免疫学技术在科研中的应用

免疫学技术在科研中的应用免疫学技术在科研中的应用第1页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!相关帮助需要相关抗体试剂能够访问Fantibody全球抗体搜索引擎fantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索抗体数据库，其抗体信息数据起源于全球范围研究机构与商业企业。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两个别组成，以帮助研究者更高效寻找并评定该抗体性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂应用型检索平台需要相关试验室仪器设备、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外诊疗试剂及耗材与技术服务信息，能够访问探生网biomean进行咨询，期待您加入免疫学技术在科研中的应用第2页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!抗原或抗体检测抗原抗体反应特点抗原抗体反应影响原因常见抗原抗体反应免疫学技术在科研中的应用第3页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!抗原抗体反应特点高度特异性可逆性抗原抗体结合除了空间构象互补外，主要以氢键、静电引力、范德华力和疏水键等分子表面化学基团之间非共价方式结合。这种非共价键不如共价键结合稳定，极易受温度、酸碱度和离子强度影响而解离。抗原抗体百分比影响免疫复合物大小抗原抗体反应两个阶段免疫学技术在科研中的应用第4页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!抗原抗体反应影响原因抗原抗体浓度与百分比电解质抗原抗体特异性结合后，亲水性降低，易受电解质影响而使表面失去较多负电荷。温度适当温度可增加抗原与抗体分子碰撞机会，加速抗原抗体复合物形成。酸碱度抗原抗体反应最适pH在6—8之间，pH过高或过低，即过碱或过酸，均可影响抗原、抗体理化性质。免疫学技术在科研中的应用第5页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!常见抗原抗体反应凝集反应沉淀反应免疫标识技术免疫学技术在科研中的应用第6页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!凝集反应直接凝集反应血型判定肥大反应间接凝集反应间接凝集抑制试验微粒捕捉酶免疫分析技术免疫学技术在科研中的应用第7页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!间接凝集反应将可溶性抗原或抗体吸附在与免疫无关颗粒载体上，形成致敏颗粒，再与对应抗体或抗原进行反应产生凝集反应，称为间接凝集反应。颗粒载体有红细胞、聚苯乙烯乳胶颗粒、活性炭颗粒，而对应凝集现象分别称为间接血球凝集、间接乳胶凝集、间接炭粒凝集反应。免疫学技术在科研中的应用第8页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!免疫学技术在科研中的应用第9页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!微粒捕捉酶免疫分析技术将已知特异性抗体致敏免疫微粒与生物素—亲和素—酶放大系统相结合，最终酶作用于荧光底物，使之发荧光，经过检测荧光强度判断待测抗原含量。检测肿瘤标识物CAl99、CEA、CAl25、AFP、性激素、甲状腺素T-T+、叶酸、HIV抗体、HCG等微量可溶性抗原。免疫学技术在科研中的应用第10页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!免疫学技术在科研中的应用第11页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!沉淀反应速率散射比浊法／免疫比浊法琼脂扩散法单向琼脂扩散双向琼脂扩散火箭电泳对流免疫电泳免疫印迹技术免疫学技术在科研中的应用第12页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!速率散射比浊法／免疫比浊法将已知抗体与对应抗原在液相中按一定百分比混合形成可溶性免疫复合物，这些复合物微小粒子对一定波长光照射发生散射，可经过三个光路系统测定光散射(OD值)。抗体含量固定并处于抗体过剩时，免疫复合物多少直接取决于抗原浓度，抗原终浓度经过标准品绘出标准曲线查出。提升了灵敏度，经过自动化，可同时检测多个样品并进行准确定量分析。检测前白蛋白、酸性蛋白酶、巨球蛋白、转铁蛋白、尿微量蛋白及IgG、IgM、IgA及补体，药品含量分析。免疫学技术在科研中的应用第13页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!免疫学技术在科研中的应用第14页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!免疫学技术在科研中的应用第15页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!免疫印迹技术将用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE分离得到按分子量大小排列非标识蛋白转移到固相载体膜上，再用标识特异性抗血清或单克隆抗体对蛋白质进行定性及定量分析技术，其判定蛋白质敏感性为1—5ng。