临床免疫定性实验的质量保证

临床免疫定性实验的质量保证临床免疫定性实验的质量保证第1页一、相关基础知识质量确保(QualityAssurance,QA)

为一产品或服务满足特定质量,要求提供充分可信性所必要有计划和系统办法。也能够说是为了提供信任表明实体能够满足质量要求，而在质量体系中实施并依据需要进行证实全部有计划和有系统活动。

临床免疫定性实验的质量保证第2页室内质量控制（InternalQualityControl,IQC)

由试验室工作人员，采取一定方法和步骤，连续评价本试验室工作可靠性程度，意在监测和控制本试验室工作精密度，提升本室常规工作中批内、批间样本检验一致性，以确定测定结果是否可靠、可否发出汇报一项工作。临床免疫定性实验的质量保证第3页室间质量评价（ExternalQualityAssessment,EQA）为客观比较一试验室测定结果与靶值差异，由第三方机构，采取一定方法，连续、客观地评价试验室结果，发觉误差并校正结果，使各试验室之间结果含有可比性。这是对试验室操作和试验方法回顾性评价，而不是用来评价实时测定结果可接收性。当EQA用来为执业许可或试验室认证目标而评价试验室操作时，常描述为试验室能力比对检验（Proficiencytesting,PT）。临床免疫定性实验的质量保证第4页常见临床免疫检验方法三大“标识”免疫检验技术:荧光标识、放射性核素标识和酶标其它标识免疫测定技术：发光物标识、金标、镧系元素标识等免疫沉淀和免疫凝集试验临床免疫定性实验的质量保证第5页

试验方法选择公认参考方法。参考卫生部临床检验中心制订临床检验操作规范中所推荐方法。依据权威部门公布方法学评价结果，选取线性关系好、灵敏度高、特异性强、稳定性好试验方法。临床免疫定性实验的质量保证第6页方法评定

参数设定：真阳性TP，真阴性TN，假阳性FP，假阴性FN敏感性:患者中阳性百分率

公式①：×100％特异性:非患者中阴性百分率公式②：×100％临床免疫定性实验的质量保证第7页方法评定

诊疗效率:准确区分患者及非患者能力公式：×100%

阳性预测值:在全部阳性结果中真患者百分率公式：×100%临床免疫定性实验的质量保证第8页方法评定

阴性预测值:在全部阴性结果中非患者百分率公式：×100%临床免疫定性实验的质量保证第9页二、影响ELISA测定原因标本搜集试验室测定汇报和解释灰区设置结果汇报和解释室内质控

临床免疫定性实验的质量保证第10页样本外源性干扰原因：标本溶血标本被细菌污染标本贮存时间过长标本凝固不全冷冻保留标本防止重复冻融临床免疫定性实验的质量保证第11页样本内源性干扰原因：类风湿因子补体异嗜性抗体、治疗性抗体、本身抗体溶菌酶磷脂药品小分子总蛋白浓度临床免疫定性实验的质量保证第12页试剂盒原因

固相材料:聚苯乙烯塑料抗原:纯化、合成和基因工程抗原抗体：多抗、单抗和基因工程抗体酶结合物：酶免疫测定关键成份色原底物：OPD和TMB运输贮存临床免疫定性实验的质量保证第13页仪器校准与标定

酶标仪校准一定要定时进行（普通使用频繁不超出六个月，最多不超出一年）。加样器及水浴用温度计均应进行计量校准后使用，前者可采取称重法校准，后者可到国家计量单位进行。临床免疫定性实验的质量保证第14页酶免疫测定操作中注意事项加样温育洗板显色比色结果判断结果汇报及解释临床免疫定性实验的质量保证第15页加样定时对移液器进行维护和校准加样不可太快，防止加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。全自动加样系统标本“交叉污染”问题。操作时差对结果影响

临床免疫定性实验的质量保证第16页

温育常采取温育温度有43℃、37℃、室温等。温育所需时间与温度成反比，即温育温度高，则所需时间相对较短。温育时，微孔板应置于水浴（浮于水面）或湿盒中，以使反应溶液温度快速与室温平衡。“边缘效应”排除:使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度。临床免疫定性实验的质量保证第17页洗板洗涤是ELISA测定过程中决定试验成败关键步骤。洗板液普通为含0.05%Tween20中性PBS。手工洗板要防止气泡残留孔内，洗板机洗板时，将洗液完全吸净，不然空白值将升高甚至出现“花板”现象。机洗次数要经过屡次试验来确定。临床免疫定性实验的质量保证第18页显色加入底物A和B后，应振荡混匀当底物为OPD(邻苯二胺）时，显色反应应避光进行；底物为TMB（四甲基联苯胺）时，要新鲜配制。显色时间：提议在37℃下反应15～30分钟后，终止反应比色测定。

临床免疫定性实验的质量保证第19页比色加酸终止显色反应后，比色测定前应振荡混匀测定时，要注意酶标仪波长是否已调至适当最好选择双波长比色测定，双波长测定能去除背景干扰，注意防止出现吸光度值为负值现象。

