质无法控制生物起源品种均增加了异常毒性、过敏反应等动物试验：如硫酸鱼精蛋白等药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第47页硫酸鱼精蛋白

鱼精蛋白主要存在于鱼类成熟精巢组织中，与DNA紧密结合在一起，以核精蛋白形式存在。它是一个小而简单球形碱性蛋白质，分子量在1万以下，由30个左右氨基酸组成，其中2/3以上是精氨酸，几乎不含芳香族氨基酸。吸光度参考BP/EP6.0增订。依据本品组成，假如纯化步骤将核酸和杂蛋白均去除话，在260280nm波长范围内吸光度应很小，但考查结果远远超出BP/EP6.0所要求0.1。

药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第48页峰1.缩宫素；峰2.三氯叔丁醇，其余均为杂质峰缩宫素注射液HPLC检验色谱图药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第49页编号单个最大杂质（%）总杂质（%）18.928.328.333.339.224.748.325.056.727.666.122.175.520.089.431.299.331.0109.431.31117.333.31217.532.61317.632.5148.523.6158.024.7163.720.4178.429.8188.229.7198.129.7药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第50页增设有效项目指标加强安全性监控成份复杂、杂质无法控制但质量与颜色相关度高品种增加溶液颜色，如糜蛋白酶等。药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第51页溶液颜色检验目标

溶液颜色

本身性质

纯度

杂质含量-简易、直观、快速、综合对有色杂质进行检验药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第52页稳定性差质量与颜色联络紧密安全性要求高用仪器定量测杂质困难注射剂用原料仅在紫外区查杂质成份复杂变质就变色检验颜色品种适宜进行溶液颜色检验原料药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第53页建立方法时要考虑问题溶剂浓度稳定性临床安全性需要工艺生产能力同类产品水平溶液颜色药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第54页制订程度时要考虑问题主成份纯度杂质含量稳定性数据临床安全性需要工艺生产能力同类产品水平颜色程度药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第55页应用色差计转换进口药注册标准

-举例溶液颜色取本品0.5g，加水10ml溶解后，溶液应无色；如显色，与同体积比色液（取棕红色贮备液1.8ml加8.2ml水，混匀）比较（中国药典年版二部附录ⅨA第一法），不得更深。药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第56页色差计法应用举例说明：企业标准按EP检验，要求“与B5号标准比色液（EP第5版2.2.2溶液颜色）比较不得更深”。因EP标准比色液从三原色开始就与中国药典不一样，如按此检验会有困难，故采取色差计进行了对比测定，结果EPB5号标准比色液色差值（△E*=3.58）与中国药典BR3号（△E*=3.19）和BR4号（△E*=4.46）中值（3.82）较为靠近，约相当于BR3.5号。因BR3号是取棕红色贮备液1.5ml加8.5ml水，BR4号是取棕红色贮备液2.0ml加8.0ml水配制而成，所以此次复核将棕红色贮备液1.8ml加8.2ml水配制了专用比色液，该比色液△E*为3.64，与EP

B5号标准比色液色差值几乎一致，按此转换程度既不改变质控原有水平，又方便在国内检验。应用色差计转换进口药注册标准

-举例药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第57页药典采取当代分析技术举例

因为一些药品组成复杂性，尤其是一些生物大分子药品，使用传统分析方法已经不能满足当前质控需要，年版药典逐步改用当代分析技术。

首次利用毛细管电泳法注射用抑肽酶：检验两个特定杂质

注射用盐酸头孢吡肟：方法1-毛细管电泳法

N-甲基吡咯烷方法2-HPLC法（羧基柱，电导检测）药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第58页毛细管电泳法检验特定杂质抑肽酶由上海药检所起草，参考USP增订去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶和去丙氨酸抑肽酶检验项色谱条件：石英毛细管分离柱，毛细管温度：30℃，电极液：磷酸二氢钾溶液；分离压：12KV；波长：214nm结果：去丙氨酸抑肽酶RT为0.99，去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶RT为0.98，两相关物间分离度1.40，去丙氨酸-抑肽酶与抑肽酶间分离度1.24、抑肽酶拖尾因子1.8药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第59页抑肽酶SDS凝胶电泳图

本品系自牛胰或肺中提取、纯化制得肽酶抑制剂。采取SDS凝胶电泳方法抑肽酶相关物质，结果如图所表示，都只有一个条带。可能是抑肽酶和相关物质分子量相差不大，使用凝胶电泳不能将其分离药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第60页药典采取当代分析技术举例首次利用柱串联技术-抑肽酶