检测可溶性抗原、细胞成份判定与分析，检测与本身变性细胞核成份结合抗体(抗核抗体)，HIV明确诊疗。免疫学技术在科研中的应用第16页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!免疫印迹法基础步骤电泳分离蛋白抗原，SDS是一个阴离子去污剂，与蛋白质牢靠结合，十二烷基磺酸根带负电荷，使样品中各种蛋白质与SDS形成SDS-蛋白质复合物，因为蛋白质表面均带有相同密度负电荷，使分子构型几乎相同(线性)。所以SDS中，SDS多肽复合物电泳迁移率只与其分子质量相关，而不受所带电荷及分子形态影响。将SDS分离到蛋白条带转移至固相硝酸纤维素膜上。蛋白条带可用酶、同位素标识一抗或二抗进行特异性反应，加入显色底物或放射自显影以显示结果。免疫学技术在科研中的应用第17页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!免疫学技术在科研中的应用第18页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!免疫标识技术免疫酶测定法免疫荧光技术放射免疫测定法免疫胶体金技术免疫学技术在科研中的应用第19页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!免疫酶测定法是一个用酶标识一抗或二抗检测特异性抗原或抗体方法。将抗原—抗体反应高度特异性与酶对底物高效催化作用有效地结合起来，经过酶分解底物产生有色物质(也可作用于荧光底物，产生荧光)，肉眼观察颜色深浅或酶标仪测定光密度值(OD)，以反应抗原或抗体含量。本法灵敏度高，检测可溶性抗原或抗体、组织或细胞表面特异性抗原。免疫学技术在科研中的应用第20页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!免疫学技术在科研中的应用第21页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!ELISA双抗体夹心法(sandwichassay)检测血清、脑脊液、胸、腹水等各种液相中可溶性抗原间接法测定细胞及组织表面抗原免疫学技术在科研中的应用第22页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!免疫学技术在科研中的应用第23页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!酶联免疫斑点试验(enzyme—linkedimmunospotassay，ELISPOT)用已知细胞因子抗体包被固相载体，加入待检效应细胞，温育一定时间后洗去细胞，如待检效应细胞产生对应细胞因子，则与已包被抗体结合，再加入酶标识抗该细胞因子抗体，加底物显色。普通选择硝酸纤维素膜(NC)或聚偏二氟乙烯(PVDF)膜覆盖微量反应板作为固相，在分泌对应细胞因子细胞所在局部展现有色斑点，一个斑点表示一个分泌对应细胞因子细胞，经过计数可推算出分泌某种细胞因子细胞频率。免疫学技术在科研中的应用第24页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!免疫学技术在科研中的应用第25页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!免疫学技术在科研中的应用第26页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!免疫荧光技术用荧光素标识一抗或二抗，检测特异性抗原或抗体方法。常见荧光素有异硫氰酸荧光素(nuoresceinisothiocyanate，FITC)、藻红蛋白(phycoerythrin，PE)等。在激发光作用下，可直接发射荧光，前者发黄绿色荧光，后者发红色荧光。免疫学技术在科研中的应用第27页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!ImmunofluorescentstainofimmunoglobulinG(IgG)showinglinearpatterninGoodpasture'ssyndrome免疫学技术在科研中的应用第28页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!天疱疮免疫荧光染色免疫学技术在科研中的应用第29页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!放射免疫测定法用放射性同位素标识抗原或抗体进行免疫测定。现有同位素敏感性又有抗原抗体结合特异性，同时含有重复性好、准确性高、标本用量少等优点。广泛应用于激素、药品等微量物质检测。免疫学技术在科研中的应用第30页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!免疫胶体金技术氯金酸(HAuCl+)在还原剂作用下，产生分散状态胶体金颗粒。碱性条件下，金颗粒表面带负电荷，与蛋白质正电荷基团结合。胶体金可标识白蛋白、免疫球蛋白、糖蛋白、激素、脂蛋白、植物血凝素、卵白素等。大分子以单层形式吸附在金颗粒表面。不一样还原剂作用于氯金酸，产生胶体金粒径大小不相同(5—50nm)，小粒径胶体金因为穿透性好，电子密度高，常被用于免疫电镜技术。这些小粒径金颗粒，经银显影液处理后，金粒子还原银离子生成银颗粒而吸附在金颗粒周围呈黑褐色，从而放大了金颗粒显色效果，又称免疫金银法。胶体金颜色随颗粒大小而改变，大于20nm金颗粒在光镜下展现砖红色，可在光镜水平行免疫分析，也可用银显影剂增强，深入提升灵敏度。当胶体金粒径较大、浓度密集时肉眼水平即可观察，即胶体金斑点渗滤试验和胶体金斑点免疫层析试验。