药学系毕业设计

吗替麦考酚酯胶囊相对生物利用度及生物等效性研究

指导老师：xxx（武汉xx医院）学生:江勤（药学院0x药学系）药学系毕业设计第1页序言

吗替麦考酚酯是吗替麦考酚酸（MPA）2-吗啉代乙酯。MPA是选择性非竞争可逆次黄嘌呤核苷-磷酸脱氢霉(IMPDH)抑制剂，可抑制鸟嘌呤核苷经典合成路径，对鸟嘌呤核苷酸合成另一条路径(即补救合成路径)无影响。，临床用于预防急性器官排异反应，治疗同种异体肾移植后难治性排异反应。当口服后，在体内转化为活性代谢产物霉酚酸(MPA)。服药后6-12小时后可观察至血浆MPA浓度第二次升高，97%MPA与血浆蛋白结合。为考查研制吗替麦考酚酯胶囊疗效，本试验以其代谢产物MPA作为检测指标，采取HPLC法对本品进行了生物利用度研究。

药学系毕业设计第2页目标：研究吗替麦考酚酯胶囊受试药与参比药在健康志愿者中药代动力学及生物等效性药学系毕业设计第3页方法：依据两制剂两周期随机交叉试验方案口服单剂量（1000mg）两种吗替麦考酚酯胶囊，采取高效液相色谱法测定血浆中霉酚酸浓度。DAS药代动力学程序处理血药浓度数据并计算参数。药学系毕业设计第4页结论：吗替麦考酚酯胶囊受试制剂与参比制剂为生物等效制剂。药学系毕业设计第5页一.材料

1.试药与仪器

日本岛津Shimadzu高效液相色谱仪试验制剂：四川制药制剂有限企业参比试剂：上海罗氏制药企业内标：萘普生色谱纯：乙腈分析纯：乙酸铵，乙酸药学系毕业设计第6页二.方法

2.1受试对象：22名男性健康志愿者2.2试验方法：受试者随机分成两组，一组服试验制剂，另一组服参比制剂，间隔一周后交叉服药。服药前隔夜禁食12h。参考临床惯用剂量，次日清晨分别空腹口服参比胶囊或受试胶囊各1000mg（250mg×4），用200ml温开水送服。服药2h后方可饮水，4h后统一进低脂清淡饮食。服药前（0h）及服药后0.167，0.33，0.5,0.75，1，1.5，2，4，6，8，10，12,24,36,48h肘静脉采血4mL。采血后离心分离血浆，血样于-80℃以下储存待测。

药学系毕业设计第7页2.3血样处理方法精密吸收血浆200µl置1.5ml具塞离心管中，加入200µl萘普生内标溶液（15.15µg·mL-1），于漩涡振荡器上振摇混合5min,15000rpm离心15min，取上清液于另一试管中，取20µL进样，进行HPLC分析，测定霉酚酸(血药)和萘普生(内标)峰面积。药学系毕业设计第8页三.结果

3.1含量分析方法专属性试验空白血浆霉酚酸标准品

药学系毕业设计第9页

空白血浆+药品+内标受试者服药后+内标

药学系毕业设计第10页结果表明：

在选定色谱条件下，霉酚酸与内标刚好分离完全。空白血浆中内源性杂质峰对霉酚酸和内标测定没有干扰。药学系毕业设计第11页3.2血浆中吗替麦考酚酯标准曲线和定量下限

霉酚酸标准溶液配制：精密称取霉酚酸对照品30.62mg，用甲醇-水溶解并定容至100mL容量瓶中，配得306.2µg·mL-1标准贮备液。分别用甲醇-水依次稀释配置浓度为153.1,76.55,30.62,15.31,7.655,3.83,0.766,0.383µg·mL-1药学系毕业设计第12页