参考USP32用三根TSK柱串联检验高分子蛋白质。采取分子排阻色谱法，用三根色谱柱串联（TSK-G4000SWXL柱）柱温35℃，流速1.0ml/min,二聚体RT0.9，与主峰分离度1.4，主峰拖尾因子0.91。药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第61页药典采取当代分析技术举例柱串联技术适合用于溶解度无显著差异但电荷上有显著差异难分离物质，经过将一根SCX（阳离子交换）短柱与一根MGⅡC18长柱串联就能够简单到达将其分离目标。原理：有电荷差异被分离物质进入色谱柱串联络统后，带正电荷物质（通常是碱性物质）会因为SCX短柱离子交换作用而被保留在短柱中，而带负电荷物质（通常为酸性物质）与中性物质则会毫无妨碍经过短柱进入C18长柱中，从而成功分离；然后因为MGⅡC18长柱中疏水性基团间相互作用而对中性物质有强保留作用，但对带负电荷物质无强保留作用，这么带负电荷物质与中性物质也简单被分开了假如为了让峰形更加好，各峰间分离更开，还可在阳离子交换短柱与C18长柱前接一根NH2短柱（它可与阴离子发生交换作用），进行三根串联，也能够使带负电荷酸性物质与中性物质到达更加好分离效果。

药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第62页药典采取当代分析技术举例首次利用肽图分析技术：依据蛋白质、多肽分子量大小以及氨基酸组成特点，使用专一性较强蛋白水解酶，普通为肽链内切酶，作用于特殊肽链位点将多肽裂解成小片断，再经过一定分离检测伎俩形成特征性指纹图谱，用此法进行判别，专属性强，可判别仅相差一个氨基酸残基不一样种属起源样品。如胰岛素-采取V8酶解+HPLC法；

重组人生长激素-采取胰蛋白酶酶解+HPLC法取得肽图进行判别等。药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第63页胰岛素肽图人胰岛素酶解-HPLC肽图猪胰岛素酶解-HPLC肽图药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第64页电泳法-等电聚焦水平板电泳法琼脂糖凝胶电泳法醋酸纤维素薄膜电泳法纸电泳法等点聚焦水平板电泳法聚丙烯酰胺凝胶电泳法SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第65页经典等电聚焦图谱重组人生长激素（二部第566页）用此法做判别

药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第66页纯化水、注射用水和灭菌注射用水增修订纯化水、注射用水修订增订：

电导率

氯化物硫酸盐钙盐二氧化碳

替代总有机碳测定

易氧化物可任选一项药典中新检验技术应用药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第67页药典附录通用检测方法改变提醒重金属检验法：甲管（标准）＋乙管（供试品）+丙管（标准+供试品）如丙管颜色浅于甲管则将一法改为二法进行检验

勘误！第二法要求乙管（标准）中显出颜色与甲管（供试品）比较，不得更深。

药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第68页附录通用检测方法中改变提醒澄清度检验法：增加“几乎澄清”定义：0.5号～1号溶液颜色检验法

恢复“无色或几乎无色”定义

性状颜色描述与颜色检验项匹配：原有些液体制剂品种颜色检验项要求“与黄色2号标准比色液比较，不得更深”，但性状描述为“无色或几乎无色澄明液体”，与附录定义不匹配，现修订为“无色至微黄色澄明液体”。本版药典中极个别品种依然存在此问题！尼莫地平注射液

药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第69页药典附录改变提醒

－引湿性试验指导标准重金属检验法：pH测定法：不溶性微粒检验法：可见异物检验法：渗透压摩尔浓度：

（1）供试品符合药品质量标准（2）称量瓶试验前一天置25±1℃

80±2%环境中预引湿（3）瓶盖同条件放置（1）供试品干燥失重或水分符合程度要求（2）称量瓶没要求预引湿（3）瓶盖没提及药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第70页引湿性试验原始统计