免疫学技术在科研中的应用第31页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!免疫学技术在科研中的应用第32页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!免疫细胞检测免疫细胞分离磁珠分离法fluorescence-activatedcellsorter，FACS免疫细胞功效测定T细胞B细胞免疫学技术在科研中的应用第33页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!磁珠分离法特异性分离所需淋巴细胞方法。将特异性抗体(如抗CD3、抗CD4、抗CD8等)吸附在铁颗粒(磁珠)上，加至细胞悬液中，含有对应抗原细胞与磁珠上特异性抗体结合。反应管置于磁场中，铁颗粒受磁场吸引，携带有对应细胞磁球吸附于靠近磁铁管壁上。弃细胞悬液，重新解离细胞与磁珠。免疫学技术在科研中的应用第34页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!免疫学技术在科研中的应用第35页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!fluorescence-activatedcellsorter，FACS免疫学技术在科研中的应用第36页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!免疫学技术在科研中的应用第37页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!免疫学技术在科研中的应用第38页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!T细胞判定及功效测定使用酶、免疫荧光标识单抗进行判定淋巴细胞转化试验E花环形成试验混合淋巴细胞培养CTL介导细胞毒试验免疫学技术在科研中的应用第39页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!抗原肽—MHC分子四聚体技术tetramer用生物素化抗原肽—MHC分子复合物与荧光标识亲合素结合，因为1个荧光素标识亲合素可结合4个生物素分子，能使4个MHC／抗原肽复合物形成一个复合体，将该复合体标识荧光素后，即成抗原特异性四聚体。抗原特异性四聚体能与样品中特异性T细胞TCR结合，因为四聚体能同时结合一个T细胞表面4个TCR，亲和力大大提升。用流式细胞术即可确定待检标本中抗原特异性CTL细胞频率。MHC分子可为工类或Ⅱ类分子，与抗原肽形成四聚体复合物，可分别判定表示特异性TCRCD8+T细胞及CD4+T细胞频率。免疫学技术在科研中的应用第40页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!免疫学技术在科研中的应用第41页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!B细胞判定及功效测定检测B细胞分化抗原测定B细胞产生抗体能力溶血空斑试验ELISPOT免疫学技术在科研中的应用第42页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!细胞因子检测生物活性检测细胞增生或增生抑制法细胞病变抑制法趋化作用测定法免疫学检测法分子生物学技术免疫学技术在科研中的应用第43页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!基因敲除技术和转基因动物应用基因同源重组，将外源有功效基因(基因组中原先不存在、或已失活基因)，转入细胞与基因组中同源序列进行同源重组，插人到基因组中，在细胞内取得表示。经过同源重组产生目标基因缺失或失活转基因动物能够确定被敲除基因在体内代谢过程中作用，还可确定被敲除基因在分化、发育、生存等过程中作用和必要性。转基因动物能够作为疾病模型。能够用于药品筛选动物模型。转基因动物可作为“生物反应器”生产药品。免疫学技术在科研中的应用第44页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!Th细胞在mCTL介导肿瘤保护中作用研究免疫学技术在科研中的应用第45页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!相关说明OT-1mice:表示SIINFEKL特异性TCROVA：鸡卵白蛋白OVACTLepitope:SIINFEKLOVAThepitope:ISQAVHAAHAEI-NEAGROVA（OVT）RAG-1KOmice:C57BL/6mice:IFA/CFA/KLHEG7celllineEL4cellline免疫学技术在科研中的应用第46页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!相关步骤mCTLandeCTLgenerationOT-1细胞转输RAG-1-基因敲除小鼠，2天后以OT-1TCR特异性表位多肽SIINFEKL免疫；specificThgenerationOVA特异性和非特异性Th表位多肽免疫C57BL/6小鼠以产生特异性和非特异性Th细胞；mCTLtransfer记忆性CTL转输已产生特异性和非特异性ThC57BL/6小鼠；tumorchallenge接种表示OVA抗原肿瘤细胞EG7；免疫学技术在科研中的应用第47页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!GenerationofOvalbumin-specific