临床免疫定性实验的质量保证第20页灰区概念ELISA“灰区”是把定量分析正常值范围引入定性分析而建立概念。即将CO值上下一段区域定为阳性可疑。处于“灰区”样本，可经过确认试验或重复检测来确定到底是阳性还是阴性。假如重复检测依然落在“灰区”，则结果可报“阳性”。临床免疫定性实验的质量保证第21页灰区设置

灰区”设置有二种方式：⑴CO（1±CV），CV为该试剂批内CV(普通在15-20%)；⑵CO±2s，s为试验室做室内质控RCV常规条件下变异）标准差。临床免疫定性实验的质量保证第22页结果判断与汇报按照试剂盒确定Cut-off值判断结果。对于“灰区”问题，汇报方式引入“可疑”较为合理，同时对结果做必要说明。各试剂盒CO值差异及变异系数大等原因，结果缺乏可比性，位汇报结果不一致对于临床试验室来说是不可回避，也是当前医疗纠纷主要集中点和“结果互认”最大障碍，所以必须引入阳性和弱阳性汇报方式。ELISA检测原始存根必须完整而全方面地保留。临床免疫定性实验的质量保证第23页室内质量控制（IQC）

IQC是一个集体活动，不光是对试验室一次测定有效性判断，也反应了试验室测定趋势改变。IQC失控不能做为处罚依据，应建设性找出失控原因，针对其采取办法加以改进。对IQC应定时进行评价临床免疫定性实验的质量保证第24页统计质控方法质控物浓度选择每次（批）质控物数量和放置位置质控规则Levey-Jennings质控图方法“即刻法”质控方法临床免疫定性实验的质量保证第25页质控血清选择弱阳性质控血清：趋近测定下限反应物浓度水平；能灵敏反应试剂盒测定下限改变，确保弱阳性标本不被漏检。阴性质控血清：防止分析物和微生物之间出现交叉反应；能监测到出现假阳性反应常见原因。临床免疫定性实验的质量保证第26页定性免疫测定质控物浓度选择阳性质控标本选择：可选择S/CO值减去三倍批间CV与该S/CO值乘积（仍大于1质控血清作室内质控用，计算公式：

S/CO（1-3CV%）﹥1S/CO比值可在1.5~4之间弱阳性质控标本选择：

选择S/CO处于1.0~1.5左右质控血清以判断每次测定时试剂盒测定下限有效性。临床免疫定性实验的质量保证第27页每块板质控物数量及位置2～3份弱阳性质控2～3份阴性质控随机放置血液标本中间临床免疫定性实验的质量保证第28页Levey-Jennings质控图方法

基础统计学含义：稳定条件下，在20个IQC结果中不应有多于1个结果超出2SD（95.5%可信限）程度；在1000个测定结果中超出3SD（99.7%可信限）结果不多于3个。如以±3s为失控限，假失控概率为0.3%。Levey-Jennings质控图结合Westgard多规则质控方法临床免疫定性实验的质量保证第29页

Westgard多规则质控方法

l2S

：一质控点在±2S之外应警觉。

13s:一质控点在±3S之外，为失控。

R4S

：连续2个质控点相差>4S。

41S

：连续4个质控点落同侧±1S之外。７X

：连续7个质控点落均值一侧。临床免疫定性实验的质量保证第30页室内质控现实状况及应对办法

对于抗体检测，尤其是竞争法检测HBeAb、HbcAb，因为不一样试剂盒、不一样检测方法间CO值存在差异及变异系数大等原因，结果缺乏可比性，在没有统一判断标准、及明确临床意义情况下，引入弱阳性汇报方式。因为质控品不稳定，每个月需重新设置靶值对位于“灰区”和弱阳性结果及少见模式结果进行复查，防止偶然原因及孔间差对结果造成影响临床免疫定性实验的质量保证第31页质控小结

定时召开质控分析会，讨论质量控制情况要在常规条件下建立质控图参数，用S/CO比值绘制质控图采取自制质控物，是一个经济方法，关键是要确保质控物性质稳定使用新批次外部对照质控物时，必须重新绘制质控图。变异系数(cv)小于20％

临床免疫定性实验的质量保证第32页质控小结提议长久和稳定地使用一个质量好试剂盒，更换不一样厂家试剂盒后，必须重新绘制质控图。改用新批号试剂盒也应重新制作质控图。发觉质控结果失控，应填写汇报单，上交质量责任人，分析原因并决定是否发出检测汇报。

临床免疫定性实验的质量保证第33页质控小结依据不一样质控工作详细要求，在Westgard多规则方法中，实际采取“多规则”本身并非严格一成不变，而是可多可少，并能够用不一样方式进行组合。当失控时，能确定产生失控分析误差类型，有助确定失控原因以寻找处理问题方法。临床免疫定性实验的质量保证第34页乙肝检验存在问题

HBV基因组变异对病毒HBsAg和HBeAg测定影响问题，以及怎样评价