-轻易出现错误

试验日期（全检合格之后）试验时间（24小时）试验温度、湿度称量瓶提前放置统计

药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第71页药典附录改变提醒

－钠盐判别反应重金属检验法：pH测定法：不溶性微粒检验法：可见异物检验法：渗透压摩尔浓度：

钠盐（1）取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰即显鲜黄色。（2）取供试品约100mg，置10ml试管中，加水2ml溶解，加15%碳酸钾溶液2ml，加热至沸，应不得有沉淀生成；加焦锑酸钾试液4ml，加热至沸；置冰水中冷却，必要时，用玻棒摩擦试管内壁，应有致密沉淀生成。（替换使用醋酸氧铀锌试液方法）（1）取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰即显鲜黄色。（2）取供试品中性溶液，加醋酸氧铀锌试液，即生成黄色沉淀。药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第72页药典附录改变提醒

－锌盐判别反应重金属检验法：pH测定法：不溶性微粒检验法：可见异物检验法：渗透压摩尔浓度：

锌盐（1）取供试品溶液，加亚铁氰化钾试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在稀盐酸中不溶解。（2）取供试品溶液，制成中性或碱性溶液，加硫化钠试液，即产生白色沉淀。（替换使用硫氰酸汞铵试液检验方法）（1）取供试品溶液，加亚铁氰化钾试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在稀盐酸中不溶解。（2）取供试品溶液，以稀硫酸酸化，加0.1％硫酸铜溶液1滴及硫氰酸汞铵试液数滴，即生成紫色沉淀。重新做考查:取样量,辅料干扰,延伸-环境友好药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第73页Page

74碘值、皂化值、酸值

折光率比旋度熔点相对密度馏程吸收系数黏度凝点

物理常数研究

药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第74页吸收系数

物理意义为当溶液浓度为1%（g/ml）,液层厚度为1cm时吸光度数值。研究意义及应用趋势改变原始统计问题药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第75页Page

76干燥失重

重金属溶液澄清度硫酸盐酸碱度氯化物水分铵盐结晶性

普通检验项研究

药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第76页按照凡例要求，在标准中增订【制法要求】起源于人尿或动物组织，采取提取工艺制备供注射用原料药或直接与伤口接触制剂应在质量标准中增加【制法要求】，重申其生产过程安全性要求。供其它剂型用原料（如口服制剂）暂未在质量标准中制订【制法要求】，而由凡例作统一规范。药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第77页【制法要求】表述形式

例1：肝素钠（动物组织提取）本品应从检疫合格猪或牛肠粘膜中提取，生产过程均应符合现行版《药品生产质量管理规范》要求。生产工艺要经病毒灭活验证，并能去除有害污染物，生产过程中应确保不被外来物质污染。

例2：尿促性素（人尿提取）本品应从健康人群尿中提取，生产过程应符合现行版《药品生产质量管理规范》要求。本品在生产过程中需经适宜工艺方法处理，以使任何病毒如肝炎病毒和人免疫缺点病毒等灭活。

例3：凝血酶冻干粉（直接与伤口接触制剂）本品应从检疫合格牛或猪血中提取，生产过程应符合现行版《药品生产质量管理规范》要求。

药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第78页《已经有国家标准化学药品研究技术指导标准》在选择参比对照时普通遵照以下标准：如原发厂家生产产品已在我国上市，普通首选原发厂产品作为参比对照；如不能取得原发厂产品，能够考虑选取研究基础很好、临床应用较为广泛非原发厂产品作为参比对照；也能够对不一样厂家生产同品种进行质量对比，优选质量很好产品作为参比对照。

比较研究标尺问题

-被仿制药品选择标准药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第79页原研品认可度高首仿品被仿品注意：可比性

-

贮存时间大致相同！真实性–

提供发票、标签、批号或照片

比较研究标尺问题

-被仿制药品选择标准药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第80页

比较研究标尺问题

-购置对照品/标准品对照品/标准品

权威性

真实性

准确性-发票、标签、批号、分析汇报单、盐基/碱基、水分药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第81页详细精制方法、质量检验汇报标定方法与结果

详细提取精制方法、质量检验汇报、标定方法与结果详细合成精制方法、质量检验汇报、标定方法与结果

纯化精制提取精制

合成精制

比较研究标尺问题

-非购置对照品/标准品药典动态对药品研发影响和原始记录常见问题讨论第82页标定者测定结果（%）n均值（%）RSD（%）

1.98.82%，99.12%，99.18%，99.25%，99.17%599.11%

0.17%2.98.96%，99.04%，99.24%，98.98%，98.98%599.04%

0.12%3.99.12%，98.94%，99.04%，99.04%，99.18%599.06%

0.09%经Corchan检验，三位标定者方差没有差异，均来自同一正态分布。用