内标溶液配制：精密称取萘普生15.15mg，用乙腈溶解并定容，制得151.5µg·mL-1内标贮备液。精密移取10.0ml至100ml容量瓶中，用乙腈定容至刻度，制得15.15µg·mL-1内标标准溶液药学系毕业设计第13页建立标准曲线分别精密移取霉酚酸标准系列溶液50µl,置1.5ml具塞离心管中，加入空白血浆150µl,制成霉酚酸血浆浓度分别为0.09569,0.1914,0.9569,1.914,3.828,7.655,19.134,38.28,76.55µg·mL-1血浆样本，按“血样处理方法”处理，进行色谱分析，统计霉酚酸色谱峰面积(As)与内标峰面积(Ai)。以所得峰面积比值(As/Ai)对浓度(C,µg·mL-1)进行线性回归，得霉酚酸血浆样本标准曲线药学系毕业设计第14页回归方程：

R=0.0927·C+0.0087，回归系数r=0.9999，线性范围为0.09569~76.55µg·mL-1。定量下限为0.09569µg·mL-1。药学系毕业设计第15页3.3方法精密度取空白血浆150µL，制备低、中、高3个浓度（霉酚酸血浆浓度分别为0.1914，7.655，76.55µg.mL-1）质控样品（QC），每一浓度进行5样本分析，连续测定3天。按“血样处理”方法操作，测定样品及内标峰面积，计算其峰面积比值（R），并按回归方程求出对应浓度结果表明日内、日间相对标准差（RSD）均小于10%药学系毕业设计第16页3.4方法回收率

绝对回收率霉酚酸血浆浓度分别为0.1914，7.655，76.55µg.mL-1标准血样，按“血样处理方法”处理。另用150µL纯水代替空白血浆置于离心管中，得到对应浓度霉酚酸溶液，不作样品处理。以此为标准，计算绝对回收率低、中、高三种浓度平均绝对回收率为87.95%、101.68%、100.99%。药学系毕业设计第17页相对回收率取空白血浆150µL，制备低、中、高3个浓度（霉酚酸血浆浓度分别为0.1914，7.655，76.55µg.mL-1）标准血样，每一浓度进行5样本分析。按“血样处理方法”处理，进样20μl，测定样品及内标峰面积，计算其峰面积比值（R），统计色谱图，并按回归方程求出对应浓度，以此计算相对回收率。低、中、高三种浓度平均相对回收率为106.11%、103.64%、100.08%药学系毕业设计第18页3.5方法稳定性考查

本试验考查了未经处理及处理后血浆样品经室温放置0-12h稳定性，未经处理霉酚酸血浆样品-80℃以下低温存放1个月、经历3次冷冻－解冻循环稳定性。稳定性考查时，取空白血浆150µL，制备霉酚酸低、中、高3个浓度标准血样。数据表明，处理前后血浆样品室温放置12h内稳定（RSD<5%），未经处理霉酚酸血浆样品-80℃以下低温存放1个月内稳定（RSD<5%）、经历3次冷冻－解冻循环后稳定（RSD<5.00%）。霉酚酸贮备液-80℃下保留30天稳定。药学系毕业设计第19页3.6血浆样品测定与质量控制

受试者未知血浆样品测定时，均建立随行标准曲线，同时分析低、中、高浓度质控样品，用新建随行标准曲线计算质控样品和未知样品浓度药学系毕业设计第20页3.7药时曲线

均数对比0.5.10.15.20.25.30.35.40.45.50.0204060时间(h)浓度(μg/ml)R药A药药学系毕业设计第21页统计学分析

单次给药试验，参数AUC和Cmax在两种制剂和试验周期间无显著性差异（P>0.05）。试验药AAUC0→48

90%可信区间为100.0%～108.1%，AUC0→∞90%可信区间为99.0%～111.0%，均落在参比制剂80％～125％之间；试验药ACmax90%可信区间为100.7%～129.6%，落在参比制剂70％～143％之间；Tmax在受试制剂与参比制剂间无显著性差异（p>0.05）。单次给药血药浓度测定结果表明，试验药品与参比药品是生物等效。药学系毕业设计第22页四.讨