MemoryCD8

TCells.

OT-1lymphnodescellsweretransferredtoRAG-/-

micethroughtailveininjection,andmicewereimmunizedwith50ugofSIINFEKLpeptideinCFA1daylater.Atday7,14,21,miceweresacrificed,andsplenocytesorlymphnodescellswereisolatedandanalyzed.ThepercentageofCD44high,SIINFEKL-specificCD8

Tcellswasassessedbythree-colorFACSstainingwithSIINFEKLMHCclassItetramerandantibodiestoCD8andCD44.PlotsshownaregatedontheSIINFEKLtetramerpositivelymphocytes;valuesaremeanpercentagesofCD44

cellswithintheSIINFEKLtetramer-positivepopulation.免疫学技术在科研中的应用第48页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!免疫学技术在科研中的应用第49页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!免疫学技术在科研中的应用第50页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!免疫学技术在科研中的应用第51页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!免疫学技术在科研中的应用第52页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!CD8+

MemoryTCellsNeedAntigen-specificCD4+T-helperCellstoAchieveTumorProtection

OvalbuminCTLepitope(SIINFEKL)-specificTcellswereparkedinRag-/-

micefor42daystogeneratemCTLandthenadoptivelytransferredtoC57BL/6mice.TwogroupsofrecipientC57BL/6Jmicewereimmunized8dayspriorwith50ugofOVTinincompleteFreund’sadjuvantor20ugkeyholelimpethemocyanin(KLH)proteinascontrolinincompleteFreund’sadjuvant.Micewerechallengedwithovalbumin-expressingtumorcells(EG7)inthescruffoftheneck1dayafteradoptivetransfer.NormalC57BL/6controlmicewerechallengedwithEG7withoutanytreatment.免疫学技术在科研中的应用第53页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!免疫学技术在科研中的应用第54页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!Absenceoftumorprotectioninmicewithoutantigen-specificT-helpercellsisnotbecauseoflowerlevelsoftumorantigen(SIINFEKL)-specificCD8+

Tcells.mCTLsweretransferredtogroupsofC57BL/6micewithorwithoutimmunization8dayspriorwith50ugofOVTorwith20ugofKLHproteincontrol.C57BL/6controlgroupwasgivennotreatment.IFN-

Elispotassayswereperformedusingthesplenocytesofthesemice,whichwerechallengedinvitrowith(A)1ug/mlSIINFEKLpeptideor(B)8ug/mlOVAT-helperpeptidetodeterminethepresenceofovalbumin-specificCD8+

CTLsandCD4+T-helpercells.免疫学技术在科研中的应用第55页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!免疫学技术在科研中的应用第56页本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边抗体教授!IncontrasttomCTLs,eCTLsdonotneedThelptokilltumor.

eCTLsgeneratedfromRAG-/-

miceweretransferredat(A)day7or(B)day14toC57BL/6micethathadbeenimmunized8daysearlierwith50ugofOVTorascontrol20ugofKLH.C57BL/6micewithoutanytreatmentwereusedascontrols(EG7andEL4controls).Ovalbumin-expressingtumorcells(EG7)wereinjectedunderscruffoftheneckofsomegroupsofmiceat(A)day7or(B)day14.TheparenttumorcelllineEL4thatdoesnotcontainovalbumingenewasinjectedintoothergroupsof